建議起始濃度1:200開始(當然你也可以1:100,如果你的背景不高的話),倍比稀釋,不是再做1:100-1:1000稀釋,注意了。其實沒有必要分裝,一般都會添加保護劑的。如果你一定要分裝,建議原液分裝或是10稀釋后分裝。溶液的濃度取決于溶解在溶劑內的物質的多少。溶解度則是溶劑在特定溫度下,可以溶解最多多少物質。 有機溶劑主要用于干洗(例如四氯乙烯)。作涂料稀釋劑(例如甲苯、香蕉水、松香水、松節油),作洗甲水或去除膠水(例如丙酮,醋酸甲酯,醋酸乙酯),除銹(例如己烷),作洗潔精(檸檬精),用于香水(酒精)跟用于化學合成......閱讀全文
免疫沉淀 (Immunoprecipitation,IP) 是利用抗原抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后,再與ProteinA/G偶聯的agarose或Sepharose珠子孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G-抗體-目的蛋白復合物,沉淀經過洗滌
說起免疫印跡(Western Blot)檢測,想必大家都很熟悉了,不就是WB嗎?每天都做啊,白底黑帶,但是最近經常閱讀SCI文獻(特別是高分的)小伙伴可能會發現,近兩年發表很多高影響因子的文獻的WB結果圖發生了大變樣:白底變成了黑底,條帶從黑
WB免疫印跡法,也稱免疫轉移技術IBT(Immunoblotting),是Towbin將1975年Southern發明的Soutnern blotting技術應用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫學檢測方法。其操作簡便,主要用于未知蛋白檢測及抗原組分、抗原決定簇鑒定,同時也用于未知抗體的
一、梅毒體外診斷試驗 1.梅毒的體外診斷試驗分類 梅毒的體外診斷試驗按試驗所用抗原分為非密螺旋體抗體試驗(nontreponemal antibody test, NTrAT)和密螺旋體抗體試驗(treponemal antibody test, TrAT)。NTrAT包括快速血漿反應素環狀
WB免疫印跡法,也稱免疫轉移技術IBT(Immunoblotting),是Towbin將1975年Southern發明的Soutnern blotting技術應用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫學檢測方法。其操作簡便,主要用于未知蛋白檢測及抗原組分、抗原決定簇鑒定,同時也用于未知抗體的檢測和單
在做免疫沉淀實驗時候,很多的情況下遇到重鏈輕鏈的問題時候,不知道選擇哪種的二抗試劑比較好,都知道一種好的二抗產品是可以保證實驗結果的準確性,那么選擇IPkine特異性抗體是可以避免的,以下是經驗之談:為了避免實驗中重鏈干擾的問題,艾美捷向您建議二種解決方案。一種是選擇不同種屬來源的一抗分別進行IP和
成功完成一項Western Blot檢測,必須滿足4個條件: 凝膠洗脫:轉移期間蛋白質必須從凝膠中洗脫出來,如果蛋白質還截留在凝膠中,將無法在膜上進行分析。 吸附到膜上:在轉移過程中蛋白質必須吸附到膜上,如果蛋白不吸附,將無法在膜上進行分析。 處理期間仍截留在膜上:在轉移后的處
在免疫學實驗中,比如WB,IHC,IF等,大家都知道選著好正確的一抗,往往實驗就成功了一大半,因此,往往很多研究者便會忽視對二抗,以及其它試劑盒品質的追求。二抗是一種相對而言比較穩定的產品,包裝大,因此很多實驗室都會公用一個二抗。但如果二抗沒有選擇好的話,影響的可能就是一整個實驗室或者課題組了。艾美
Huvec細胞: Huvec細胞(固定),用SiR-actin染色,共聚焦顯微鏡成像。 大鼠海馬神經元: 用SiR-actin染色培養大鼠海馬神經元的STED圖像。肌動蛋白環(條紋)周期性為180nm。
一、設備和試劑1.設備① 電泳電源Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell,Mini Teans-Blot Module,and PowerPac Basic Power Supply (BIO-RAD,Catalog#165-3323)② 電泳儀及附件Mini-PRO
WB檢測之二抗 二抗選擇 二抗是用一抗免疫動物制備的抗一抗的抗體,選擇范圍較窄,基本是商品化的,在不考慮二抗修飾類型的前提下,二抗的選擇需要遵循以下原則:二抗來源種屬、一抗來源種屬和抗原來源種屬互不相同。例如如果研究對象是人的蛋白X,選擇了鼠抗X一抗,則可選擇兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二
由于抗原和抗體特異性結合的效率是非特異性結合的數百萬--數十億倍,所以當特異性抗體與非特異性'抗體'(不好描述,指添加在抗體稀釋液中的封閉蛋白,我們可以把它們看成非特異性的一抗)競爭時,盡管抗體稀釋液中封閉蛋白的濃度是一抗濃度20K:1以上,在碰撞幾率相同的條件下,由于時間的積累
【摘要】 目的 探討本地輸血前患者乙型肝炎(HBV)、丙型肝炎(HCV)、艾滋病病毒(HIV)、梅毒等疾病的感染狀況。方法 對輸血前5044例患者用酶聯免疫法、免疫印跡(WB)檢測乙肝、丙肝、艾滋病和梅毒標志物。結果 乙肝病毒表面抗原(HBsAg)年度感染率范圍在11.88%
WB檢測之二抗二抗選擇二抗是用一抗免疫動物制備的抗一抗的抗體,選擇范圍較窄,基本是商品化的,在不考慮二抗修飾類型的前提下,二抗的選擇需要遵循以下原則:二抗來源種屬、一抗來源種屬和抗原來源種屬互不相同。例如如果研究對象是人的蛋白X,選擇了鼠抗X一抗,則可選擇兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。二抗選擇要考慮的問
PCR是從轉錄水平上檢測目的基因,而非蛋白,從轉錄到翻譯還有復雜的過程,因此基因的表達量與蛋白的表達量不一定是正相關的.WB只能半定量,但是可以檢測細胞膜蛋白,這點ELISA做不到ELISA可用定量方法檢測蛋白,也就是說你可以觀察不同濃度刺激物對目的蛋白的影響基因翻譯蛋白質, PCR可以檢測基因的表
WB實驗總做不好,那么如何進行WB實驗質控呢? 做過WB實驗的小伙伴都經歷過成像時忐忑不安,出來結果時的彷徨無措,為什么條帶沒有出啦,為什么背景這么高,為什么受傷的總是我,看著旁邊小伙伴漂亮的結果圖,心生羨慕嫉妒,那么小編給大家整理總結了如何進行WB的質控和注意哪些檢查點。 蛋白樣品
隨著戊型肝炎病毒(HEV)分子克隆技術的成功建立,HEV分子生物學的研究取得了極大進展,與之相關的HEV檢測方法也正在不斷完善。該方法包括兩方面,即采用基因工程重組抗原建立的抗體診斷方法,以及采用逆轉錄——聚合酶鏈反應(RT-PCR)建立的基因診斷方法,分別檢測抗HEV及HEV RNA。1 抗HE
WB實驗總做不好,那么如何進行WB實驗質控呢?做過WB實驗的小伙伴都經歷過成像時忐忑不安,出來結果時的彷徨無措,為什么條帶沒有出啦,為什么背景這么高,為什么受傷的總是我,看著旁邊小伙伴漂亮的結果圖,心生羨慕嫉妒,那么小編給大家整理總結了如何進行WB的質控和注意哪些檢查點。蛋白樣品:準備好裂解液后,使
ELISA試劑盒符號物的特異性:一般根據試驗操作的試驗辦法不會運用帶有符號的一抗,比方WB、IHC等,都是經過二抗類的試劑符號到達結果出現的意圖。但是根據儀器分析的一些試驗,可能就會運用到直接符號的一抗,比方流式試驗,那么需求了解到自己即將運用的儀器能檢測到的熒光規模,針對不通的參數要求選擇對應的符
(A)免疫擴散法 這種方法簡便、準確,最常用。被檢的McAb樣品通常為雜交瘤細胞培養上清液,由于其中單抗的濃度較低,應先將其濃縮10-20倍左右再檢測。小鼠腹水中的單抗濃度雖很高,但也含有小鼠本身的各類Ig,它們也會與相應抗血清發生反應,使鑒定結果出現混亂,即使將腹水稀釋10-20倍后再檢
盡管仍未完全了解糖尿病的確切原因,但已知肥胖會增加患上不同類型糖尿病的風險。肥胖如何導致II型糖尿病?一個眾所周知的事實是,如果您超重或肥胖,則罹患II型糖尿病的風險更大,特別是如果您的腹部脂肪過多。 &nbs
二抗選擇(1)種屬來源。主要根據一抗種屬來源而決定二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。(2)標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。免疫組化,WB二抗主要選擇HRP,Biotin標記的二抗,而免疫熒光染色可按實驗需要選擇不同熒光素標記的二抗,如FITC、
紅外波長熒光抗體備受青睞原因你知道嗎?美國是最早實現親和素純化二抗商業化的生物公司,同時也是世界上最大的二抗和底物顯色系統的生產。DyLight系列熒光二抗是美國KPL公司的優勢產品,其一系列產品是目前市場上口碑很高的熒光二抗,并備受關注。其中,KPL公司生產的 DyLight 680(完全替代 I
辣根過氧化物酶(HRP)標記羊抗兔IgG應用:WB(1:1000 - 1:50000)、ELISA(1:500 - 1:10000) IHC(1:50 - 1:500)。 由于具體實驗中檢測方法的靈敏度,溫度及孵育時間等因素均可影響抗體最適工作濃度,所以實驗人員進行特定實驗時,需根據具體情況
驗證抗體對于WB結果的一致性和重復性是至關重要的,即確認抗體能特異性識別感興趣的蛋白,抗體與其他蛋白的交叉反應性情況。在您的論文提交給期刊發表之前,經常需要驗證抗體的特異性,但并非所有人都花時間進行驗證。或者很多人都認為他們使用抗體進行了免疫共沉淀驗證,因而不需要再通過蛋白質印跡進行驗證
驗證抗體對于WB結果的一致性和重復性是至關重要的,即確認抗體能特異性識別感興趣的蛋白,抗體與其他蛋白的交叉反應性情況。在您的論文提交給期刊發表之前,經常需要驗證抗體的特異性,但并非所有人都花時間進行驗證。或者很多人都認為他們使用抗體進行了免疫共沉淀驗證,因而不需要再通過蛋白質印跡進行驗證。然而
驗證抗體對于WB結果的一致性和重復性是至關重要的,即確認抗體能特異性識別感興趣的蛋白,抗體與其他蛋白的交叉反應性情況。在您的論文提交給期刊發表之前,經常需要驗證抗體的特異性,但并非所有人都花時間進行驗證。或者很多人都認為他們使用抗體進行了免疫共沉淀驗證,因而不需要再通過蛋白質印跡進行驗證。然而,抗體
驗證抗體對于結果的一致性和重復性是至關重要的,即確認抗體能特異性識別感興趣的蛋白,抗體與其他蛋白的交叉反應性情況。在您的論文提交給期刊發表之前,經常需要驗證抗體的特異性,但并非所有人都花時間進行驗證。或者很多人都認為他們使用抗體進行了免疫共沉淀驗證,因而不需要再通過蛋白質印跡進行驗證。然而,抗體與抗
驗證抗體對于結果的一致性和重復性是至關重要的,即確認抗體能特異性識別感興趣的蛋白,抗體與其他蛋白的交叉反應性情況。在您的論文提交給期刊發表之前,經常需要驗證抗體的特異性,但并非所有人都花時間進行驗證。或者很多人都認為他們使用抗體進行了免疫共沉淀驗證,因而不需要再通過蛋白質印跡進行驗證。然而,抗體與抗
中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心繼發布《全國艾滋病檢測技術規范(2009 年版)》后,近日即將發布 2015 年版《全國艾滋病檢測技術規范》,此規范堪稱艾滋病檢測實驗室的「紅寶書」,適用于疾病控制中心艾滋病確認實驗室和醫療機構的艾滋病初篩實驗室的 HIV 檢測技術操作。今天來一