關于基因表達系列分析的實驗路線的介紹
（1） 以biotinylated oligo(dT）為引物反轉錄合成cDNA，以一種限制性內切酶（錨定酶 Anchoring Enzyme， AE）酶切。錨定酶要求至少在每一種轉錄物上有一個酶切位點，一般4堿基限制性內切酶能達到這種要求，因為大多數mRNA要長于256堿基（44）。通過鏈霉抗生物素蛋白珠收集cDNA3′端部分。對每一個mRNA只收集其polyA尾與最近的酶切位點之間的片段。 （2） 將cDNA等分為A和B兩部分，分別連接接頭A或接頭B。每一種接頭都含有標簽酶（Tagging Enzyme TE）酶切位點序列（標簽酶是一種Ⅱ類限制酶，它能在距識別位點約20堿基的位置切割DNA雙鏈）。接頭的結構為引物A/B序列+標簽酶識別位點+錨定酶識別位點。 （3） 用標簽酶酶切產生連有接頭的短cDNA片段（約9～10堿基），混合并連接兩個cDNA池的短cDNA片段，構成雙標簽后，以引物A和B擴增。 （4） 用錨定酶切......閱讀全文
關于基因表達系列分析的實驗路線的介紹
（1） 以biotinylated oligo(dT）為引物反轉錄合成cDNA，以一種限制性內切酶（錨定酶 Anchoring Enzyme， AE）酶切。錨定酶要求至少在每一種轉錄物上有一個酶切位點，一般4堿基限制性內切酶能達到這種要求，因為大多數mRNA要長于256堿基（44）。通過鏈霉抗生
基因表達的系列分析實驗
SAGE(Velculescuetal.1995) 是基于 PCR 技術的一種高靈敏度研究基因表達的方法，可得到 mRNA 文庫的定性及定量信息。自 1995 年此技術產生以來，發表了大量的相關文章，表明 SAGE 可同時檢測大量基因的表達水平的變化。實驗材料玻璃及塑料器皿試劑、試劑盒溶液與緩沖液引
基因表達的系列分析實驗
實驗材料?玻璃及塑料器皿試劑、試劑盒?溶液與緩沖液引物儀器、耗材?試劑盒MPC-EPCR儀Gene PulserII 型系統實驗步驟 一、一般原則若用于 SAGE 的 RNA 有足夠的量，最好用 2.5~5 ug polyA+RNA, 可按實驗方案 A 進行。這里我們還提供了實驗方案 B，它在多
基因表達的系列分析實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 玻璃及塑料器皿 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液 引物
基因表達系列分析實驗（SAGE）
實驗材料感興趣的細胞或組織試劑、試劑盒糖原EDTA緩沖液SDSBSATween 20連接子T4 DNA 連接酶BsmFIPC8SeeDNA乙酸鈉乙醇DMSOPCR引物乙酸銨DNA ladder聚丙烯酰胺 TBE凝膠DNA參照pZErO-1 質粒TE緩沖SOC培養液Tris · Cl儀器、耗材微量離心
基因表達的系列分析
中文名稱基因表達的系列分析英文名稱serial analysis of gene expression;SAGE定 義通過構建較短的表達序列標簽規模化地檢測基因表達種類及其豐度的實驗技術。應用學科遺傳學（一級學科），基因組學（二級學科）
基因表達系列分析實驗（SAGE）（一）
實驗方法原理 實驗材料 感興趣的細胞或組織試劑、試劑盒 糖原EDTA緩沖液SDSBSATween 20連接子T4 DNA 連接酶BsmFIPC8SeeDNA乙酸鈉乙醇DMSOPCR引物乙酸銨DNA ladder 聚丙烯酰胺 TBE凝膠DNA參照pZErO-1 質粒TE緩沖SOC培養液Tris · C
基因表達系列分析實驗（SAGE）（二）
31. 乙醇沉淀：11.5 ml 樣品10 ul SeeDNA100 ul 糖原5.1 ml 7.5 mol/L 乙酸銨38.3 ml 100％ 乙醇干冰/甲醇浴 15 min。然后室溫溶化 2 min。32. 輕輕渦旋混勻，臺式離心機的吊桶轉子室溫約 3000 g （4000 r/min） 離心
基因表達系列分析實驗（SAGE）（三）
58. 用 1：10 000 的 SYBR Green I 染 15 min。在 UV 盒上觀察，分出感興趣的區帶。59. 把每一塊凝膠放入底部有約 0.5 mm 小洞的 0.5 ml 微量離心管中（用 21-G 針頭刺的）。60. 把 0.5 離心管連同凝膠塊放入 2.0 ml 的硅烷化的離心管里
基因表達系列分析實驗（SAGE）（四）
83. 用作測序的 2 ul PCR 產物（所需的確切用量取決于測序的方案，并應當優化）用下述方法處理：0.1 ul 外切核酸酶 I0.1 ul 蝦堿性磷酸酶1.8 ul 50 mmol/L Tris·Cl，pH 8. 0加 2 ul 消化混合液到 2 ul DNA 中。84. 在熱循環儀上進行反應
基因表達系列分析簡介
1995年Velculescu等提出了基因表達系列分析(Serial Analysis of Gene Expression,SAGE)技術，能同時對上千個轉錄本進行研究。 SAGE是一種快速分析基因表達信息的技術,它通過快速和詳細分析成千上萬個表達序列標簽（Expressed Sequenc
基因表達系列分析的優點和應用的介紹
SAGE是一項快捷、有效的基因表達研究技術，任何具備PCR和手動測序器具的實驗室都能使用這項技術，結合自動測序技術能夠在3個小時內完成1000個轉錄物的分析。另外使用不同的錨定酶（識別5～20堿基的Ⅱ類核酸內切酶），使這項技術更具靈活性。 首先SAGE可應用于人類基因組研究。1995年 Vel
什么是基因表達的系列分析？
中文名稱基因表達的系列分析英文名稱serial analysis of gene expression;SAGE定 義通過構建較短的表達序列標簽規模化地檢測基因表達種類及其豐度的實驗技術。應用學科遺傳學（一級學科），基因組學（二級學科）
基因表達系列分析的原理簡介
第一、一個9～10堿基的短核苷酸序列標簽包含有足夠的信息，能夠唯一確認一種轉錄物。例如，一個9堿基順序能夠分辨262144個不同的轉錄物（49），而人類基因組估計僅能編碼80000種轉錄物，所以理論上每一個9堿基標簽能夠代表一種轉錄物的特征序列。 第二、如果能將9堿基的標簽集中于一個克隆中進行
關于基因表達的介紹
基因的表達過程是將DNA上的遺傳信息傳遞給mRNA,然后再經過翻譯將其傳遞給蛋白質。在翻譯過程中tRNA負責與特定氨基酸結合，并將它們運送到核糖體，這些氨基酸在那里相互連接形成蛋白質。這一過程由tRNA合成酶介導，一旦出現問題就會生成錯誤的蛋白質，進而造成災難性的后果。值得慶幸的是，tRNA分子
關于基因表達的折疊的介紹
剛從mRNA序列翻譯過來的蛋白質都是未折疊或無規卷曲的多肽,沒有任何的三維結構。氨基酸彼此相互作用使得多肽從無規卷曲折疊成其特征性和功能性三維結構。氨基酸序列決定l了蛋白質的三維結構,且正確的三維結構對于功能至關重要,盡管功能蛋白的某些部分可能仍未展開。伴侶蛋白的酶有助于新形成的蛋白質獲得折疊,
關于基因表達的轉錄機制介紹
基因表達的轉錄過程由RNA聚合酶（RNAP）進行，以DNA為模板，產物為RNA。RNA聚合酶沿著一段DNA移動，留下新合成的RNA鏈。 基因組DNA由兩條反向平行和反向互補鏈組成，每條鏈具有5'和3'末端。這兩條鏈分別稱為“模板鏈”（產生RNA轉錄物的模板）和“編碼鏈”（含有轉
關于基因表達載體的基本介紹
基因表達載體的構建（即目的基因與運載體結合）是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其構建目的是使目的基因能在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發揮作用。 基因工程（genetic engineering） 構成：啟動子、終止子、標記基因、目的基因 又
關于基因表達順式作用的介紹
順式作用是生物體進行基因表達調節的方式之一，與“反式作用”相對。順式作用指的是，調節因子是與被調節基因同處于一條DNA鏈上的另一端DNA片段而進行的調節。 以二倍體生物為例，對于某一位置的基因，兩條同源染色體上會有一對等位基因和一對相應的順式調節因子。如果其中一個順式調節因子發生突變而產生
關于基因表達反式作用的介紹
與“順式作用”相對，反式作用指的是其作用范圍可以影響到不同DNA鏈上的基因（順式作用的調控僅限于同一條鏈上的基因），故名。 反式作用的調控原理是借助產生有調控功能的蛋白質而進行的。由于蛋白質合成之后的選擇性結合不限于表達它的這條DNA鏈，所以相比于順勢作用，反式作用的調控范圍更廣。 例如，某
關于LacZ基因的時空表達介紹
轉基因小鼠實驗系統已被廣泛用于單一基因功能的研究，如組織特異表達和發育程序的調控。產生轉基因小鼠最普遍的方法是將DNA通過顯微注射注入受精卵的原核中。在研究小鼠胚胎發育過程中外源基因的時空表達方面，將融合基因注射進入小鼠受精卵原核中更是一條行之有效的途徑。 通過上述方法，將SV40早期啟動子和
關于基因表達的轉錄調控介紹
基因表達的轉錄調控可分為三種主要途徑：1）遺傳調控（轉錄因子與靶標基因的直接相互作用）；2）調控轉錄因子與轉錄機制相互作用，3）表觀遺傳調控（影響轉錄的DNA結構的非序列變化）。 通過轉錄因子直接調控靶標DNA表達是最簡單和最直接的轉錄調控改變轉錄水平的方法。基因的編碼區周圍通常都具有幾個蛋白
關于基因表達的折疊機制介紹
基因表達機制：剛從mRNA序列翻譯過來的蛋白質都是未折疊或無規卷曲的多肽，沒有任何的三維結構。氨基酸彼此相互作用使得多肽從無規卷曲折疊成其特征性和功能性三維結構 [3]。氨基酸序列決定l了蛋白質的三維結構，且正確的三維結構對于功能至關重要，盡管功能蛋白的某些部分可能仍未展開 [4]。伴侶蛋白的酶
關于脹泡與基因表達的介紹
在一種搖蚊 (C.pallidivittatus)唾腺前葉細胞的染色體4上,近著絲點處有巴爾比安尼環4,這些細胞能分泌特異的蛋白質顆粒。然而,在另一種搖蚊(C.tentanus)中則沒有巴爾比安尼環4,也沒有這種分泌顆粒。這兩種動物的雜交試驗表明，編碼分泌顆粒蛋白質的結構基因位于染色體4的巴爾比
關于基因表達的基本信息介紹
基因表達產物通常是蛋白質,但是非蛋白質編碼基因如轉移RNA（tRNA）或小核RNA（snRNA）基因的表達產物是功能性RNA。 所有已知的生命,無論是真核生物（包括多細胞生物）、原核生物（細菌和古細菌）或病毒,都利用基因表達來合成生命的大分子。 基因表達可以通過對其中的幾個步驟,包括轉錄,R
關于蛋白表達系統的分析介紹
原核蛋白表達系統既是最常用的表達系統，也是最經濟實惠的蛋白表達系統。原核蛋白表達系統以大腸桿菌表達系統為代表，具有遺傳背景清楚、成本低、表達量高和表達產物分離純化相對簡單等優點，缺點主要是蛋白質翻譯后缺乏加工機制，如二硫鍵的形成、蛋白糖基化和正確折疊，得到具有生物活性的蛋白的幾率較小。 酵母蛋
關于基因表達的機制RNA加工的介紹
基因表達的機制：原核蛋白編碼基因的轉錄產生的是可以翻譯成蛋白質的信使RNA（mRNA），但真核基因的轉錄會產生RNA的初級轉錄本（pre-mRNA），必須經過一系列加工才能成為成熟RNA（mRNA）。RNA的加工包括5端加帽、3端多腺苷酸化和RNA剪接。RNA加工可能是真核生物細胞核帶來的進化優
關于DNA重組的基因表達載體的介紹
將目的基因與運載體結合的過程，實際上是不同來源的DNA重新組合的過程。如果以質粒作為基因表達運載體， 首先要用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現一個缺口，露出黏性末端。然后用同一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端（部分限制性內切酶可切割出平末端，擁有相同效果）。將切下的目的基因的片段插
關于基因表達的翻譯機制的介紹
成熟RNA是非編碼RNA的最終基因表達產物 。但信使RNA（mRNA）則不同,它們是編碼一種或多種蛋白質合成的遺傳信息的載體。 每個mRNA由三部分組成：5'非翻譯區（5'UTR）,蛋白質編碼區或開放閱讀框（ORF）和3'非翻譯區（3'UTR）。編碼區攜帶由遺傳密
關于myc基因的結構及表達的介紹
c-myc基因是禽類髓細胞病毒(AMN)MC-29的V-myc的細胞同源序列，從MC-29病毒 中分離的V-myc是gag-myc融合體，它由1358個bp的gag基因與1568個bp的V-myc基因共 同組成.C-myc基因由3個外顯子及2個內含子組成，第一個外顯子不編碼，只起調節作 用，只有