RNAi干擾技術及應用進展研究（一）
RNAi是Napoli CD等在試圖向紫色矮牽牛花轉導色素合成基因，用以增加其花色時發現的。結果出乎預料，轉基因的植株不僅沒有新基因的表達，反而自身的色素合成也減弱了，一些轉基因的花出現了全白色或部分白色。他們把這種導入的基因未表達和植物本身合成色素基因的失活現象命名為共抑制(cosuppression)。之后，Ramano等在向粗糙孢菌中導入合成胡蘿卜素的基因時造成失活，他們稱為基因靜止(quelling)。Fire A等在研究反義核苷酸時發現在線蟲體內，雙鏈RNA( double stranded RNA，dsRNA)能有效地抑制有互補序列的內源性基因，且抑制效果優于 單鏈反義RNA。至此，正式提出了雙鏈RNA誘導的RNAi的概念，開啟了RNAi研究的序幕。1 RNAi可能的作用機制及特點 1.1 RNAi的作用機制雖然RNAi作用的確切機制尚不清楚，......閱讀全文
RNA干擾-RNAi的生物特性
RNAi抑制轉座子活性兩方面的證據提示轉座子活性的抑制與siRNA有關① 發現蠕蟲mut-7 基因參與RNAi 并且與轉座子的轉座抑制有關；② 在果蠅中，參與RNAi 的RNA 解螺旋酶Spindle-E 的突變將導致該基因引起的基因沉默的缺失，同時提高了反轉錄轉座子活性。RNAi抵御病毒感染在擬南
RNA干擾（RNAi）實驗成功要素
基因和siRNA選擇RNAi實驗的通量可從沉默單個感興趣的基因，到少量相關基因或同一個通路上的基因，到全基因組高通量篩選，取決于需要解決的生物學問題。siRNA的設計至關重要。轉染優化用于RNAi實驗的細胞應當有效轉染siRNA。轉染必須經過優化確保siRNA的濃度是最低的有效濃度以避免非特異性效應
RNA干擾技術(RNA interference，RNAi)
1995年，康乃爾大學的Su Guo博士在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲（C. elegans）中的par-1基因時，發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義RNA技術特異性地阻斷上述基因的表達，而同時在對照實驗中給線蟲注射正義RNA（sense RNA）以期觀察到基因表達的增強。但得到的結果
RNAi（RNA干擾）的分子機制
通過生化和遺傳學研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititation and effector steps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。證據表明；一個稱為Dic
反義技術——RNA干擾（RNA interference，RNAi）
最近由于RNA干擾（RNA interference，RNAi）的發現使反義領域的研究增多。這種自然發生的現象最早是在秀麗線蟲中發現的（1），是序列特異性地使轉錄后的基因沉默的有力機制。由于最近兩年在RNAi領域取得的進步，已經有許多這方面的綜述發表（2-4）。RNA干擾是由長的雙鏈 RNA
RNAi干擾技術及應用進展研究（一）
RNAi是Napoli?CD等在試圖向紫色矮牽牛花轉導色素合成基因，用以增加其花色時發現的。結果出乎預料，轉基因的植株不僅沒有新基因的表達，反而自身的色素合成也減弱了，一些轉基因的花出現了全白色或部分白色。他們把這種導入的基因未表達和植物本身合成色素基因的失活現象命名為共抑制(cosuppressi
RNAi干擾技術及應用進展研究（三）
3.2?基因治療及藥物篩選探索由于RNAi是針對轉錄后階段的基因沉默，相對于傳統基因治療對基因水平上的敲除，整個流程設計更簡便，且作用迅速，效果明顯，為基因治療開辟了新的途徑。 其總體思路是通過加強關鍵基因的RNAi機制，控制疾病中出現異常的蛋白合成進程或外源致病核酸的復制及表達。尤其針對引起一
RNAi干擾技術及應用進展研究（四）
3.5?轉基因研究在動植物的轉基因試驗中，?經常發生基因沉默。因此，?對轉基因沉默機制的探索可以為在轉基因研究中避免基因沉默提供對策。在轉基因植物研究中避免基因沉默可提高試驗成功率，且節省時間，而在大型動物轉基因研究中避免基因沉默可節約成本，提高產率。?3.6?干細胞研究在干細胞研究方面，在dsRN
RNA干擾（RNAi）實驗原理與方法（3）
3.DEAE-葡聚糖和polybrene帶正電的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚體復合物和帶負電的DNA分子使得DNA可以結合在細胞表面。通過使用DMSO或甘油獲得的滲透休克將DNA復合體導入。兩種試劑都已成功用于轉染。DEAE-葡聚糖僅限于瞬時轉染。4.機械法轉染技術也包括使用機械的方法，
RNA干擾（RNAi）實驗原理與方法（2）
dsRNA消化法的主要優點在于可以跳過檢測和篩選有效siRNA序列的步驟，為研究人員節省時間和金錢（注意：通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜）。不過這種方法的缺點也很明顯，就是有可能引發非特異的基因沉默，特別是同源或者是密切相關的基因。現在多數的研究顯示這種情況通常不會造成影響。最