數字PCR技術在DNA定量精準等領域的應用
數字PCR先進的數字PCR技術實現了樣品中的單分子核酸擴增,從而使的DNA定量的精準度提高到了全新水平。Philip與Stilla Technologies的首席執行官兼聯合創始人Rémi Dangla進行了交流,討論了數字PCR技術領域的進展和挑戰。Stilla Technologies公司總部位于法國巴黎,成立于2013年,生產和銷售高精準度的DNA定量和檢測的數字PCR系統。“當我創立公司時,從未做過PCR,”Dangla說。 “但我了解了數字PCR技術之后,馬上就被這個設計巧妙的技術所吸引。”與之前的PCR技術相比,數字PCR是可以顯著提高DNA定量的精準度的一種新技術。“數字PCR技術為PCR技術在檢測稀有突變或低濃度靶標基因方面的應用,賦予了無與倫比的數據可靠性”Dangla說。數字PCR反應,不是傳統式的混好PCR mix后直接擴增,而是將樣品被分散到數萬個微小的液滴后,進行PCR反應。科學家們設計特異性的探針,只......閱讀全文
數字PCR技術在DNA定量精準等領域的應用
數字PCR先進的數字PCR技術實現了樣品中的單分子核酸擴增,從而使的DNA定量的精準度提高到了全新水平。Philip與Stilla Technologies的首席執行官兼聯合創始人Rémi Dangla進行了交流,討論了數字PCR技術領域的進展和挑戰。Stilla Technologies公司總部位
數字PCR在精準醫學領域的十大應用
數字PCR是一種新的核酸檢測和定量方法,借助微液滴或微坑,通過單個模板分子的PCR擴增,可實現不依賴于標準曲線和參照樣本的準確、絕對定量。數字PCR使得反應更靈敏、結果更可靠、展示更直觀,尤其適用于微量或痕量DNA檢測與定量。下面我們就目前已經比較明確的數字PCR應用方向做個介紹。基因表達差異研究數
數字PCR技術的應用領域
從上世紀90年代以來qPCR技術的爆發式發展使得現代核酸檢測技術具有全新的面貌,而進入二十一世紀之后,速度更快、通量更高。成本更低的DNA測序技術正在迅速發展,也是目前競爭最為激烈的研究領域之一,即使在這種情況下,dPCR技術仍然以其高度的靈敏性和特異性在諸多科學領域爭取到屬于自己的一席之地。即使在
數字PCR在早期精準檢驗疫情的應用
? 2016年,全球首例數字PCR動物疫病檢測試劑研發成功,包括禽流感、禽流感H7N9、藍耳病、高致病性美州株、豬的流行性腹瀉等動物疫病檢測試劑盒。此項技術的推出,將有助于在食品安全的源頭及早發現疫情,盡早處理避免更大面積的傳染,更好地控制漏檢,減少傳染人的幾率;也將有助于國家建立規范化、規模化的動
數字PCR技術在DNA甲基化檢測中的應用
DNA甲基化是目前研究最多的表觀遺傳修飾之一,發生于CpG二核苷酸序列C5位置的胞嘧啶上,多發生于CpG島上,研究發現,DNA甲基化參與調節多種細胞過程,包括胚胎發育,轉錄,X染色體失活,基因組印跡、染色體穩定性等。許多研究發現,DNA甲基化在一系列的疾病(如癌癥等)起到十分重要的作用。在癌癥患者中
數字PCR在低豐度DNA模板分子的精確定量的應用
由于絕大部分微液滴中只含單個或不含模板分子,使得低豐度DNA模板分子的擴增不受高豐度模板分子擴增的競爭抑制:與此同時,樣品中可能存在的抑制劑也在分配到微液滴的過程中進行了相對稀釋,作用于單個微液滴內模板擴增的抑制劑數量大幅降低,從而提高PCR擴增對抑制劑的耐受程度,因此可應用于諸多臨床樣品(如血液、
pcr技術應用論文:熒光定量PCR技術在腫瘤研究中的應用
陳文學 鄒學森 陳岳青 黃秀珍 鐘禮瀑?(江西省腫瘤醫院 腫瘤研究所, 江西 南昌 330029)?[摘要] 熒光定量PCR技術具有簡便、靈敏、準確等優點,目前已經在乙肝和性病的診斷和治療中得到了廣泛的應用,但在腫瘤方面的應用還處在研究和開發階段。本文綜述近年國內外相關熒光定量PCR技術在腫瘤研究中
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展(一)
摘要 數字PCR是一項針對單分子目標DNA的絕對定量技術。該技術是將含有DNA模板的反應溶液分配到大量獨立的反應室中并且發生擴增反應,通過統計反應室中的陽性信號來定量DNA的拷貝數。DNA樣品在反應室中隨機和獨立分布是單分子成功擴增和準確定量D NA拷貝數的關鍵因素。本文綜述了數字PCR的發展歷
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展(三)
3.2 dPCR在轉基因植物檢測方面的研究?轉基因植物及相關食品的定量分析主要測定轉入基因的相對含量。目前常用qPCR作為核酸定量方法。dPCR可以不需要校準物而準確測量低拷貝的DNA分子。Corbisier 等用dPCR分析了提取于MON810玉米種子的外源檢測基因和hmg基因的拷貝數,驗證了dP
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展(四)
NGS 是一種識別和確認未知致病菌的前景廣闊的技術,然而其在生物防御和公共健康應用等方面的時效性,卻往往因為缺乏快速、有效、可靠的自動DNA樣品制備方法而受到限制。為了突破這種限制,Kim 等設計了一種基于流體分布元件的數字微流體(DMF) 平臺,使得多子系統模塊能夠進入自動NGS庫樣品
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展(二)
2 ?qPCR與dPCR比較研究 qPCR是目前DNA定量研究的主要技術,該技術通過在PCR反應體系中加入熒光結合染料(SYBR green I) 或熒光標記的探針( 如TaqMan Probes) ,利用實時積累的熒光信號監測整個擴增過程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析,以此來評估
數字PCR技術的應用舉例
EGFR突變的肺癌治療過程中 的液體活檢檢測是一個非常具有挑戰性的工作 ,但這個基因在亞洲人群的高突變頻率使非常多的肺癌患者在接受對應靶向藥中受益(約30%)。數字PCR可以以肺癌患者的血漿中游離腫瘤DNA(CTDNA)為樣品,檢測EGFR敏感性和藥物抗性相關的突變。? ??? 運用數字PCR為精準
普通PCR、實時熒光定量PCR、數字PCR技術的功能區別
?? 一、普通PCR技術? ? KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)? ? Kary Mullis于1983年發明了聚合酶鏈式反應法(polymerase chain reaction ,PCR),據說是載著女友開車的時候,忽然靈光一閃,想到了PCR原理(論開車的好處)
實時熒光定量PCR技術在分子生物學和醫學研究等領域的...
? 定量PCR是在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術。實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied biosystems公司推出,它是一種在PCR反應體系中加入熒光基團,利用對熒光信號積累的實時檢測來監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。該技術不僅實
熒光定量PCR技術的應用
? ? 1、絕對定量分析? ? 這是熒光定量PCR技術的直接應用,可用于檢測病毒及細菌的濃度!? ??? ? 2、相對定量分析及實驗方案? ? 基因表達(gene expression)是指細胞在生命過程中,把儲存在DNA順序中遺傳信息經過轉錄和翻譯,轉變成具有生物活性的蛋白質分子. 遺傳物質DNA
數字PCR在致病微生物(病毒、細菌等)的檢測的應用
疾病預防控制中心、出入境檢驗檢疫局系統的實驗室可以將基于TaqMan探針法的定量PCR體系無縫地轉移到數字PCR上,從而滿足該類實驗室對于檢測結果的要求:靈敏度更高、重復性更好、無需依賴標準曲線的絕對定量結果,同時操作簡便。
熒光定量PCR儀技術及其在醫學中的應用
劉向國 謝國明 (重慶醫科大 重慶市 400016)摘 要 熒光定量PCR儀技術是一種新的核酸定量技術,該技木在PCR儀反應系統中引人了熒光標記探針,具有可實時監測,高靈敏性,高特異性和高精確性的特點,極大地克服了原有PCR儀技術的不足,擴大了PCR儀的應用范圍。關鍵詞 定量pcr;熒光;基因Flu
實時熒光定量PCR在醫學領域的作用
新的愈后指標的研究 對于感染性疾病,在藥物作用至一定程度后,就認為可以停藥了,但是應該在什么停藥,現在大都沒有一個明確的指標,現在所用的指標由于受到檢測方法的靈敏度及準確性限制,這一指標未必合理,因此有必要對治愈的指標以及指標與復發率以及疾病轉化為其他疾病之間的關系等進行進一步的研究,從而為藥
數字PCR在環境監測的應用
?基因目標的環境監測,需要對復雜樣品中低濃度的目標進行準確檢測。ddPCR每次運行中能創建數千個PCR反應室,帶來了目標的準確測定,即使它們濃度很低,因此可以實現對土壤、污水、淤泥、酒泥等為樣本的環境生物學研究和病原微生物監測。
熒光PCR/實時定量PCR技術應用簡介
一.熒光PCR原理1.熒光共振能量傳遞?(FRET)某熒光標記基團在激發光刺激下生成某波長的發射光,當另一屏蔽基團與其距離合適時,原發射光將會被屏蔽基團所吸收,并轉化為其他波長的發射光或熱能,稱之為FRET。2.熒光化學:熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種:熒光探針和熒光染料。PCR擴增時在加
實時熒光定量PCR技術的應用
1. 基因工程研究領域 ① 基因表達研究:對β地中海貧血癥患者β與γ珠蛋白mRNA水平進行檢測,其結果特異性強、定量準確,為了解β地中海貧血的分子病理機制及其臨床診斷提供了可靠的檢測數據。 ② 轉基因研究:利用兩種發光探針及適當的循環閾值,擴增一個轉移后的基因和一個對照基因,以分析轉基因
Azure-Cielo?實時熒光定量PCR系統在檢測單拷貝DNA的應用
介紹:Azure Cielo? 3和Cielo? 6 實時熒光定量PCR系統具有卓越的靈敏度。該系統配置新型的高性能光學系統,采用16組光纖單孔掃描設計,一根光纖用于高能LED激發,另一根用于光信號檢測,可16孔同時采集(圖1)。特殊的激發/發射方式保證單孔掃描時僅激發一個孔,光纖傳導也有效消除
GENEπ數字PCR技術應用教程
數字 PCR( digital PCR ,dPCR ) 下一代DNA/RNA擴增技術。原理是將一個PCR 反應體系分配到大量微小的反應單元中,在每個微反應器中包含或不包含 1 個或多個拷貝的目標核酸分子 (DNA 模板) ,進行“單分子模板”PCR 擴增。擴增結束后,通過陽性反應單元( 通過
-勢頭猛進:精準醫療在腫瘤領域的應用
2015年年初,美國總統奧巴馬提出精準醫療計劃,旨在分析個體在基因組、外界環境、生活方式等方面的差異,從而選擇適應個體化的疾病預防和治療方案。 白宮聲明,美國財政預算將會撥款2.15億美元,用于美國國立衛生研究院(NIH)、美國食品藥品監督管理局(FDA)、美國國家醫療信息技術協調辦公室(ON
熒光定量PCR儀技術及其在醫學中的應用(二)
3 在醫學中的應用3.1 病原體測定PCR技術的問世使病原體檢測能夠快速、方便地進行。由于PCR技術假陽性率太高,只要有微量病原體存在就可得到陽性結果,這并不能作為診斷依據, 只有當一定數量的病原體存在時才有臨床意義。因此,對模板準確定量顯得特別重要,應用熒光技術PCR儀就能夠快速、準確地得到結果。
熒光定量PCR儀技術及其在醫學中的應用(一)
?1 概述??????? 熒光定量多聚酶鏈式反應是一種新的核酸定量技術。該技術將熒光能量傳遞技術(fluorescence resonance energy transfer,FRET)應用于常規多聚酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR儀中,從而進行定量檢測。FRE
數字PCR技術的發展與應用簡介
數字PCR技術的原理數字PCR(Digital PCR-dPCR)技術是一種新的核酸檢測和定量方法,與傳統定量PCR(qPCR)技術不同,數字PCR采用絕對定量的方式,不依賴于標準曲線和參照樣本,直接檢測目標序列的拷貝數。由于這種檢測方式具有比傳統qPCR更加出色的靈敏度和特異性、精確性,dPCR迅
PCR技術應用的領域有哪些
1、核酸的基礎研究:基因組克隆2、不對稱PCR制備單鏈DNA用于DNA測序3、反向PCR測定未知DNA區域4、反轉錄PCR(RT-PCR)用于檢測細胞中基因表達水平、RNA病毒量以及直接克隆特定基因的cDNA5、熒光定量PCR用于對PCR產物實時監控6、cDNA末端快速擴增技術7、檢測基因的表達8、
微滴芯片數字PCR技術在檢測新冠病毒的應用
國家衛健委發布了《新型冠狀病毒肺炎防控方案(第五版)》,其中在實驗室檢測技術指南中明確提出,核酸檢測結果陰性不能排除新型冠狀病毒感染。3月4日,國家衛健委發布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》 中提到了以下兩點:對疑似病例要盡可能采取包括快速抗原檢測和多重PCR核酸檢測等方法對呼吸道病
熒光定量PCR檢測儀應用領域
□ 基礎科學研究 □ 病原體檢測 □ 肉制品摻假 □ 轉基因檢測 □ 食品安全檢測 □ 藥物開發及合理用藥 □ 基因表達 □ 水體監測