穩轉株的制備
實驗原理：利用哺乳動物系統生產蛋白的方式有兩種：瞬時轉染和穩轉株篩選。通過穩定細胞系構建篩選穩定表達細胞株。針對瞬時轉染，外源基因在短時間轉錄翻譯得到的蛋白量較少，能夠滿足小量蛋白制備，大量生產成本很高。相對于此，穩定轉染的是將外源基因整合到細胞自身的基因組上，隨著細胞的生長分裂外源基因可以穩定轉染表達，同時經過抗生素加壓篩選，最終得到能夠穩定轉染表達蛋白的細胞株，穩轉株生產蛋白穩定性更好，批次差異性更小。穩定轉染的應用 穩定轉染適用原因 穩定轉染應用 外源基因要整合到細胞染色體上 基因敲除以及基因插入突變篩選等修飾基因組的研究 細胞之間存在個體差異，同一類型細胞，不同個體細胞 基因組存在差異，會對實驗結果造成干擾 單克隆穩轉株......閱讀全文
穩轉株的制備
實驗原理：利用哺乳動物系統生產蛋白的方式有兩種：瞬時轉染和穩轉株篩選。通過穩定細胞系構建篩選穩定表達細胞株。針對瞬時轉染，外源基因在短時間轉錄翻譯得到的蛋白量較少，能夠滿足小量蛋白制備，大量生產成本很高。相對于此，穩定轉染的是將外源基因整合到細胞自身的基因組上，隨著細胞的生長分裂外源基因可以穩定轉染
知識分享：穩轉株的制備
實驗原理： 利用哺乳動物系統生產蛋白的方式有兩種：瞬時轉染和穩轉株篩選。通過穩定細胞系構建篩選穩定表達細胞株。針對瞬時轉染，外源基因在短時間轉錄翻譯得到的蛋白量較少，能夠滿足小量蛋白制備，大量生產成本很高。相對于此，穩定轉染的是將外源基因整合到細胞自身的基因組上，隨著細胞的生長分裂外源基因
什么是穩轉株
穩定轉染的細胞株，就是轉染后質粒可以穩定整合到基因組上不會因細胞分裂而丟失。區別于質粒瞬時轉染不能長時間保留質粒在細胞里。
維真穩轉株構建流程
穩轉株即穩定表達細胞株，指的是基于某一細胞系構建的持續過表達或干擾某特定基因的細胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應用的穩轉株構建方法，具有高效整合、目標細胞廣泛等特點。 一．準備及預實驗 確定細胞系相關信息，需包括如下內容 目標細胞系培養條件 目標細胞增殖速度 支原體污染情況
維真穩轉株構建流程（一）
穩轉株即穩定表達細胞株，指的是基于某一細胞系構建的持續過表達或干擾某特定基因的細胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應用的穩轉株構建方法，具有高效整合、目標細胞廣泛等特點。一．準備及預實驗確定細胞系相關信息，需包括如下內容目標細胞系培養條件目標細胞增殖速度支原體污染情況注：為避免慢病毒感染后細胞死
維真穩轉株構建流程（二）
平板挑取法?計數100個多克隆穩轉株細胞，接種于一個10cm培養盤中；注：盡量吹打均勻，防止細胞聚團。過夜培養后，觀察并尋找單個細胞的位置，并在盤底做標記；培養培養2周；注：培養的第一周不要換液，接下來每3-4天換液。待標記處的細胞擴增為肉眼可見的白點，在移液器尖端吸取一點胰酶，緩慢滴至細胞處，待細
知識分享：維真穩轉株構建流程
穩轉株即穩定表達細胞株，指的是基于某一細胞系構建的持續過表達或干擾某特定基因的細胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應用的穩轉株構建方法，具有高效整合、目標細胞廣泛等特點。 一．準備及預實驗 確定細胞系相關信息，需包括如下內容 目標細胞系培養條件 目標細胞增殖速度 支原體污染情況
轉谷氨酞胺酶制備
( l ）工藝流程 MTGase 粗酶粉～MTGase 粗提取液～超濾液～萃取液～反萃取液～濃縮液～凍干粉 ( 2 ）主要步驟 ① MTGase 粗酶液制備稱取定量的粗MTGase 粉，用其質量10 倍0.2mol / L KHZPO 4-NaOH 緩沖液（pH 值為6 . 50 ）在4 一
穩定細胞株構建
穩轉細胞系（穩定表達細胞株）指在細胞中持續穩定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩轉細胞株的目的基因質粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長期穩定表達該基因。穩轉細胞株包括多克隆穩轉細胞株和單克隆穩轉細胞株。慢病毒感染目的細胞后，通過抗性基因篩選得到的細胞株是多個細胞克隆的組合。單克隆細胞株是從多克隆細
電擊轉感受態的制備
Prepare:200ml LB in a 1L flask1L sterile ddH2O and place in cold room4 50ml conicals chilled on ice10% glycerol (cold)Chilled boxes of 100ul and 1ml p