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    建立隨機重疊DNA插入文庫實驗

    試劑、試劑盒 乙酸銨 ATP 乙醇 甘油 蒸餾水 IPTG MgCl2 NaCl 酚 聚乙二醇 TE TM 緩沖液 Tris-HCl TTE 緩沖液 X-gal T4 噬菌體 DNA 連接酶 T4 噬菌體 DNA 聚合酶 T4 噬菌體多核苷酸激酶 大腸桿菌 DNA 聚合酶 瓊脂糖凝膠 聚丙烯酰胺凝膠 噬菌體 DNA ......閱讀全文

    分子生物學常用實驗技術(page 2)

    一、RNA 制備   模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人

    盤點:31項與免疫學有關的分子生物學實驗技術

      現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解,并且導致了免疫新策略的產生,免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。  一、GST pull-down實驗  GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶,GST pull-down實驗是一個行之有效的驗

    常用生物軟件(windows)全面介紹

    常用生物軟件(windows)全面介紹一、基因芯片1、基因芯片綜合分析軟件。 ArrayVision 7.0 一種功能強大的商業版基因芯片分析軟件,不僅可以進行圖像分析,還可以進行數據處理,方便protocol的管理功能強大,商業版正式版:6900美元。 Arraypro 4.0

    常用的分子生物學基本技術

    核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的

    PCR技術(十四):反向PCR

    描述一種大聚合酶鏈反應(PCR)應用的方法,使在已知序列的核心區邊側的未知 DNA成幾何級數擴增。用適當的限制性內切裂解含核心區的DNA,以產生適合于PCR擴 增大小的片段,然后片段的末端再連接形成環狀分子。PCR的引物同源于環上核心區 的末端序列,但其方向性,使鏈的延長經過環上的未知區而不是分開引

    反向聚合酶鏈反應技術

     我們描述一種大聚合酶鏈反應(PCR)應用的方法,使在已知序列的核心區邊側的未知 DNA成幾何級數擴增。用適當的限制性內切裂解含核心區的DNA,以產生適合于PCR擴 增大小的片段,然后片段的末端再連接形成環狀分子。PCR的引物同源于環上核心區 的末端序列,但其方向性,使鏈的延長經過環上的未知區而不是

    盤點:分子診斷常用技術50年的沿革與進步

      一、基于分子雜交的分子診斷技術  上世紀60年代至80年代是分子雜交技術發展最為迅猛的20年,由于當時尚無法對樣本中靶基因進行人為擴增,人們只能通過已知基因序列的探針對靶序列進行捕獲檢測。其中液相和固相雜交基礎理論、探針固定包被技術與cDNA探針人工合成的出現,為基于分子雜交的體外診斷方法進行了

    應用黏粒載體構建基因組DNA文庫

    在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中,真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接,形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中的多聯體。構建在 λ 噬菌體中的文庫以具有感染性的重組噬菌體形式貯存和增殖。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理

    Ion Torrent新一代測序儀介紹

    引言      整個或部分基因組測序的研究問題已解決,研究者的研究重點向著遺傳密碼如何編碼調控細胞功能方向轉移。同樣,在分子水平了解人類健康狀況,基因序列數據則顯得更加重要。大多數的測序都是針對部分基因序列或是一段目標區域,提供必需的數據來解釋給定假說。利用P

    應用黏粒載體構建基因組DNA文庫

                實驗方法原理 在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中,真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接,形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中

    分子雜交

    一、雜交通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的

    分子雜交技術(一)

    一、概述  前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交

    分子雜交技術(一)

    一、概述  前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交

    雙雜交和其他雙成分系統實驗

                實驗材料 載體和酵母菌 試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 SD

    λ噬菌體臂與外源基因組DNA片段的連接實驗

    當 λ 噬菌體臂與外源基因組 DNA 片段相連時,必須考慮到兩個參數:噬菌體臂與潛在插入片段的摩爾比,以及在反應混合物中各類 DNA 的濃度。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理當 λ 噬菌體臂與外源基因組 DNA 片段相連時,必須考慮到兩個參數:噬菌體臂與潛在插入片段的摩爾

    2019年中國學者86篇Cell,Nature及Science文章匯總

      2019年上半年很快就結束了,iNature盤點了中國學者在Cell,Nature及Science發表的成果,我們發現總共有86篇(截至2019年6月24日),具體介紹如下:  4-6月發表的文章  【1】2019年6月21日,西北工業大學王文,中科院昆明動物研究所/BGI 張國捷及丹麥哥本哈根

    λ噬菌體臂與外源基因組DNA片段的連接實驗

                實驗方法原理 當 λ 噬菌體臂與外源基因組 DNA 片段相連時,必須考慮到兩個參數:噬菌體臂與潛在插入片段的摩爾比,以及在反應混合物中各類 DNA 的濃度。

    Raf 蛋白 Ras 結合結構域的簡并進化庫合成

    實驗材料寡核苷酸引物Tag 聚合酶BL21 電轉感受態細胞試劑、試劑盒氨芐青霉素卡那霉素儀器、耗材瓊脂糖凝膠實驗步驟3.1 概論3.1.1 PCA 對空間排列的要求PCA 片段的三維朝向對于 PCA 報告蛋白是否能正確折疊至關重要,它取決于形成復合體的目的蛋白 N 端或 C 端的朝向(圖 15.1

    Raf 蛋白 Ras 結合結構域的簡并進化庫合成以及

    Raf 蛋白 Ras 結合結構域的簡并進化庫合成以及利用片段互補法快速篩選二氫葉酸還原酶的快速折疊且穩定的克隆            

    NGS檢測試劑生產應獲得《醫療器械生產許可證》

      為加強第二代測序技術檢測試劑的規范和指導,進一步保證和提高相關產品的質量,8月8日,中國食品藥品檢定研究院(中檢院)組織制定了《第二代測序技術檢測試劑質量評價通用技術指導原則》(下稱《指導原則》)。  該文件是中檢院發布的首個質量評價技術指導原則,旨在對產品設計、研發及驗證的各關鍵環節進行規范,

    PCR技術應用進展

       PCR技術自1985年建立以來,發展之迅速、應用之廣泛,表明其具有強大的生命力.近些年來,基于PCR的基本原理,許多學者充分發揮創造性思維,對PCR技術進行研究和改進,使PCR技術得到了進上步地完善,并在此基礎上派生出了許多新的用途. 原位PCR技術  原位PCR就是在組織

    PCR技術(六):PCR技術應用進展

    PCR技術自1985年建立以來,發展之迅速、應用之廣泛,表明其具有強大的生命力.近些年來,基于PCR的基本原理,許多學者充分發揮創造性思維,對PCR技術進行研究和改進,使PCR技術得到了進上步地完善,并在此基礎上派生出了許多新的用途. 原位PCR技術  原位PCR就是在組織細胞里進行PCR

    中檢院發布二代測序試劑質量評價通用原則

      一.前言  本指導原則主要針對第二代測序(next generation sequencing,NGS)技術檢測試劑(以下簡稱“NGS檢測試劑”)產品質量提出指導性要求,涉及基本原則、主要原材料、檢測流程及性能評價等方面。  本指導原則是對企業和檢驗人員的指導性文件,但不包括注冊審批所涉及的行政

    用 PCR 控制基因組 DNA 文庫的質量實驗

    在該方案中,用限制性內切酶的混合物處理人類基因組 DNA(內切酶混合物的識別位點為 4bp),產生大概 50?500bp 的片段。最終使用這一類型的表達文庫,是通過利用表型的和生化的篩選方法,分離編碼功能多肽或蛋白片段的基因片段。用KlenowDNA 聚合酶處理后,基因組 DNA 片段成為平末端,然

    反向遺傳學技術及其在FMDV 研究中的應用

    劉光清 劉在新 謝慶閣(中國農業科學院蘭州獸醫研究所農業部畜禽病毒學重點開放實驗室,蘭州730046)摘 要:  反向遺傳技術是一種新興的分子生物學技術, 已廣泛應用于生命科學研究的各個領域。綜述反向遺傳技術研究進展,并討論該技術在口蹄疫病毒研究中的應用。關鍵詞:  反向遺傳學 反向遺傳技術 全長c

    基于 PCR 的 DNA 文庫篩選實驗方法

                試劑、試劑盒 PCR 混合物 PCR 引物寡核苷酸 雜交寡核苷酸 PCR 正對照 PCR 主要混合

    基于 PCR 的 DNA 文庫篩選實驗方法

    試劑、試劑盒PCR 混合物PCR 引物寡核苷酸雜交寡核苷酸PCR 正對照PCR 主要混合物蒸餾水儀器、耗材瓊脂糖凝膠電泳設備實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑蒸餾水2. 酶和酶緩沖液PCR 混合物(可以放在一起冰凍),對于 lml 反應,包括:200nmol 的各種 dNTP;1XVent 溶

    Thermo Fisher Scientific發布Ion Torrent技術更新和新產品預覽

      上周,基因組生物學技術進展年會(AGBT) 在佛羅里達州馬可島舉行,Thermo Fisher Scientific公司在會上發布了Ion Torrent測序技術的最新進展情況。  在周六召開的公司工作會議上,Ion Torrent 研發副總裁Allan Williams提前預告公司正在籌備Io

    植物生物學研究數據庫

    實驗概要植物生物學研究數據庫實驗步驟http://bioinf.scri.sari.ac.uk/cgi-bin/plant_snorna/home 英國 Top 植物種的snoRNA基因數據庫。 綜合 http://bioinformatics.psb.ugent.be/webt

    基因敲除的原理與方法

    基因敲除可以說是基因組 學、細胞分離培養以及轉基因技術的組合。那么基因敲除的原理是什么呢? 基因敲除的方法有哪些呢?在此,做個小結,以供大家學習。一.概述:基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子 生物學技術,是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用D

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