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離子交換層析法 實驗方法原理 利用DEAE纖維素樹脂作為離子交換劑進行柱層析分級分離。 實驗材料 酶蛋白 試劑、試劑盒 DEAE纖維素 NaOH HCL Tris-HCl緩沖液 NaCl 儀器、耗材 層析柱 收集器 磁力攪拌器 ......閱讀全文
生物分子下游純化的對象一般包括蛋白、酶、重組蛋白、單抗、抗體及抗原、肽類、病毒、核酸等。純化前首先需要測定生物分子的各物理和化學特性，然后通過實驗選擇出最有效的純化流程。 1.測定------分子量、PI &nbs
蛋白純化經驗指南生物谷整理 http://www.bioon.com 原創：Chromatography weixingui@263.net， 推薦書籍：《蛋白純化與實驗鑒定指南》、《生物工程下游技術》、《酶工程》、《酶制劑工業》 1) 我現在手頭
28) 首先我想問一下agarose和sepharose區別,我的理解是:都指瓊脂糖,但agarose是未連接其他介質的,而sepharose是連接其他介質的,不知理解對不對?請指教!Glutathione-agarose(4%cross-linked beaded agarose)和Glutath
實驗概要本實驗以面包酵母為初始材料，制備了高純度羧肽酶Y，并對羧肽酶Y的生化性質進行了檢測。實驗原理羧肽酶Y(Carboxypeptidase Y)是由面包酵母中分離得到的一種蛋白水解酶，它對肽和蛋白質羧基末端的各種氨基酸(包括脯氨酸)具有廣泛的水解能力，因此該酶已成為C末端分析中常用
（3）CHO細胞穩定表達系統：動物細胞瞬時表達系統中外源基因沒有穩定地整合到宿主細胞染色體中，一染色體外DNA的形式存在。因而只能瞬時表達。要使外源基因在宿主細胞中高效、穩定地表達，必須建立一個穩定表達系統，包括適宜的表達載體、有效的基因轉染、標記基因和目標基因的選擇與共擴增、受體適當的受體細胞和培
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
所有形式的親和層析法都需要兩個組分間形成特異性相互作用，通過這種作用可以純化其中一種組分。免疫親和層析即利用抗原和抗體的特異性相互作用，是遵循親和層析原理的一個分類 [綜述見 Subramanian(2002)]。事實上，免疫親和層析是免疫沉淀程序規模放大的拓展應用，不同的部分在于, 層析后需要回收
實驗步驟 一、多羥基反應單克隆抗體 我們最先使用了一類特殊的單克隆抗體, 并將其用于免疫親和層析。這些抗體可以用于溫和的免疫親和層析, 因為洗脫條件只需要聯合使用無離液鹽和低分子質量的多羥基化合物 (多元醇），此條件下蛋白質呈非
淺述蛋白質分離純化的新技術摘 要： 本文主要介紹了濁點萃取法、置換色譜法、親和層析法、親和色譜法、凝膠電泳、雙水相萃取等蛋白質的最新分離純化技術，綜和近年來國內外的一些研究結果，結合實際應用的例子，分析了各種分離純化方法的優點，同時指出其不足之處。文章最后展望了蛋白質分離純化技術的發展趨勢。&nbs
PALL蛋白純化填料試用申請活動即將開始 蛋白純化新選擇：多一次嘗試，多一種選擇，不同的結果。PALL蛋白純化填料試用申請活動即將開始申請有效期2011年5月4號-2011年6月4號 您是否為蛋白純化結果不理想而煩惱？試試PALL的層析填料吧，提供與傳統
非肌肉肌動蛋白的純化實驗材料非肌肉肌動蛋白 &n
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統，由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷，人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今
實驗材料 非肌肉肌動蛋白 試劑、試劑盒 DNA 酶Ⅰ緩沖液
實驗材料非肌肉肌動蛋白試劑、試劑盒DNA 酶Ⅰ緩沖液儀器、耗材DEAE 柱實驗步驟1. 準備貯存液和材料。2x DNA 酶Ⅰ緩沖液：20 mmol/L Tris-HCl，pH 8.01 mmol/L DTT0.4 mmol/L CaCI20.4 mmol/L ATP抑蛋白酶肽抑蛋白酶亮抑蛋白酶肽抑胃
本實驗目的是以柱層析的方法進一步純化蔗糖酶蛋白，利用DEAE 纖維素樹脂作為離子交換劑進行柱層析分級分離。實驗方法原理利用DEAE纖維素樹脂作為離子交換劑進行柱層析分級分離。實驗材料酶蛋白試劑、試劑盒DEAE纖維素NaOHHCLTris-HCl緩沖液NaCl儀器、耗材層析柱收集器磁力攪拌器攪拌子燒杯
實驗材料非肌肉肌球蛋白試劑、試劑盒勻漿緩沖液肌動蛋白聚合緩沖液凝膠過濾 羥基磷灰石緩沖液GF HT 緩沖液儀器、耗材大容量轉頭實驗步驟高速離心和 DEAE 層析1. 用不含除了 PMSF 以外的蛋白水解抑制劑的勻漿緩沖液平衡 DEAE 纖維素，取 50 ml 裝到 2.5cm x 35cm 有合適管
表2－1 室溫下由S1提高到S2時每升加固體硫酸銨的克數 0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00 0 55 113 114 175 209 242
11.純化------中草藥有效成分 中藥的化學成分極其復雜。傳統中藥多是煎熬后服用，有效成份多較為親水，包括生物堿、黃酮、蒽醌、皂甙、有機酸、多糖、肽和蛋白質。靈活及綜合性地利用多種層析方法。如離子交換、分子篩、反相層析，更容易分離到單一活性成分。Sephadex LH-20葡聚糖凝膠同時
15.脫鹽、小分子去除使用凝膠過濾介質Sephadex G10，G15，G25，G50等去除小分子，效率高，處理量可達床體積30%。只需在進樣后收集首1/3-1/2柱體積的洗脫液，就可以去除該填料分離范圍上限以下的小分子，簡單直接。由于只是去除小分子，柱高10cm以上即可。整個過程一般可于數分鐘
在病毒感染晚期，由于大量外源蛋白的表達引起昆蟲細胞的裂解，胞質內的物質釋放出來，與 目的蛋白混在一起，從而使蛋白的純化工作變得很困難，另外水解酶的釋放會降解重組蛋白。為了克服以上這些困難，科學工作者先后嘗試用絲蛾肌動蛋白基因啟動子或桿狀病毒ie-1基因啟動子表達外源蛋白，但效果都不明顯。Farr
實驗方法原理 本分析方法是一種簡單、快速和極為靈敏的用于檢測粗制提取物中序列特異性的DNA結合蛋白的方法。在電泳時，與末端標記的DNA片段特異結合的蛋白質阻滯了片段的遷移，因而產生對
本實驗主要用于檢測粗制提取物中序列特異性的DNA結合蛋白。實驗方法原理本分析方法是一種簡單、快速和極為靈敏的用于檢測粗制提取物中序列特異性的DNA結合蛋白的方法。在電泳時，與末端標記的DNA片段特異結合的蛋白質阻滯了片段的遷移，因而產生對應于蛋白-DNA復合物的清晰電泳條帶。實驗材料質粒DNA試劑、
（一）原理離子交換是指液相中的離子與固定相上可解離基團的可逆交換反應。利用這個反應先將要分離的混合物在一定pH的溶液中解離，而后流經固定相，使之與固定相上的可解離基團進行離子交換，吸附于固定相上，凡不能進行交換吸附的成分，則流出層析柱外。再根據交換吸附于固定相上的各組分解離度的差別，運用不同的pH值
實驗概要本文介紹了DEAE—離子交換劑純化血清IgG的原理及操作步驟等。實驗原理離子交換是指液相中的離子與固定相上可解離基團的可逆交換反應。利用這個反應先將要分離的混合物在一定pH的溶液中解離，而后流經固定相，使之與固定相上的可解離基團進行離子交換，吸附于固定相上，凡不能進行交換吸附的成分，則流出層
實驗方法原理 寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解實驗是分析 RNA 蛋合復合物（RNP，核糖核蛋白顆粒）的方法，無論是對于粗提物還是提純后的樣品，對分析 RNP 的結構域的結構都非
（五）離子交換層析介質的技術數據 離子交換介質名稱 最高載量 &
實驗方法原理 寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解實驗是分析 RNA 蛋合復合物（RNP，核糖核蛋白顆粒）的方法，無論是對于粗提物還是提純后的樣品，對分析 RNP 的結構域的結構都非常有效。實驗材料 蛋白酶 KAMV 反轉錄酶試劑、試劑盒 緩沖液DNase ⅠDNase Ⅰ 緩沖液酚氯仿溶液乙酸鈉R
原理 在植物生理生化的研究中，往往要從一個組分復雜的混合物中，將性質很相近的生物大分子分離，這是研究工作中一個很關鍵的問題，需要一種具有高度分辨力的技術，才能滿足這一要求。離子交換層析就是這樣的技術，能夠分離只有很小差異的物質（例如僅有一個氨基酸不同的兩種蛋白質），是分離生物大分子的一
寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解實驗是分析 RNA 蛋合復合物（RNP，核糖核蛋白顆粒）的方法，無論是對于粗提物還是提純后的樣品，對分析 RNP 的結構域的結構都非常有效。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解實驗是分析 RNA 蛋合復合