克隆啟動子的方法
隨著基因工程的發展，常常需要構建一種能高水平表達異源蛋白質的表達載體。啟動子對外源基因的表達水平影響很大，是基因工程表達載體的重要元件。因此研究啟動子的克隆方法，對研究基因表達調控和構建表達載體至關重要。迄今為止，國外尚未見到有關啟動子克隆方法的綜述性報道，國內僅孫曉紅等曾就啟動子的結構、分類、克隆方法和食用菌中已經分離到的啟動子作過綜述。而近年來又有許多改進的克隆啟動子的方法獲得了多方面的成功，本文就近年來改進的啟動子克隆方法作一綜述，以期促進對啟動子分離技術的應用。1 啟動子克隆的幾種方法1.1 利用啟動子探針載體篩選啟動子啟動子探針型載體是一種有效、經濟、快速分離基因啟動子的工具型載體，包含2個基本部分：轉化單元和檢測單元。其中，轉化單元含復制起點和抗生素抗性基因，用于選擇被轉化的細胞；檢測單元則包括1個已失去轉錄功能且易于檢測的遺傳標記基因以及克隆位點。利用啟動子探針載體篩選啟動子的過程為，先選用1種適當的限制性核酸內切......閱讀全文
克隆啟動子的方法
隨著基因工程的發展，常常需要構建一種能高水平表達異源蛋白質的表達載體。啟動子對外源基因的表達水平影響很大，是基因工程表達載體的重要元件。因此研究啟動子的克隆方法，對研究基因表達調控和構建表達載體至關重要。迄今為止，國外尚未見到有關啟動子克隆方法的綜述性報道，國內僅孫曉紅等曾就啟動子的結構、分類、克隆
克隆啟動子的方法
隨著基因工程的發展，常常需要構建一種能高水平表達異源蛋白質的表達載體。啟動子對外源基因的表達水平影響很大，是基因工程表達載體的重要元件。因此研究啟動子的克隆方法，對研究基因表達調控和構建表達載體至關重要。迄今為止，國外尚未見到有關啟動子克隆方法的綜述性報道，國內僅孫曉紅等曾就啟動子的結構、分類、克隆
啟動子克隆方法研究進展（2）
1.3 環狀PCR 環狀PCR包括I-PCR(Inverse-PCR)和P-PCR(Panhandle-PCR)。這2種PCR都是根據一端已知序列設計的嵌套式引物進行PCR。 1.3.1 I-PCR?I-PCR是1988年由Triglia最早提出的一種基于PCR的改進的染色體步行方法。????
啟動子克隆方法研究進展（4）
1.6 TAlL-PCR 很早就有用隨機引物的PCR，但由于無法有效地控制由隨機引物引發的非特異產物的產生，所以一直未能廣泛應用。近年來由IJiu等設計的TAIL-PCR(Termal Asymmetric Interlaced?PCR)又叫熱不對稱交錯PCR，則解決了這個問題，后來有研究表明，經
啟動子克隆方法研究進展（3）
1.4 利用載體或接頭的染色體步行技術克隆基因啟動子 這類方法的第一步都是酶切基因組DNA，連接載體或接頭，既可以用pUCl8等質粒載體，也可以使用λDNA等噬菌體載體，只要選用的載體帶有合適的酶切位點；同樣根據實驗需要，接頭既可以是雙鏈也可以是單鏈，然后根據基因組DNA序列設計的特異引物和載體
啟動子克隆方法研究進展（5）
2 討論 以上介紹的幾種方法基本代表了現有的啟動子克隆方法，它們分別具有不同的特點和適用范圍。 利用啟動子探針載體篩選啟動子時，不需要知道具體的基因序列，避免了引物設計，并能獲得大量的啟動子片段；其缺點是需要構建1個穿梭質粒，建庫、轉化、篩選，工作量大，費時費力，而且克隆、亞克隆的過程繁瑣。因此
啟動子克隆方法研究進展（1）
隨著基因工程的發展，常常需要構建一種能高水平表達異源蛋白質的表達載體。啟動子對外源基因的表達水平影響很大，是基因工程表達載體的重要元件。因此研究啟動子的克隆方法，對研究基因表達調控和構建表達載體至關重要。 迄今為止，國外尚未見到有關啟動子克隆方法的綜述性報道，國內僅孫曉紅等曾就啟動子的結構、分類、
啟動子捕獲的概念和方法
中文名稱啟動子捕獲英文名稱promoter trapping定 義用于確定基因組DNA啟動子區域的一項技術。用做檢測的載體含有報道基因可作表達的標記，但缺乏啟動子，將擬檢測的DNA序列克隆入這種載體的適當位置，導入細胞或個體，從報道基因表達的程度可分析出啟動子的存在與否及其強弱。應用學科生物化學與
單克隆抗體的克隆方法
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過
單克隆抗體的克隆化方法
克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。 克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過一段時期培養之后，也還會因為細胞突變或特定染色體的丟失，使部分細