分隔式自我復制（聚合酶和其他酶的定向進化的一個新...
分隔式自我復制（聚合酶和其他酶的定向進化的一個新方法）實驗實驗材料 E.coli 抑制菌株 TG1試劑、試劑盒 脫水四環素四甲基氯化銨CSR 油相儀器、耗材 TYE 平板磁力攪拌器實驗步驟 下面的實驗流程詳細描述用 CSR 在 E.coli 中對 Taq 聚合酶突變體的篩選。這個方法保證在標準的 PCR 反應條件下，聚合酶突變體是有活性的。用來產生文庫的方法是核苷酸類似物 [27] 和易錯 PCR [28]，這里不再描述。引物 1 ( 5'-C A G G A A A C A G C T A T G A C A A A A A T C T A G A T A AC G AG G G C AA-3' ) 針對表達載體 pASK75 [29] 是特異的，用 XbaI 和 SalⅠ將 Taq 基因連接到載體 pASK75。引物 2（5&......閱讀全文
分隔式自我復制（聚合酶和其他酶的定向進化的一個新...
分隔式自我復制（聚合酶和其他酶的定向進化的一個新方法）實驗實驗材料?E.coli 抑制菌株 TG1試劑、試劑盒?脫水四環素四甲基氯化銨CSR 油相儀器、耗材?TYE 平板磁力攪拌器實驗步驟?下面的實驗流程詳細描述用 CSR 在 E.coli 中對 Taq 聚合酶突變體的篩選。這個方法保證在標準的
分隔式自我復制（聚合酶和其他酶的定向進化的
分隔式自我復制（聚合酶和其他酶的定向進化的一個新方法） ? ? ? ? ? ? 實驗材料 E.coli 抑制菌株 TG1
分隔式自我復制實驗
實驗材料E.coli 抑制菌株 TG1試劑、試劑盒脫水四環素四甲基氯化銨CSR 油相儀器、耗材TYE 平板磁力攪拌器實驗步驟下面的實驗流程詳細描述用 CSR 在 E.coli 中對 Taq 聚合酶突變體的篩選。這個方法保證在標準的 PCR 反應條件下，聚合酶突變體是有活性的。用來產生文庫的方法是核苷
復制聚合酶的基本特性
中文名稱復制聚合酶英文名稱replication polymerase定 義編號：EC 2.7.7.7。大腸桿菌細胞內真正負責重新合成DNA的DNA聚合酶Ⅲ。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
復制聚合酶的基本信息
中文名稱復制聚合酶英文名稱replication polymerase定 義編號：EC 2.7.7.7。大腸桿菌細胞內真正負責重新合成DNA的DNA聚合酶Ⅲ。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
RNA的自我復制
進一步的研究還發現一些RNA病毒如R17、f2、MS2等，可以以RNA為模板直接復制新的RNA。這些病毒都屬于最簡單的類型。例如，MS2的RNA只含有大約350個核苷酸，僅編碼三種蛋白質：外殼蛋白，附著蛋白（attachment protein，其功能主要是使病毒能附著于寄主細胞并進入其內部）、RN
DNA聚合酶與復制的保真性
DNA復制的保真性是遺傳信息穩定傳代的保證。生物體至少有3種機制實現保真性：①遵守嚴格的堿基配對規律；②5’—3’聚合酶活性中心對底物的選擇，使核苷酸的錯配率僅為10-4~10-5；③3’—5’外切酶活性中心在復制出錯時的即時校對，使錯配率降至10-6~10-8。
全球首個能自我復制的新冠疫苗獲批
近日，日本批準了一種針對新冠病毒的自擴增RNA（saRNA）疫苗——ARCT-154。 據《自然》報道，該疫苗由美國創新RNA療法研發公司Arcturus Therapeutics與澳大利亞生物技術公司CSL合作開發，是世界上第一種完全獲批的saRNA疫苗。 saRNA是使用RNA研發新藥和
全球首個！能自我復制的新冠疫苗獲批
近日，日本批準了一種針對新冠病毒的自擴增RNA（saRNA）疫苗——ARCT-154。 據《自然》報道，該疫苗由美國創新RNA療法研發公司Arcturus Therapeutics與澳大利亞生物技術公司CSL合作開發，是世界上第一種完全獲批的saRNA疫苗。 saRNA是使用RNA研發新藥
RNA的自我復制的方法介紹
進一步的研究還發現一些RNA病毒如R17、f2、MS2等，可以以RNA為模板直接復制新的RNA。這些病毒都屬于最簡單的類型。例如，MS2的RNA只含有大約350個核苷酸，僅編碼三種蛋白質：外殼蛋白，附著蛋白（attachment protein，其功能主要是使病毒能附著于寄主細胞并進入其內部）、RN
關于RNA的自我復制的介紹
進一步的研究還發現一些RNA病毒如R17、f2、MS2等,可以以RNA為模板直接復制新的RNA。這些病毒都屬于最簡單的類型。例如,MS2的RNA只含有大約350個核苷酸,僅編碼三種蛋白質：外殼蛋白,附著蛋白（attachment protein,其功能主要是使病毒能附著于寄主細胞并進入其內部）、
基因復制的其他功能
復制基因的另一個可能的命運是兩個拷貝同樣可以自由地積累退行性突變，只要任何一方突變造成的缺陷能由另一個拷貝補充，這種現象稱為中性的“亞功能化”。這兩個基因都不會丟失，因為它們現在都執行重要的非冗余功能，但最終都無法實現新功能。亞功能化可以通過中性過程發生，其中突變積累既沒有害處也沒有益處。但是，在某
聚合酶鏈[式]反應
中文名稱聚合酶鏈[式]反應英文名稱polymerase chain reaction;PCR定 義通過DNA互補雙鏈解鏈、退火和聚合延伸的多次循環來擴增DNA特定序列的方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
聚合酶鏈[式]反應的定義
中文名稱聚合酶鏈[式]反應英文名稱polymerase chain reaction;PCR定 義通過DNA互補雙鏈解鏈、退火和聚合延伸的多次循環來擴增DNA特定序列的方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
新技術修正30億年來的遺傳錯誤，大大提高測序精度
DNA聚合酶將DNA復制成相同的新鏈DNA，逆轉錄酶將RNA復制成DNA，與DNA聚合酶不同，大多數逆轉錄酶屬于古老進化起源的單一蛋白家族，這些酶本身很容易出現錯誤，因為它們缺乏一個校對區域（3′ -5′核酸外切酶），由于沒有校對功能，RNA復制產物中的錯誤無法被檢測到。因而30億年來，人體RN
遺傳錯誤修正技術使得測序精準度大幅度提高
DNA聚合酶將DNA復制成相同的新鏈DNA，逆轉錄酶將RNA復制成DNA，與DNA聚合酶不同，大多數逆轉錄酶屬于古老進化起源的單一蛋白家族，這些酶本身很容易出現錯誤，因為它們缺乏一個校對區域（3′- 5′核酸外切酶），由于沒有校對功能，RNA復制產物中的錯誤無法被檢測到。因而30億年來，人
關于聚合酶連式反應的簡介
聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction PCR) 又稱為無細胞克隆系統或特異性DNA 序列體外引物定向酶促擴增法，是基因擴增技術的一次重大革新。PCR 是利用單鏈寡核苷酸引物對特異DNA 片段進行體外快速擴增的一種方法。該反應是一個指數式反應，可在短時間內使極微量的目
復制酶的來源和特性介紹
是從感染RNA型噬菌體或癌病毒的細胞分離出來的。(一)一種依賴于RNA的RNA聚合酶。以RNA為模板，由RNA聚合酶催化核苷5'-三磷酸合成RNA。(二)在DNA復制時與新生DNA鏈延長有關的酶。原核細胞復制酶包括DNA聚合酶I，Ⅱ和DNA聚合酶III全酶。DNA聚合酶III全酶是體內DNA
何謂巢式聚合酶鏈反應？
巢式聚合酶鏈反應(nested polymearse chain reaction, nPCR)也稱套式PCR。在這種技術中，首先用一對外引物進行第1輪PCR，然后再使用第1對引物擴增的DNA序列內部的一對引物再次擴增，所以稱為巢式PCR。由于使用了兩對引物并且進行了兩輪擴增反應，因此試驗的
可自我復制的活體機器人問世
從萌芽植物到有性動物再到入侵病毒等，在數十億年的時間里，生物體已經進化出多種復制方式。現在，美國佛蒙特大學、塔夫茨大學和哈佛大學威斯生物啟發工程研究所(以下簡稱威斯研究所)的科學家發現了一種全新的生物復制形式——在運動中產生后代，并將這一發現應用于創造有史以來第一個可自我復制的活體機器人。 這
DNA聚合酶的用途和缺陷
用途聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶擴增的PCR產物，3’末端總是帶有1個非模板依賴型的突出堿基，而這個堿基幾乎總是A，因為Taq酶對dATP具有優先聚合活性，故可用T載體克隆。缺點無3’→5’閱讀校正功能，在PCR擴增過程可引起錯配，30次循環
關于聚合酶鏈反應引物的量和TaqDNA聚合酶的量的介紹
（一）引物的量 引物在PCR反應中的濃度一般在0.1～1μmol/L之間。濃度過高易形成引物二聚體且產生非特異性產物。一般來說用低濃度引物經濟、特異，但濃度過低，不足以完成30個循環的擴增反應，則會降低PCR的產率。 （二）TaqDNA聚合酶的量 典型PCR反應混合物中，所用酶濃度為2.5
關于聚合酶連式反應的操作體系介紹
(1)模板:其中包含有目的基因片段，PCR反應的模板是待檢測核酸(DNA或RNA)分子，雙鏈DNA可直接用于反 應，而RNA則需要用反轉錄酶反轉錄成為cDNA,然后用作聚合酶反應的模板。 (2)DNA聚合酶:最初的聚合酶鏈反應是用DNA聚合酶I的Klenow片段或T4DNA聚合酶催化的。但是由
病毒能欺騙宿主細胞實現自我復制
美國賓西法尼亞大學醫學院研究人員表示，他們發現Kaposi肉瘤相關皰疹病毒（KSHV）能夠欺騙受其感染的細胞完成病毒遺傳物質復制。KSHV的這種復制手段能使其不被人體免疫系統察覺。過去，人們認為KSHV需要病毒蛋白質啟動復制，新的研究結果顯示病毒能夠獨立地從宿主細胞中獲取蛋白質實現自我復制。??
滾環式復制的定義和應用特點
滾環式復制（rolling circle replication）是噬菌體中常見的DNA復制方式。許多病毒DNA的復制、質粒、F因子在接合（conjugation）轉移時其DNA的復制，以及許多基因擴增時都采用這種方式。
聚合酶鏈反應的用途和特性
PCR反應擴增出了高的拷貝數，下一步檢測就成了關鍵。熒光素（溴化乙錠，EB）染色凝膠電泳是最常用的檢測手段。電泳法檢測特異性是不太高的，因此引物兩聚體等非特異性的雜交體很容易引起誤判。但因為其簡捷易行，成為了主流檢測方法。近年來以熒光探針為代表的檢測方法，有逐漸取代電泳法的趨勢。
DNA聚合酶的特性、用途和缺點
特性良好的熱穩定性;70℃ 2h，殘留90%活性;93℃ 2h，殘留60%活性;94℃ 2h，殘留40%活性。5'→3'聚合酶活性，對dATP有優先聚合活性;5'→3'外切酶活性;無3'→5'外切酶活性。用途聚合酶鏈反應(polymerase chai
聚合酶的分類
可分為以下幾個類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶；(2)依賴RNA的DNA聚合酶；(3)依賴DNA的RNA聚合酶；(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶，它使DNA復制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發現的就有三種(分別簡稱為PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；D
聚合酶的分類
可分為以下幾個類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶；(2)依賴RNA的DNA聚合酶；(3)依賴DNA的RNA聚合酶；(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶，它使DNA復制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發現的就有三種(分別簡稱為PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA
巢式聚合酶鏈反應的方法及應用介紹
中文名稱巢式聚合酶鏈反應英文名稱nested PCR定 義由兩次相繼進行的聚合酶鏈反應組成的一種PCR技術，其中第二次PCR是在第一次PCR反應產物序列范圍內進行擴增的，借以提高PCR的成功率和分析的特異性。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）