EMSA實驗問題與解答
以下問題是以Promega公司試劑盒為例。凝膠遷移實驗1)什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗？凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫，在非變性的聚丙烯凝膠電泳上，分離復合物和非結合的探針。DNA-復合物或RNA-復合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究的結合蛋白的不同，可是雙鏈或者是單鏈。當檢測如轉錄調控因子一類的DNA結合蛋白，可用純化蛋白，部分純化蛋白，或核細胞抽提液。在檢測RNA結合蛋白時，依據目的RNA結合蛋白的位置，可用純化或部分純化的蛋白，也可用核或胞質細胞抽提液。競爭實驗中采用含蛋白結合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特異），和其它非相關的片段（非特異......閱讀全文
EMSA實驗問題與解答
以下問題是以Promega公司試劑盒為例。凝膠遷移實驗1)什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗？凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互
引物延伸實驗問題與解答
1)什么是引物延伸實驗？引物延伸實驗用于定量mRNA的量，測定低豐度的mRNA的種類。另外引物延伸實驗可標定轉錄產物的5`-端， 確定轉錄的精確起始。特異的末端標記的引物退火到RNA鏈的互補區域， 隨后用RNA作為模板，用反轉錄酶延伸引物得到cDNA，用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析cDNA。cDNA的
emsa實驗原理
EMSA實驗的原理是基于DNA結合蛋白與DNA的特異性結合，依據實驗需要，設計標記探針、非標記探針、蛋白特異性抗體等參照物。通過電泳遷移率的變化來進行定性和定量分析，鐘鼎生物提供的EMSA實驗（凝膠/電泳遷移率實驗）基于生物素標記探針與對應的DNA結合蛋白的特異性結合，設計合理、科學的實驗方案，為客
EMSA實驗原理
EMSA全稱是Electrophoretic Mobility Shift Assay，中文叫凝膠遷移實驗或電泳遷移率實驗，它是一種研究DNA與蛋白質或RNA與蛋白質相互作用的常用技術，可用于定性和定量分析。這項技術是基于DNA/蛋白質或RNA/蛋白質復合物在聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）中有不同遷
RNA制備的問題與解答
1、塑料制品、玻璃和金屬物品的處理(a)塑料制品：盡可能使用無菌，一次性塑料制品。已標明RNase-Free 的塑料制品，如沒有開封使用過，通常沒有必要再次處理。對于國產塑料制品，原則上都必須處理方可使用。處理方法如下：(1)在玻璃燒杯中注入去離子水，加入DEPC使DEPC的終濃度為0.1%。注意：
凝膠遷移實驗（EMSA）
實驗方法原理 凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列
凝膠遷移實驗（EMSA）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的D
移液器常見問題與解答大全
移液器是實驗室里面最長使用的實驗儀器之一，基本上每一個實驗室人員都曾經或現在使用過移液器，因而也會遇到移液器使用時的一些問題。筆者總結歸納了移液器使用時常見的問題與解答大全，希望對于大家有所幫助：移液器使用時常見的問題與解答大全：問題可能原因提議移液器滲漏多道移液器吸嘴里不均衡的液體水平·吸嘴與移液
濃縮儀常見問題與解答
1、樣品濃縮儀與氮吹儀的區別？答：樣品濃縮和氮吹儀都是用氮氣來進行吹掃，只是各廠家的命名不一樣。2、如何能讓實驗速度更快、效率更高？答：樣品濃縮儀的原理是通過提高樣品的溫度，使樣品的溶劑在無氧狀態下進行揮發，從而快捷高效的達到濃縮的目的。影響實驗速度的原因有兩個：1）加熱的溫度。2）氣體的流量及氣體
SWATH技術常見問題與解答
SWATH（Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra）采集模式是蘇黎世聯邦理工學院及AB SCIEX（全球領先的生命科學分析技術公司）的科學家聯合推出的一項基于質譜應用的新技術。利用此項技術，科學家有史以來首次可
SWATH技術常見問題與解答
SWATH（Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra）采集模式是蘇黎世聯邦理工學院及AB SCIEX（全球領先的生命科學分析技術公司）的科學家聯合推出的一項基于質譜應用的新技術。利用此項技術，科學家有史以來首次
電泳遷移實驗－EMSA
核蛋白的提取 ①用細胞刮子刮取RAW264.7 細胞與VSMC ，移入2.5mlEP 管中。②將細胞用冰冷PBS 洗兩遍，于4 ℃ , 5000g 離心3min ，沉淀細胞。③加5 倍細胞體積的冰浴緩沖液A 洗細胞一次，于4 ℃ ,5000g 離心3 min 沉淀細胞. ④加3 倍細胞體積的冰
電泳遷移實驗－EMSA
1、核蛋白的提取①用 細 胞 刮子刮取RAW264.7細胞與VSMC，移入2.5mlEP?管中。②將細胞用冰冷PBS洗兩遍，于4℃,?5000g離心3min，沉淀細胞。③加5倍細胞體積的冰浴緩沖液A洗細胞一次，于4℃,5000g離心3 min沉淀細胞.④加3倍細胞體積的冰浴緩沖液A懸浮細胞，冰上放置
電泳遷移實驗－EMSA
核蛋白的提取①用細胞刮子刮取RAW264.7 細胞與VSMC ，移入2.5mlEP 管中。②將細胞用冰冷PBS 洗兩遍，于4 ℃ , 5000g 離心3min ，沉淀細胞。③加5 倍細胞體積的冰浴緩沖液A 洗細胞一次，于4 ℃ ,5000g 離心3 min 沉淀細胞. ④加3 倍細胞體積的冰
凝膠遷移實驗（EMSA）實驗方法
凝膠遷移實驗有稱凝膠阻滯實驗或電泳遷移率實驗（EMSA，electrophoretic mobility shift assay），是一種用于蛋白與核算相互作用的技術。最初是用于轉錄因子與啟動子相互作用的驗證性實驗，也可應用與蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。 一、實驗原理 EMSA主要基于蛋白
實驗常見問題解答匯集
BSP甲基化擴增得到的PCR產物可否直接測序，為什么需要構建TA克隆后測序？由于基因組DNA的每個CG位點甲基化程度各不相同，未發生甲基化的C會被重亞硫酸鹽修飾成為U，而C若發生甲基化則不變，這樣如果進行PCR產物測序就有可能在原有的C位點得到雙峰圖，無法確定甲基化的程度，必需通過回收PCR產物，進
測序過程常見問題分析與解答
DNA測序樣品用什么溶液溶解比較好?? ? 答：溶解DNA測序樣品時,用滅菌蒸餾水溶解最好。DNA的測序反應也是Taq酶的聚合反應,需要一個最佳的 酶反應條件.如果DNA用緩沖液溶解后,在進行了測序反應時,DNA溶液中的緩沖液組份會影響測序反應的體 系條件,造成Taq酶的聚合性能下降。 有很多客戶在
eBioscience流式抗體常見問題與解答
1、eBioscience公司提供了哪些抗體？ ?A：物種——人、小鼠、大鼠、非人靈長類、犬類等。檢測指標——包括細胞表面標記（CD分子，膜骨架，趨化因子受體）和胞內指標（細胞因子，核內轉錄因子）。抗體標記——生物素標記抗體，親和純化抗體以及直標熒光素抗體。eB抗體的直標熒光素有（括號內是發射光波長
凝膠遷移實驗（EMSA）——凝膠遷移
凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）可以：（1）研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用；（2）可用于DNA定性和定量分析；（3）用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。實驗方法原理一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初
凝膠遷移實驗（EMSA）之一
實驗操作方法1.探針的標記：（1） 如下設置探針標記的反應體系：待標記探針 （1.75pmol/微升）??????????????????????? 2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer （10X） ? ? ? ? ? ? 1微升Nuclease-Free Water
凝膠遷移實驗（EMSA）之三：實驗步驟
實驗材料：DNA樣品試劑、試劑盒：?? ?[γ-32P]ATP、T4多聚核苷酸激酶、Nuclease-Free Water、T4多聚核苷酸激酶緩沖液、醋酸銨、TE、無水乙醇、TBE buffer、重蒸水、甲叉雙、丙烯酰胺、丙烯酰胺、甘油、過硫酸銨、TEMED（四甲基乙二胺）、EMSA Gel
實驗常見問題解答匯集(一)
實驗常見問題解答匯集(一) BSP甲基化擴增得到的PCR產物可否直接測序，為什么需要構建TA克隆后測序？ 由于基因組DNA的每個CG位點甲基化程度各不相同，未發生甲基化的C會被重亞硫酸鹽修飾成為U，而C若發生甲基化則不變，這樣如果進行PCR產物測序就有可能在原有的C位點得到雙峰圖，
蛋白質組學相關問題與解答
1．為什么通過elisa、WB能檢測到的蛋白在itraq實驗中沒有檢測到？ 人血漿中的蛋白是有上萬種的，而一般質譜只能檢測到五六百種，也就是說只占了其中的百分之幾，這是普遍現象，說明咱們的方法是不存在問題的；其次，ELISA/WB與質譜相對來說靈敏度不一樣，前者具有放大效應，因為其間會用
細胞培養常見問題與解答1
1.為什么要熱滅活血清？加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。2.如何用臺盼蘭計數活細胞？用無血清培養基把細胞懸液稀釋到200－2000個/毫升，在0
細胞培養常見問題與解答2
8.培養基中丙酮酸鈉的作用是什么？丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源。盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。9.為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀？GIBICO的胎牛血清 沒有預老化，儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白
細胞培養常見問題與解答3
15.如何檢測內毒素(熱源)水平？ LAL（Limulus Amebocyte Lysate）試驗是可用的最敏感和特異的檢測細菌內毒素的方法。Levin和Bang 發現細菌可引起鱟（Limulus polyphemus）血管內的凝集作用。內毒素啟動一個細胞內酶原系統（絲氨酸蛋白酶級
細胞培養常見問題與解答4
22.在High Five無血清培養基中去污劑的濃度是多少？ High Five無血清培養基中去污劑的濃度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。 23.High Five細胞用多大的密度凍存？ 3.0x10E6 ce
CST抗體－Western－Blot常見問題與解答
1.Problem：高背景（曝光1-30秒后，背景高或無特異性蛋白帶） 2.Problem：信號弱（1-30秒的曝光后檢測不到信號） 3.Problem：無著色 4.Problem：著色太淺 5.Problem：著色太深 6.
噬菌體展示技術常見問題與解答
1、在噬菌體展示技術的應用中，M13噬菌體與其他噬菌體比有什么優點？ M13噬菌體和與其密切相關的絲狀噬菌體fd和f1均為非裂解性噬菌體，它們在增殖期間均不裂解宿主菌。這就極大地簡化了每輪淘選過程之間的中間噬菌體純化步驟，只用簡單的PEG沉淀方法就足以將噬菌體與其他所有污染的細胞蛋白分開
免疫熒光技術常見問題與解答
1、問：近期要做免疫熒光雙標，不知哪位有免疫熒光雙標技術的詳細步驟及其注意事項？?參考見解：我正在做冰凍組織切片的免疫熒光雙染。我的經驗是：?（1）選取一抗時要來源于兩種不同的動物，我用的是來源于rabbit和rat的抗體，二抗則是不同熒光信號標記的，我用的是donkey anti-rabbit-F