分離亞細胞組分的第一步是制備組織勻漿或細胞勻漿。勻漿(Homogenization)是在低溫條件下,將組織或細胞放在勻漿器中加入等滲勻漿介質(即0.25moL/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液)研磨,使細胞被機械地研碎成為各種亞細胞組分和包含物的混合物。分離亞細胞組分的第一步是分級分離。它通過由低速到高速離心技術,使非均一混合體中的顆粒按其大小輕重分批沉降到離心管的不同部位,再分部收集,即可得到各種亞細胞組分。由于樣品中各種大小和密度不同的顆粒在離心開始時是均勻分布于整個離心管中,故每級分離得到的第一次沉淀必然不是純的最重的顆粒,須經反復懸浮和離心加以純化。分離亞細胞組分主要離心技術是差速離心和密度梯度離心。差速離心(differential centrifugation)是在密度均一的介質中由低速到高速逐級離心,用于分離不同大小的細胞和細胞器。 在差速離心中細胞器沉降的順序依次為:細胞核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體......閱讀全文
細胞分離離心機類型有多種。1、按分離功能可分:分析型細胞分離離心機和制備型細胞分離離心機。2、按結構可分:臺式細胞分離離心機和落地式細胞分離離心機。3、按溫控可分:冷凍細胞分離離心機和常溫細胞分離離心機。4、按使用范圍可分:專用型細胞分離離心機和普通型細胞分離離心機。5、按容量可分:微量細胞分離離心
【摘要】 目的 探討小鼠精原細胞的分離純化。 方法 用組合酶消化法制備7~8d小鼠的生殖細胞懸液;用Percoll不連續密度梯度法分離精原細胞。 結果 所獲細胞懸液內活細胞、死細胞及細胞團的百分比分別為90.08%、9.92%及8.91%;平均每個睪丸可獲得4.136×105個細胞;精原細胞主要分布
【摘要】 目的 探討小鼠精原細胞的分離純化。 方法 用組合酶消化法制備7~8d小鼠的生殖細胞懸液;用Percoll不連續密度梯度法分離精原細胞。 結果 所獲細胞懸液內活細胞、死細胞及細胞團的百分比分別為90.08%、9.92%及8.91%;平均每個睪丸可獲得4.136×105個細胞;精原細胞主要分布
【摘要】 目的 探討小鼠精原細胞的分離純化。 方法 用組合酶消化法制備7~8d小鼠的生殖細胞懸液;用Percoll不連續密度梯度法分離精原細胞。 結果 所獲細胞懸液內活細胞、死細胞及細胞團的百分比分別為90.08%、9.92%及8.91%;平均每個睪丸可獲得4.136×105個細胞;精原細胞主要分布
細胞由各種亞細胞結構組成。其重要的研究手段之一是分離純化亞細胞組分,觀察它們的結構或進行生化分析。離心技術是實現這一目標的基本手段。一般認為,轉速為10~25Kr/min的離心機稱為高速離心機;轉速超過25Kr/min,離心力大于89Kg者稱為超速離心機。目前超速離心機的最高轉速可達100Kr/mi
(一)一般光學顯微鏡術應用一般光學顯微鏡(簡稱光鏡)觀察組織切片是組織學研究的最基本方法。取動物或人體的新鮮組織塊,先用固定劑(fixative)固定(fixation),使組織中的蛋白質迅速凝固,防止細胞自溶和組織腐敗。常用的固定劑如灑精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化鋨等,一般常將幾種固定劑配制成混
實驗方法原理酶消化法制備2月齡未成熟長白豬睪丸組織的單細胞懸液,以 2 %~4 %牛血清白蛋白 (BSA)連續梯度作為分離介質,采用重力沉降法并結合細胞貼壁培養的方法分離精原細胞。實驗材料長白種系公豬  
實驗方法原理 酶消化法制備2月齡未成熟長白豬睪丸組織的單細胞懸液,以 2 %~4 %牛血清白蛋白 (BSA)連續梯度作為分離介質,采用重力沉降法并結合細胞貼壁培養的方法分離精原細胞。
實驗方法原理酶消化法制備2月齡未成熟長白豬睪丸組織的單細胞懸液,以 2 %~4 %牛血清白蛋白 (BSA)連續梯度作為分離介質,采用重力沉降法并結合細胞貼壁培養的方法分離精原細胞。實驗材料長白種系公豬試劑、試劑盒膠原酶胰蛋白酶脫氧核糖核酸酶牛血清白蛋白胎牛血清RPMI 1640培養基HE染液PBS儀
一、材料和方法1、實驗動物長白種系公豬,2月齡,由北京養豬中心葦溝現代化豬場提供。取活體睪丸,立即放入1640營養液中,待分離細胞。2、主要試劑及材料膠原酶(CLS,Sigma),胰蛋白酶(Sigma),脫氧核糖核酸酶(DNase,Promega),牛血清白蛋白(BSA,中國醫學科學院天津血液研究所
細胞連接(cell junction) 是指相鄰細胞之間、細胞與細胞外基質之間在質膜接觸區域特化形成的連接結構。細胞連接在加強細胞間的機械聯系,維持組織結構的完整性和協調不同細胞功能方面起著重要的作用。細胞連接可分為緊密連接(tight junction)、錨定連接和通訊連接三種類型。其中緊密連
3、等密度離心法等密度離心法(isodensity centrifugation)根據Stokes公式,當顆粒密度(ρp)等于介質密度(ρM)時,離心時顆粒懸浮于介質中不移動。等密度離心法就是根據這一原理進行的。采用包括各種顆粒密度范圍的梯度介質,把要分離的樣品放在密度梯度液表面或者混懸于梯度液
細胞連接(cell junction) 是指相鄰細胞之間、細胞與細胞外基質之間在質膜接觸區域特化形成的連接結構。細胞連接在加強細胞間的機械聯系,維持組織結構的完整性和協調不同細胞功能方面起著重要的作用。細胞連接可分為緊密連接(tight junction)、錨定連接和通訊連接三種類型。其中緊密連
細胞連接(cell junction) 是指相鄰細胞之間、細胞與細胞外基質之間在質膜接觸區域特化形成的連接結構。細胞連接在加強細胞間的機械聯系,維持組織結構的完整性和協調不同細胞功能方面起著重要的作用。細胞連接可分為緊密連接(tight junction)、錨定連接和通訊連接三種類型。其中緊密連
近日,美國佐治亞理工學院、ARUNA生物醫學公司以及密歇根大學等機構的研究人員開發出了一種名為μSHEAR(micro stem cell high-efficiency adhesion-based recovery)的新型干細胞分離技術,這一技術依據的是細胞間容易區分的粘附力物理差異。相關研
離心機是一種結構復雜的高速旋轉機械,它是利用離心力,不同物質在離心場中沉淀速度的差異,對混合溶液進行快速分離的專門設備,是一種將裝有樣品溶液的離心管、瓶或袋通過離心機轉子置于離心軸上,利用轉頭繞軸高速旋轉所產生的強大離心力,使樣品中不同性質顆粒相互分離的特殊裝置。可以實現樣品的分析、分離。從轉速看,
生物分離是從生物材料、微生物的發酵液、生物反應液或動植物細胞的培養液中分離并純化有關產品(如具有藥理活性作用的蛋白質等)的過程,又稱為下游加工過程。生物分離過程的主要特點:常無固定操作方法可循,生物材料組成非常復雜,分離操作步驟多,不易獲得高收率,培養液(或發酵液)中所含目的物濃度很低,而雜質含量卻
就像可以把細胞從組織中分離出來進行研究一樣,人們也可以把細胞器從細胞中分離純化出來,以研究它們各自特有的的化學組成、酶活性和代謝特點。盡管在一個世紀前就有人試圖分離細胞器,但直到20世紀40年代有了超速離心機和細胞勻漿技術后,才真正建立了細胞器的分離技術。用這一技術可以獲得相對純凈的各種細胞器和大分
處于非均勻電場中的微粒由于極化效應而產生運動,這種現象稱之為介電電泳(Dielectrophoresis,DEP)。Maxwell和Wagner分別在1891和1914年研究懸浮液的介電特性時發現,由于介電微粒與懸浮介質的介電性能不同,在外加電場作用下介電微粒會發生界面極化,形成很大的感應偶極矩。1
兔膀胱平滑肌細胞培養可以:(1)分離得到高純度兔膀胱平滑肌細胞;(2)進行細胞學鑒定研究;(3)用于細胞學其他研究。實驗方法原理運用顯微手術器械在肉眼下仔細剔除膀胱黏膜層及漿膜層后,完整分離膀胱平滑肌層。然后以酶分離法獲取兔膀胱平滑肌細胞,體外原代和傳代培養分離細胞。在倒置顯微鏡下觀察細胞形態及生長
實驗方法原理 運用顯微手術器械在肉眼下仔細剔除膀胱黏膜層及漿膜層后,完整分離膀胱平滑肌層。然后以酶分離法獲取兔膀胱平滑肌細胞,體外原代和傳代培養分離細胞。在倒置顯微鏡下觀察細胞形態及生長狀況,同時進行細胞爬片H-E染色和透射電鏡等形態學觀察分析,并應用免疫熒光染色平滑肌特有的α-肌動蛋白進行細胞學鑒
第三節 微粒體的分離細胞通過勻漿破碎時,細胞質膜碎成片段,這些膜片段的末端融合形成的直徑小于100nm的小泡。來自不同細胞器(細胞核、線粒體、質膜、內質網等)的小泡有不同的特性,所以可以將這些小泡相互分離。由內膜系統衍生而來的小膜泡形成相似大小的膜泡異質性集合體,稱微粒體(microsome)。分離
1.懸浮細胞 ●計數將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數生長期。以大約200~400g離心5分鐘沉淀細胞,使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細胞。 ●以1×107到5×107細胞/ml密度,在包含有血清的冷凍培養基中再次懸浮細胞,或者以0.5×107到1×107在無血清培養基中,再次懸浮細胞。 ●
“十三五”期間,通過支持我國優勢學科和交叉學科的重要前沿方向,以及從國家重大需求中凝練可望取得重大原始創新的研究方向,進一步提升我國主要學科的國際地位,提高科學技術滿足國家重大需求的能力。各科學部遴選優先發展領域及其主要研究方向的原則是: (1)在重大前沿領域突出學科交叉,注重多學科協同攻關,
酶分離法 實驗方法原理 運用顯微手術器械在肉眼下仔細剔除膀胱黏膜層及漿膜層后,完整分離膀胱平滑肌層
酶分離法 實驗方法原理 運用顯微手術器械在肉眼下仔細剔除膀胱黏膜層及漿膜層后,完整分離膀胱平滑肌層
實驗方法原理 實驗步驟 1. 取材 對一般的動物組織取材的要求如下:(1) 標本材料要新鮮,取材速度要快:由于生物組織離體后,細胞將會立即釋放出各種水解酶而引起細胞自溶,使其微細結構發生改變而產生假象,故要盡量保持材料的新鮮,經解剖、手術或活檢取材后迅速投入固定液內,以盡量保持細
實驗步驟1. 取材 對一般的動物組織取材的要求如下:(1) 標本材料要新鮮,取材速度要快:由于生物組織離體后,細胞將會立即釋放出各種水解酶而引起細胞自溶,使其微細結構發生改變而產生假象,故要盡量保持材料的新鮮,經解剖、手術或活檢取材后迅速投入固定液內,以盡量保持細胞在活體狀態的結構。(2) 取材小,
實驗步驟1. 取材 對一般的動物組織取材的要求如下:(1) 標本材料要新鮮,取材速度要快:由于生物組織離體后,細胞將會立即釋放出各種水解酶而引起細胞自溶,使其微細結構發生改變而產生假象,故要盡量保持材料的新鮮,經解剖、手術或活檢取材后迅速投入固定液內,以盡量保持細胞在活體狀態的結構。(2) 取材小,
來自Methodist醫院的科學家們開發出了一種新工具,讓細胞經過一種Plinko微觀游戲,由于只有最濕軟的細胞才能通過它,從而將導致腫瘤的癌細胞與更為良性的細胞區分開來。 正如發表在本周《美國科學院院刊》(PNAS)上的這篇論文所報道的,更柔軟可變的致瘤細胞通過了全部的微小障礙,而更堅硬