一、目的學習和掌握考馬斯亮藍G-250 測定蛋白質含量的原理和方法。二、原理考馬斯亮藍G- 250(Coomassie brilliant blue G-250)測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。考馬斯亮藍G-250 在游離狀態下呈紅色,最大光吸收在488nm;當它與蛋白質結合后變為青色,蛋白質-色素結合物在595nm 波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比,因此可用于蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍G-250 結合在2min 左右的時間內達到平衡,完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h 內保持穩定。該法是1976年Bradford 建立,試劑配制簡單,操作簡便快捷,反應非常靈敏,靈敏度比Lowry 法還高4 倍,可測定微克級蛋白質含量,測定蛋白質濃度范圍為0~1 000μg/mL,是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。二、材料、主要儀器和試劑1.實驗材料新鮮綠豆芽2.主要儀器(1)分析天平、臺......閱讀全文
考馬斯亮藍有G250和R250兩種,在顏色索引(Colour Index)中給出了不同的編號(42655和42660)。亮藍G和亮藍R在冷水中分別為微溶和不溶,在熱水和乙醇中分別為可溶和微溶。兩種染料均能對固定的蛋白進行有效地染色,使用濃度為溶于甲醇:冰醋酸:水(50:10:40)的0.05%溶
在酸性條件下,考馬斯亮蘭G-250染料與蛋白質疏水區結合,導致最大吸收峰由465 nm 變為595 nm,同時顏色也由棕色變為藍色,該藍色化合物顏色的深淺與蛋白質濃度的高低成正比關系。將蛋白質樣品或稀釋的BSA 與Bradford試劑混合,測量在595 nm處的吸收值,在建立由一系列稀釋的BSA建
實驗方法原理常規聚丙烯酰胺凝膠電泳后的檢測,對于不同的目的,應采用不同的檢測方法。由于這種電泳方法不破壞蛋白質的生物活性,所以可選用的檢測方法很多。試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液Tris-甘氨酸緩沖液貯液電極緩沖液樣品緩沖液過硫醆銨濃縮膠緩沖液貯液分離膠緩沖液貯液實驗步驟一、早期染色方法用染料和生物大
一、實驗目的和內容目的: 學習考馬斯亮藍(Coomassie Brilliant Blue)法測定蛋白質濃度的原理和方法內容:制作測定蛋白質濃度的標準曲線。制作標準曲線是生物檢測分析的一項基本技術。一般用分光光度法測物質的含量,先要制作標準曲線,然后根據標準曲線查出所測物質的含量。考馬斯亮藍法測定蛋
實驗原理考馬斯亮藍(Coomassie Brilliant Blue)法測定蛋白質濃度,是利用蛋白質―染料結合的原理,定量的測定微量蛋白濃度的快速、靈敏的方法。這種蛋白質測定法具有超過其他幾種方法的突出優點,因而正在得到廣泛的應用。這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質測定法。考馬斯亮蘭G-250染料
蛋白質是細胞中最重要的含氮生物大分子之一,承擔著各種生物功能。蛋白質的定量分析是蛋白質構造分析的基礎。目前常用的蛋白測量的方法主要有BCA法、考馬斯亮藍法(Bradford)和Lowry法等。BCA法 原理在堿性環境下蛋白質與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu1+(biuret
狹義的細胞骨架(cytoskeleton)概念是指真核細胞中的蛋白纖維網架體系(微管(microtubule, MT)、微絲(microfilament, MF )及中間纖維(intermediate filament, IF )組成的體系)。它所組成的結構體系稱為“細胞骨架系統”,與細胞內的遺
實驗原理 考馬斯亮藍(Coomassie Brilliant Blue)法測定蛋白質濃度,是利用蛋白質―染料結合的原理,定量的測定微量蛋白濃度的快速、靈敏的方法。這種蛋白質測定法具有超過其他幾種方法的突出優點,因而正在得到廣