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    純化DNA實驗_純化質粒(堿裂解法)

    實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LB葡萄糖緩沖液乙酸鉀儀器、耗材離心管實驗步驟1. 單個大腸桿菌克隆接種到 2 ml 含適當抗生素的 LB 中。37℃ 劇烈振蕩孵育 5~8 小時。或者可以培養過夜使飽和。2. 倒 1.5 ml 培養液到已作標記的微量離心管中。把剩下的培養液存放在 4℃。3. 在微量離心機上離心 2 分鐘以沉淀大腸桿菌。吸掉培養液。4. 用 100 ul 葡萄糖緩沖液重懸沉淀物。在室溫孵育 5 分鐘。在這時候充分懸浮大腸桿菌對于獲得盡可能大的產量是很重要的。葡萄糖緩沖液(配 500 ml)50 mmol/L 葡萄糖 4.5 g 葡萄糖10 mmol/L EDTA,pH 8.0 10 ml 0.5 mo......閱讀全文

    分子生物學常用實驗技術(page 1)

    第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定 第二章DNA 酶切及凝膠電泳 第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重組質粒的連接、轉化及篩選 第六章基因組DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技術 第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆 第九章分

    以硅膜為基礎分離基因組 DNA 實驗

    硅化學法已成為從小鼠尾剪取物、動物組織和組織培養細胞等樣品中純化高質量基因組 DNA 的方法之一。Wizard SV 基因組 DNA 純化體系是利用一個充有固相硅的濾膜來純化 基因組 DNA 的。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。試劑、試劑盒PBSNa2 HP04KH2P

    研究蛋白質與DNA相互作用的主要方法

      一、引言   在許多的細胞生命活動中,例如DNA復制、mRNA轉錄與修飾以及病毒的感染等都涉及到DNA與蛋白質之間的相互作用的問題。   重組DNA技術的發展,人們已分離到了許多重要的基因。現在的關鍵問題是需要揭示環境因子及發育信號究竟是如何控制基因的轉錄活性。為此需要:   a、鑒定分析

    DNA合成:你應該知道的秘密

      說起DNA合成,幾位前輩師兄師姐們猶會提起上世紀90年代世行貸款買儀器,好些單位甚至醫院都趕時髦買了DNA合成儀,買回來才發現自己那點合成需求和費用,委實買得起用不起,那昂貴的設備成了擺設。彼時國外DNA合成雖然質量好純度高,可寄回來海關不好過,時間上實在傷不起,幸虧國內迅速崛起的幾家

    研究蛋白質與DNA相互作用的主要方法

    一、引言在許多的細胞生命活動中,例如DNA復制、mRNA轉錄與修飾以及病毒的感染等都涉及到DNA與蛋白質之間的相互作用的問題。重組DNA技術的發展,人們已分離到了許多重要的基因。現在的關鍵問題是需要揭示環境因子及發育信號究竟是如何控制基因的轉錄活性。為此需要:a、鑒定分析參與基因表達調控的DNA元件

    EMSA實驗問題與解答

    以下問題是以Promega公司試劑盒為例。凝膠遷移實驗1)什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗?凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互

    用原子力顯微鏡表征DNA純化效果的實驗

    實驗概要運用原子力顯微鏡(AFM)表征3種DNA純化試劑盒對DNA的純化效果。方法:PCR擴增K562/A02細胞mdr1基因DNA,分別以3種不同的DNA純化試劑盒對PCR產物進行純化后,按終濃度為10 ng?μl-1固定在用1 ng?μl-1 L型多聚賴氨酸預先處理過的新剝離的云母片上,用AFM

    染色質免疫沉淀技術的應用

    隨著人類基因組測序工作的基本完成,功能基因組學逐漸成為研究的熱點。而基因表達的調控又是功能基因組學的一個重要研究領域,要想提供蛋白因子直接調控的證據,需要直接檢測蛋白質-DNA的相互作用,而染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)就是一種研

    引物合成及各種問題總結

    1.引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。DNA合成儀有很多種, 主要都是由ABI/PE 公司生產,無論采用什么機器合成,合成的原理都相同,主要差別在于合成產率的高低,試劑消耗量的不同和單個循環用時的多少。亞磷酰胺三酯法合成DNA片段,具有高效、快速的偶聯以及起始反應物比較穩定的

    以硅膜為基礎分離基因組 DNA 實驗

                試劑、試劑盒 PBS Na2 HP04 KH2PO4 NaCl KC1 消化液 M

    特殊樣本核酸純化方案

    快速、方便、高效的純化實驗方案創新的 InhibitEX buffer 高效去除 PCR 抑制劑靈敏度高,適合多種下游應用可在 QIAcube 上自動操作圖 22. 從不同糞便樣本純化 DNA 產量從 7 個不同的糞便樣本中同時利用 QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit

    以硅膜為基礎分離基因組 DNA 實驗

    試劑、試劑盒 PBSNa2 HP04KH2PO4NaClKC1消化液 MasterMix蛋白酶 K儀器、耗材 自動定位器P250 盒裝吸頭 平板密封條Vac-Man96 真空裝置 真空泵實驗步驟 一、材料1.緩沖液、溶液和試劑1XPBS(用于組織培養細胞)將下列試劑溶解于1L消毒的去離子水中,高壓滅

    PCR擴增產物鑒定與純化

    實驗概要通過瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產物,并對獲得的產物進行割膠純化回收,為接下來的DNA重組和轉化實驗提供外源DNA片段。實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗) 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purifi

    質粒DNA的分離、純化和鑒定 (三)

    操作步驟    一、 細菌的培養和收集    將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。&n

    凝膠遷移實驗(EMSA)——凝膠遷移

    凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)可以:(1)研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。實驗方法原理一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初

    PCR擴增產物鑒定與純化

      實驗原理  瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗)  本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統,結合DN

    PCR擴增產物鑒定與純化

      實驗原理  瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗)  本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統,結合DN

    凝膠遷移實驗(EMSA)

    實驗方法原理 凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列

    染色質免疫沉淀(ChIP)技術的難點及應用-2

    3. 染色質免疫沉淀Input對照:在進行免疫沉淀前,需要取一部分斷裂后的染色質做Input對照。Input是斷裂后的基因組DNA,需要與沉淀后的樣品DNA一起經過逆轉交聯,DNA 純化,以及最后的PCR或其他方法檢測。Input對照不僅可以驗證染色質斷裂的效果,還可以根據Input中的靶序

    建立隨機重疊DNA插入文庫實驗

                試劑、試劑盒 乙酸銨 ATP 乙醇 甘油 蒸餾水 IPTG Mg

    PCR擴增產物鑒定與純化實驗原理及實驗過程

    實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗)本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統,結合DNA制

    PCR擴增產物鑒定與純化

    實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗)本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統,結合DNA制

    建立隨機重疊DNA插入文庫實驗

    下面的方案描述了鳥槍法測序的起始步驟,從靶 DNA 的剪切到用 M13 噬菌體載體構建 DNA 片段文庫,也包括斷裂靶 DNA 的兩種方法--超聲法和噴霧法,以及用 DNA 聚合酶修復片段末端的技術要點。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W.拉塞爾。試劑、

    引物純化的方法有哪些

       如今,引物純化方式多種多樣。各位科研君,每天忙碌奔波于核酸提取、載體構建、蛋白表達等環節,沒有深入了解過各種引物純化方式吧!今天,小編帶各位對各種引物純化方式作下對比。各位科研君在以后的研究中,記得對號入座哦!   一般純化方式    目前,采用的主打的引物純化方式是脫鹽純化。其只能純化掉

    微陣列中期分裂相染色體的比較基因組雜交(CGH) 實驗

    實驗方法原理 實驗材料 高分子質量基因組DNA EcoR I 或 Dpn II試劑、試劑盒 SSCcDNA陣列dNTP 混合液 dCTP 酵母 tRNADNA 聚合酶 I儀器、耗材 Qiaquick PCR 純化試劑盒 BioPrime 標記試劑盒Micrcon 30 濾器雜交爐Maxiprep D

    引物純化的方法有哪些

    如今,引物純化方式多種多樣。各位科研君,每天忙碌奔波于核酸提取、載體構建、蛋白表達等環節,沒有深入了解過各種引物純化方式吧!今天,小編帶各位對各種引物純化方式作下對比。各位科研君在以后的研究中,記得對號入座哦!一般純化方式目前,采用的主打的引物純化方式是脫鹽純化。其只能純化掉引物中的鹽分,并不能去除

    DNA提取純化技術概述

    質粒DNA的提取與純化質粒是一類雙鏈、閉環的DNA,大小范圍從1 kb至200 kb以上不等。通常情況下,質粒可持續穩定地處于染色體外的游離狀態,具有自主復制功能;但在一定條件下也會可逆地整合到宿主染色體上,隨著染色體的復制而復制,并通過細胞分裂傳遞到后代。 質粒已成為核酸克隆和測序最常用

    質粒DNA的超速離心分離(一)

    一、簡述近代質粒DNA分離純化以從大腸桿菌中分離為代表,鑒于大局桿菌(E.coli)在分子生物學研究中的重要地位,從E.coli中分離純化質控DNA〈Piasmid DNA〉成為近年來超離心技術中一個重要課題。而質粒DNA的快速分離純化又對超離心設備(超速離心機、轉頭和附屬設備)提出了更高要求。E.

    蛋白質組學實驗技術大全

    每一個領域的發展都是基于技術的進步和革新,蛋白質組學亦然。蛋白質的可變性和多樣性等特殊性質導致了蛋白質研究技術遠遠比核酸技術要復雜和困難得多,但正是這些特性參與和影響著整個生命過程。在開始實驗之前,先看看這篇技術簡介吧。一 蛋白質與DNA相互作用在許多的細胞生命活動中,例如DNA復制、mR

    凝膠遷移實驗(EMSA)

                實驗方法原理 一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的

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