流式細胞儀實驗方法2
六、流式檢測細胞染色基本過程（以全血為例）1、 收獲細胞：肝素鈉抗凝的靜脈血，按1：1與培養基混勻，加刺激劑，同時加蛋白轉運抑制劑（參照說明書）， 混勻后，37℃，5%二氧化碳培養4-6小時2、 阻斷Fc受體：用于消除非特異性的結合染色① 在小鼠，可使用純化的FcII/III受體的抗體（CD16/32），按照1ug/106細胞的用量，在染色緩沖液中4℃孵育15分鐘，PBS清洗后，直接進行下一步染色。② 對于人和大鼠，可直接使用過量的與熒光抗體相同來源和亞型不相關的純化Ig或者血清進行阻斷3、細胞表面染色① 加適當的細胞表面染色試劑20?L于Falcon管中，加入10......閱讀全文
流式細胞儀實驗方法-2
六、流式檢測細胞染色基本過程（以全血為例）1、???收獲細胞：肝素鈉抗凝的靜脈血，按1：1與培養基混勻，加刺激劑，同時加蛋白轉運抑制劑（參照說明書）， 混勻后，37℃，5%二氧化碳培養4-6小時2、???阻斷Fc受體：用于消除非特異性的結合染色①??????在小鼠，可使用純化的FcII/III受體的
流式細胞儀實驗方法
一、?實驗準備1．?? 標本制備：2．?? zui小化非特異性結合：?二、凋亡1．凋亡的檢測方法：網站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法?三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA?四、血小板1．活化2．活化檢測3．網織血小板?五、紅細胞1．網織紅細胞2．PNH3．胎兒紅
流式細胞儀實驗方法（二）
第二部分 細胞因子 細胞內細胞因子的流式細胞儀檢測 一、簡介隨著研究的進展，僅僅對細胞進行定量和活性的檢測已不能滿足需要。在單細胞水平研究細胞因子的表達能力對研究細胞因子在疾病中的作用越來越顯的重要無比。目前檢測單個細胞特定細胞因子的表達手段包括：ELIspot、原位雜交、免疫細胞化學、限制
流式細胞儀實驗方法（一）
一、實驗準備1． ? 標本制備：2． ? 最小化非特異性結合：二、凋亡1．凋亡的檢測方法：網站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA四、血小板1．活化2．活化檢測3．網織血小板五、紅細胞1．網織紅細胞2．PNH3．胎兒紅細胞六、腫瘤學
流式細胞儀實驗方法-1
流式細胞儀實驗方法?一、?實驗準備1．?? 標本制備：2．?? zui小化非特異性結合：?二、凋亡1．凋亡的檢測方法：和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法?三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA?四、血小板1．活化2．活化檢測3．網織血小板?五、紅細胞1．網織紅細胞2．
流式細胞儀實驗方法（三）
四、所需試劑1、細胞表面染色的熒光標記的單抗試劑依據實驗需要選擇特殊表面標志CD45圈定所有淋巴細胞CD3 圈定T淋巴細胞CD4 圈定T輔助淋巴細胞亞群CD8 圈定T抑制淋巴細胞亞群CD19/或CD20圈定B淋巴細胞CD56圈定NK淋巴細胞CD14圈定單核細胞2、熒光標記的細胞因子抗體：R&D提供F
RNA實驗方法-2
13.??????Prehybridization mix (add in order listed at 5 mL/100 cm2?membrane)Conc.5 mL10 mL15 mLx mLStocks5x500 礚1000 礚1500 礚50x Denhardt誷5x1 mL2 mL3 m
如何選擇流式細胞儀(2)
⑼、檢測細胞內因子（TH1/TH2細胞檢測）未活化的淋巴細胞所分泌的細胞因子極少，用流式細胞儀很難檢測出來。因此，在檢測前需刺激活化。活化所用的刺激素為PMA佛波酯+Ionomycin。淋巴細胞在刺激素的作用下活化，分泌細胞因子到細胞外。因流式細胞儀只能對細胞表面或內部的抗原進行檢測，如細胞因子分泌
實驗動物的麻醉方法-2
二、麻醉方法（一）全身麻醉：麻醉藥經呼吸道吸入或靜脈、肌肉注射，產生中樞神經系統抑制，呈現神志消失，全身不感疼痛，肌肉松弛和反射抑制等現象，這種方法稱全身麻醉。其特點為抑制深淺與藥物在血液內的濃度有關，當麻醉藥從體內排出或在體內代謝破壞后，動物逐漸清醒，不留后遺癥。1. 吸入麻醉法 麻醉藥以蒸氣或氣
流式細胞儀的使用程序(2)
四．??通過預設的獲取模式文件進行樣品分析 1．??從蘋果標志中選擇CELLQUEST，新視窗出現后從File指令欄中選擇Open，打開預設的獲取模式文件。 2．??從屏幕上方Acquire指令欄中，選取Connect to Cytometer進行電腦和儀器的連機。將出現的Acquisiton C