親和免疫組織化學實驗——LSAB法
實驗方法原理LSAB 法或稱 S-P 法、SABC 法，它是采用生物素標記的第二抗體與結合有 HRP 或 AKP 酶的鏈霉親和素（streptavidin）連接來測定細胞及組織中的抗原。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌培養物中提取的蛋白質，相對分子質量 60000，不含糖鏈，等電點 pI 為 6.0～6.5。鏈霉親和素同一定濃度的生物素化酶混合后，就能形成鏈霉親和素-酶復合物，這種復合物中至少存在 1 個尚未被生物素占據的親和素結合位點，可以和各種生物素標記抗體結合。由于采用了改良的親和純化技術和酶標技術，LSAB 法敏感性更髙、背景更清晰，其原理見圖 5-3。實驗材料石蠟切片非免疫性動物血清試劑、試劑盒蛋白酶PBSH2O2樹膠特異性一抗生物素標記二抗過氧化物酶鏈霉親和素實驗步驟1. 石蠟切片常規脫蠟至水，PBS 洗 3×3 min。2. IHC 的前處理視特異性一抗不同，可采用蛋白酶消化或熱誘導的微波抗原修復（AR），PBS 洗 3×......閱讀全文
親和免疫組織化學實驗——LSAB－法
實驗方法原理LSAB 法或稱 S-P 法、SABC 法，它是采用生物素標記的第二抗體與結合有 HRP 或 AKP 酶的鏈霉親和素（streptavidin）連接來測定細胞及組織中的抗原。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌培養物中提取的蛋白質，相對分子質量 60000，不含糖鏈，等電點 pI 為 6.0～6.5
親和免疫組織化學實驗——ABC－法
實驗方法原理ABC 法即親和素-生物素-過氧化物酶復合物法，是許世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基礎上改良的，其特點是利用親和素分別連接生物素標記的第二抗體和生物素標記的酶。ABC 法與 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗體不為生物素所標記，生物素標記的第二抗體與 ABC 復合物
親和免疫組織化學實驗——－CSA法
實驗方法原理催化信號放大系統（catalyzed signal amplification system，CSA），也稱釀胺信號放大（tyramine signal amplification system，TSA）或稱 CARD（catalyzed repoter deposition）。該方法的
親和免疫組織化學實驗——改進－CSA法
實驗方法原理已有的研究結果證實，CSA 法較 LSAB 法敏感 500～1000 倍，較 EnVision 法敏感 20～100 倍。其對細胞周期素等核內抗原的定位，有獨特的優點，定位準確性、敏感性、穩定性要較標準的 CSA 法好，其敏感性和穿透性要好于 EnVision 法。最近，Hasui K
親和免疫組織化學實驗
實驗方法原理 ABC 法即親和素-生物素-過氧化物酶復合物法，是許世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基礎上改良的，其特點是利用親和素分別連接生物素標記的第二抗體和生物素標記的酶。ABC 法與 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗體不為生物素所標記，生物素標記的第二抗體與
IHC石蠟技術
實驗概要免疫組織化學 ?(IHC) 是確定組織切片上是否存在蛋白及其位置的一種方法。盡管這種方法在定量分析時靈敏度較免疫印跡法或 ELISA ?等免疫測定方法低，但它能了解整個組織的情況。適用于癌癥等疾病發展及治療情況的評估。因此，從 IHC 獲得的信 ?息結合顯微技術提供了一副“宏圖”，使來自其它
IHC石蠟技術
實驗概要免疫組織化學 ?(IHC) 是確定組織切片上是否存在蛋白及其位置的一種方法。盡管這種方法在定量分析時靈敏度較免疫印跡法或 ELISA ?等免疫測定方法低，但它能了解整個組織的情況。適用于癌癥等疾病發展及治療情況的評估。因此，從 IHC 獲得的信 ?息結合顯微技術提供了一副“宏圖”，使來自其它
小鼠腦片免疫組織化學（ABC法）實驗
實驗方法原理 通過特異的抗原抗體反應標記上可見的顯示物系統來檢查細胞及組織上原位抗原或抗體成分的方法。在光學顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其性質定位，還可以利用細胞分光光度計、圖像分析儀、共聚焦顯微鏡等進行細胞原位半定量測定。免疫組織化學的顯著特點是特異性強。實驗材料 冷凍切片試劑、試劑盒 一
標記的鏈霉卵白素生物素法(LSAB)
標記的鏈霉卵白素-生物素法(LSAB法)是標記的卵白素技術，20世紀80年代開始采用。基本試劑：①?第一抗體；②?生物素化第二抗體；③?辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素。實驗方法：1.?將固定后的標本用PBS漂洗；2.?于室溫下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min，用來密封內源性過
免疫組化的二抗還有區別的么！要怎么選？
免疫組化大家基本上都做過，你知道有二抗，也應該知道免疫組化的原理就是一抗結合到目標蛋白，再有二抗來進行信號放大，大概是這樣： 但是你知道二抗的信號放大實際上有多種方法……這就需要你進行二抗標記方法的選擇，最簡單的二抗標記方法是直接法： 就是直接在二抗上標記酶，比如HRP，來進行顯色，這樣的二
親和色譜法
親和色譜法（ affinity chromatography），將相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相，利用與固定相不同程度的親和性，使成分與雜質分離的色譜法。中文名：親和色譜法外文名：affinity chromatography所屬學科：生物應用領域：實驗例如利用酶與基質（或抑制劑）
親和色譜法
一、基本理論（一）原理 在生物體內，許多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有與某些相對應的專一分子可逆結合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補的DNA等，都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結合能力稱為親和力，根據生物分子間親和吸附和解離的原理，建立起來的
親和色譜法
親和色譜法（ affinity chromatography），將相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相，利用與固定相不同程度的親和性，使成分與雜質分離的色譜法。
免疫組織化學常用的檢測方法
??免疫組織化學（immunohistochemistry）技術的基本原理是抗原-抗體的反應。利用帶有標記物（如熒光素或辣根過氧化物酶等）的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起
親和層析法去除交叉反應性抗體實驗
本節介紹一種利用結合細菌蛋白質的基質去除粗制免疫球蛋白中與細菌編碼蛋白質發生反應成分的方法（de Wet et al.1984)。該方法也適用于利用培養的細胞或組織抽提物去除交叉反應抗體。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒緩沖液和
親和層析法去除交叉反應性抗體實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 細胞裂解緩沖液 NaOH Tris-緩沖鹽溶液 TBS Triton X-100 溶菌酶
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
步驟一 偶聯寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B 步驟二 核酸親和層析 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4
親和層析法去除交叉反應性抗體實驗
試劑、試劑盒 緩沖液和溶液細胞裂解緩沖液NaOHTris-緩沖鹽溶液TBSTriton X-100 溶菌酶胰 DNA 酶 I制備用于文庫篩選的抗體大腸桿菌培養液儀器、耗材 離心和轉子親和層析柱溴化氫活化的 Sepharose 4B實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液，緩沖液和試劑的組分請見附錄 12將貯
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通過它們本身的堿基實現的。從理論上講，該方法也許干擾最佳結合序列的接近路徑，但是這樣一個簡單的方法一直被廣泛地成功應用。偶聯效率的定量檢測可經 A260 值測定評估，或者更精確地從偶聯介質上水解核酸和進行磷酸鹽測定。實
免疫組化試驗抗體選擇及常用染色方法
一、免疫組織化學(Immunohistochemistry,IHC)免疫組織化學是利用抗原抗體的特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及定量的研究。免疫組織化學染色技術不僅有較高的敏感性
SABC法親和素與生物素系統的操作流程
實驗概要本實驗介紹了SABC法親和素與生物素系統的操作步驟。實驗原理SABC法或稱S-P法、LSAB法，它是采用生物素標記的第二抗體與結合有HRP或AKP酶的鏈霉親和素(streptavidin)連接來測定細胞及組織中的抗原。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌培養物中提取的蛋白質，相對分子質量60000，不含
小鼠腦片免疫組織化學（ABC法）實驗——免疫組化法
實驗方法原理通過特異的抗原抗體反應標記上可見的顯示物系統來檢查細胞及組織上原位抗原或抗體成分的方法。在光學顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其性質定位，還可以利用細胞分光光度計、圖像分析儀、共聚焦顯微鏡等進行細胞原位半定量測定。免疫組織化學的顯著特點是特異性強。實驗材料冷凍切片試劑、試劑盒一抗；二
免疫細胞化學SP法與SABC法的區別
免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。免疫組織化學的方法有多種，其實都大同小異，不同點只是在于顯色基團！SP法1）脫蠟、水化；2）PBS洗2～3次各5分鐘；3）3%H2O2（80%
SABC法親和素與生物素系統的操作流程
實驗概要本實驗介紹了SABC法親和素與生物素系統的操作步驟。實驗原理SABC法或稱S-P法、LSAB法，它是采用生物素標記的第二抗體與結合有HRP或AKP酶的鏈霉親和素(streptavidin)連接來測定細胞及組織中的抗原。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌培養物中提取的蛋白質，相對分子質量60000，不含
序列特異性DNA結合蛋白親和層析純化實驗_DNA親和層析法
實驗材料制備性的DNA親和層析樹脂試劑、試劑盒緩沖液Z或其他柱緩沖液（如緩沖液Ze或TM)配制時含不同的KCl濃度（從緩沖液 Z 0.1 mol L KCl 至緩沖液 Z 1 mol L KCl對緩沖液Z 0. 1 mol L KCl透析的部分純化的蛋白質組分非特異性的競爭DNA柱再生緩沖液柱儲存緩
親和色譜法原理
在生物體內，許多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有與某些相對應的專一分子可逆結合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補的DNA等，都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結合能力稱為親和力，根據生物分子間親和吸附和解離的原理，建立起來的色譜法稱親色譜法。親和色譜
親和色譜法簡介
一、基本理論（一）原理：在生物體內，許多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有與某些相對應的專一分子可逆結合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補的DNA等，都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結合能力稱為親和力，根據生物分子間親和吸附和解離的原理，建立
親和層析法概述
親和層析法是利用生物大分子與某些對應的專一分子特異識別和可逆結合的特性而建立起來的一種分離生物大分子的色譜方法，也叫做生物親和或生物特異性親和色譜。這種特異可逆結合的物質很多，見表6–3。如抗原與抗體、底物與酶、激素與受體等，他們間的這種特異親和能力又叫親和力。親和色譜中，一對互相識別的分子互稱對方
核酸親和層析法純化蛋白質實驗1
核酸親和柱的應用極大地促進了核酸結合調節蛋白特性的研究，這些蛋白質涉及基因表達、染色體修復和復制、基因重組等的調控。核酸結合蛋白可以結合單鏈 DNA、雙鏈 DNA 或 RNA。DNA 結合蛋白結合 DNA 可以是序列特異的，也可以是非特異的。此外，含有特異寡核苷酸的親和樹脂能用于某些酶的分離，這些酶
標記親和素生物素法（BAELISA）實驗
檢測未知抗原 檢測未知抗體 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，對生物素有非常高的親和力（結合常數高達1015M-1）。