WB注意這些問題，新手也能做出滿意結果！
Western blot（WB）是檢測蛋白質及蛋白質翻譯后修飾的經典方法，可在簡單或復雜的生物樣品中提供有關靶蛋白的半定量或定量數據。WB 步驟復雜，通常包括：蛋白樣本制備→電泳→轉膜→封閉→孵育一抗→孵育二抗→顯影→分析。WB 任何過程出現 Bug 均可影響結果的重復性與靈敏度，因此必須注意將 WB 的每個步驟標準化。今天給大家分享 WB 各個過程中需要注意的細節！樣品制備有效的樣品制備是影響 WB 可重復性的非常重要的因素。需考慮以下問題：1、靶蛋白是可溶/不可溶蛋白，細胞質/膜蛋白？2、溶解的蛋白或其翻譯后修飾的維持是否需要添加額外的緩沖成分 (例如洗滌劑、酶抑制劑)？3、蛋白質定量的方法是什么，緩沖成分會干擾蛋白定量嗎？BCA 蛋白定量檢測法是總蛋白質定量的常用方法，其蛋白間差異較考馬斯染料法的更小，但與還原劑、螯合劑不兼容（兼容去垢劑）。電泳1、最合適的凝膠濃度是什么？不同分子量的蛋白分離膠濃度對應表：2、哪種電泳緩沖......閱讀全文
WB顯影要多久
每個顯影試劑盒都不一樣，建議看說明書。實際情況視熒光強度而定，你看顯出一點兒樣子了，就趕緊撈出來，不然片子就太黑了。在加熒光劑后，反應大概一到四分鐘。小心把膜放到暗盒里，放好后再也不要移動膜，否則熒光會消失。膜上覆蓋一張保鮮膜，小心，鋪展。將準備好的膠片放在膜上，放上去后也不要再移動了。然后壓片。可
WB操作規程
一、設備和試劑1．設備① 電泳電源Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell,Mini Teans-Blot Module,and PowerPac Basic Power Supply (BIO-RAD,Catalog#165-3323)② 電泳儀及附件Mini-PRO
WB實驗問題總結
答：原因有很多：a) 你的細胞中不表達這種蛋白質，換一種細胞；b) 你的細胞中的蛋白質被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c) 你的抗體不能識別目標蛋白，多看看說明，看是否有問題。答：a) 有沉淀可能因為你的蛋白沒有變性完全，可以適當提高SDS 濃度，同時將樣品煮沸時間延長；b) 也不排
WB顯影要多久
每個顯影試劑盒都不一樣，建議看說明書。實際情況視熒光強度而定，你看顯出一點兒樣子了，就趕緊撈出來，不然片子就太黑了。在加熒光劑后，反應大概一到四分鐘。小心把膜放到暗盒里，放好后再也不要移動膜，否則熒光會消失。膜上覆蓋一張保鮮膜，小心，鋪展。將準備好的膠片放在膜上，放上去后也不要再移動了。然后壓片。可
WB實驗小問答
? WB又稱免疫印記法.是將生物大分子物質通過不同途徑轉移到固相載體的過程。其靈敏，可達ng級，用Ecl顯色法理論上可達pg 級。方便，特異性高。今天給大家分析的是western blot實驗中那些常見的問題，這份干貨內容，請收好啦！? ? western blot 常見問題有那些？? ? 1.為什
wb二抗怎么融化
wb 二抗融化，wb 抗體用5%的脫脂奶粉或者1%的BSA （千分之一的TBST的溶液 )配置，可以先讓抗體和奶粉或者BSA 蛋白非特異結合，這樣就不會與PVDF 膜上的蛋白結合了。
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
WB實戰之抗體孵育
由于抗原和抗體特異性結合的效率是非特異性結合的數百萬--數十億倍，所以當特異性抗體與非特異性'抗體'（不好描述，指添加在抗體稀釋液中的封閉蛋白，我們可以把它們看成非特異性的一抗）競爭時，盡管抗體稀釋液中封閉蛋白的濃度是一抗濃度20K：1以上，在碰撞幾率相同的條件下，由于時間的積累
WB實驗的那些事兒
1.二抗需和一抗宿主的物種相同（如一抗來自兔，二抗為抗兔抗體）。原因： 一抗和二抗不匹配。2.參照說明書，設置陽性對照。原因：一抗不識別檢測物種蛋白。3.每泳道蛋白上樣量不低于20~30μg，設置陽性對照。原因：抗原量不足。4.使用可逆染色劑如麗春紅S檢測轉膜效果，檢測轉膜操作是否正確。PVDF膜預
WB新時代開啟－GE醫療發布Amersham－WB蛋白免疫印跡系統
2014年9月24日，2014慕尼黑上海分析生化展在上海新國際博覽中心隆重拉開帷幕。GE醫療生命科學亮相2014慕尼黑上海分析生化展，舉辦新品發布會全球同步發布Western
WB一抗用什么稀釋
建議起始濃度1:200開始（當然你也可以1:100，如果你的背景不高的話），倍比稀釋，不是再做1:100-1:1000稀釋，注意了。其實沒有必要分裝，一般都會添加保護劑的。如果你一定要分裝，建議原液分裝或是10稀釋后分裝。溶液的濃度取決于溶解在溶劑內的物質的多少。溶解度則是溶劑在特定溫度下，可以溶解
wb實驗的原理和步驟
WB實驗是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將混合蛋白質樣品分離后，利用特殊虹吸或電場裝置印跡至固相介質（例如PVDF膜）上。再以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與相對應的第一抗體特異性結合，之后再與酶或同位素標記的第二抗體相結合，最終通過底物顯色或放射自顯影來檢測特異性目的基因表達的蛋白成分。
wb二抗室溫幾小時
二抗一般室溫就行,沒要求要37度,一個小時差不多就夠了。
wb膜甲醇活化時間
不超過15秒。根據該物質簡介可知，該物質的活化時間不超過15秒。pvdf膜在使用是需預處理，用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團，使其更容易與帶負電的蛋白結合。pvdf膜具有較高的機械強度。
WB－抗體能用什么稀釋
wb抗體用5%的脫脂奶粉（1‰TBST溶液）或者1%的BSA（1‰TBST溶液）配置，可以先讓抗體與奶粉或BSA蛋白非特異結合，就不會與PVDF膜上的蛋白結合了。
免疫印跡（Wb)的原理
(1)是一種蛋白質測定的技術,集合凝膠電泳的高分辨率,固定免疫測定的敏感及特異性和不需要對靶蛋白進行放射性核素標記,在固相膜上保持的時間很長等優點。(2)可以在樣本中檢測到微量到微量的抗原,以及在多克隆抗體中檢測到單克隆抗體,還可以對已經轉移到固相膜上面的蛋白質進行連續的分析。
magej分析wb條帶如何水平
1、首先，打開ImageJ，并且導入要分析的條帶。隨后在Image-Type中選擇8-bit。在Process-subtractbackground中設置rollingballradius=50pixel，記得勾選lightbackground哦。2、其次，進行分析參數的設置。這里選擇Analyze
wb膜甲醇活化時間
不超過15秒。根據該物質簡介可知，該物質的活化時間不超過15秒。pvdf膜在使用是需預處理，用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團，使其更容易與帶負電的蛋白結合。pvdf膜具有較高的機械強度。
wb條帶怎么分析粗細深淺
根據蛋白質表達量分析。wb就是艾滋病抗體確證試驗，主要是監測env的條帶，只要出現兩個env條帶，就可以判定是陽性，所以主要是檢測env條帶。wb條帶粗細深淺表示蛋白質表達量，所以粗細深淺根據蛋白質表達量分析。蛋白質表達量是包含蛋白質的聚集體形態、單體形態和含有fc的片段的加和值。
wb顯影液顯影原理
相紙、膠卷表面保護基下,是溴化銀涂層(還有其他的從略),溴化銀見光分解,顯影液與其發生化學反應,分解析出。 拍照好的底片,圖像在上面明暗不同,分解程度也就不一樣了。沖洗出來就是底片。
wb電泳時電流多少正常
看電泳槽多大，兩電極直接的距離，每cm 3~5V。例如一個20cm的電泳槽，電壓就應該設為60~100V間。電壓大，速度就快。還要考慮DNA長度，小片段DNA適宜用比較低的電壓。DNA分子提取得到以后，需要通過電泳技術來檢測其數量和質量。自從瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠被引入核酸研究以來，按相對分子質量大
WB一抗用什么稀釋
建議起始濃度1:200開始（當然你也可以1:100，如果你的背景不高的話），倍比稀釋，不是再做1:100-1:1000稀釋，注意了。其實沒有必要分裝，一般都會添加保護劑的。如果你一定要分裝，建議原液分裝或是10稀釋后分裝。溶液的濃度取決于溶解在溶劑內的物質的多少。溶解度則是溶劑在特定溫度下，可以溶解
wb條帶放三天顯影
顯影。wb條帶放三天看到明顯的熒光條帶，先壓三十秒。顯影時，把膠片完全浸入顯影液，用透明的或者白色的盒子，看到顯影，看到膠片上有黑色條帶。wb就是艾滋病抗體確證試驗，監測env的條帶，出現兩個env條帶，判定是陽性檢測env條帶。
wb條帶周邊發黑中間白
wb條帶周邊發黑中間白的原因是過高的蛋白上樣量或一抗和二抗濃度過高都會促使底物過快的消耗，導致我們在做化學發光檢測時，發光底物已經消耗殆盡而形成空斑。要解決條帶中出現整條白色空斑，需要減少蛋白上樣量、稀釋一抗和二抗的濃度。如果條帶中出現白圈的話，是轉膜時候，膜與膠之間有氣泡，需要在制作“三明治”時，
WB條帶是白色怎么補救
WB條帶是白色無法補救。WB做出來是白色的條帶，一抗、二抗均已稀釋也不管用。二抗濃度或者目的條帶豐富過高，很快消耗了底物，所以形成了白色條帶。WB在做的時候需要稀釋二抗濃度就可以了。
WB上樣量應為多少
>這要根據你做的蛋白表達量多少，一般是用DAB顯色要50-100μg，用ecl曝光上樣量為20-40μg。但根據你蛋白表達量的不同目標蛋白絕對量DAB法至少50pg，ecl法至少20pg。我也用組織作過western，蛋白濃度的確很高。通常我上50-100ug，足夠了。如果蛋白濃度太高導致上樣過小，