基因敲除與RNA干擾的關系
20世紀80年代初，胚胎干細胞分離和體外培養的成功為基因敲除奠定了技術基礎。1985年，首次證實的哺乳動物細胞中同源重組(homology recombination, HR)的存在為基因敲除奠定了理論基礎[2]。為了編輯基因，傳統的靶向特定等位基因的同源重組技術被使用，但是，這個方法在當年來說，存在效率低、勞動成本高的缺點，嚴重制約了基礎研究和臨床應用，這就需要科學家探索更為簡潔高效的基因編輯技術。為了實現利用簡單的方法使特定基因失去功能，科學家研發出了RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術，希望更易于研究哺乳動物細胞的基因功能，它具有操作簡單、效果明顯等優點。但RNAi不能作用于所有基因和某些細胞類型(如神經元)，而且存在位置效應、臨時性和不完全敲除的缺點[3]。隨著各種基因編輯技術的進步，如：鋅指核酸酶技術(zinc finger nuclease，ZFN)[4]、轉錄激活樣效應物核酸酶技術(tr......閱讀全文
基因敲除與RNA干擾的關系
20世紀80年代初，胚胎干細胞分離和體外培養的成功為基因敲除奠定了技術基礎。1985年，首次證實的哺乳動物細胞中同源重組(homology recombination, HR)的存在為基因敲除奠定了理論基礎[2]。為了編輯基因，傳統的靶向特定等位基因的同源重組技術被使用，但是，這個方法在當年來說，存
基因敲除，rna干擾，基因沉默有什么關系
基因敲除一般指永久的、不可逆轉的敲除/失活靶基因，目前其中一種熱門的，常見的基因敲除方法是CRISPR/Cas9，利用gRNA靶向靶基因并指導cas9切割基因雙鏈，形成移碼突變或片段敲除來完成基因敲除。基因沉默與基因敲除不同的地方在于，沉默可以是暫時性的、可逆轉的失活基因/抑制基因表達，基因可以是存
倚天屠龍，誰與爭鋒——且看基因敲除與RNA干擾的關系
研究歷史 20世紀80年代初，胚胎干細胞分離和體外培養的成功為基因敲除奠定了技術基礎。1985年，首次證實的哺乳動物細胞中同源重組(homology recombination, HR)的存在為基因敲除奠定了理論基礎[2]。為了編輯基因，傳統的靶向特定等位基因的同源重組技術被使用，但是，這
RNAi——雙鏈RNA引起的基因敲除（2）
在構建雙鏈RNA的表達載體時，使用RNA多聚酶Ⅲ來指導RNA的合成。這是因為RNA多聚酶Ⅲ有明確的啟始和終止序列，而且合成出的RNA不會帶有polyA尾。當RNA多聚酶Ⅲ遇到連續5個胸腺嘧啶時，它指導的轉錄就會終止，并且轉錄產物在第二個尿嘧啶處被切下來。U6啟動子能被RNA多聚酶Ⅲ識別， 合
RNAi——雙鏈RNA引起的基因敲除（1）
1995年，康奈爾大學的Su Guo博士用反義RNA阻斷線蟲基因表達的試驗中發現，反義和正義RNA都阻斷了基因的表達，他們對這個結果百思不得其解。直到1998年， Andrew Fire的研究證明，在正義RNA也阻斷了基因表達的試驗中，真正起作用的是雙鏈RNA[1]。這些雙鏈RNA是體外
RNA干擾（轉錄后基因沉默）實驗
RNA干擾（RNA interference, RNAi）是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。目前主要用于（1）特異性剔除或關閉特定基因的表達 （2）探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的治療 （3）使
RNA干擾（轉錄后基因沉默）實驗
RNA干擾 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 1. 病毒基因、人工轉入基因、轉座子等外源性基因隨機整合到宿主細胞基因組內，并利用宿主細胞進行轉錄時，常產生一些dsR
基因敲除技術
一．概述：基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA?同源重組原理，用設計的同源片段替代靶基因片段，從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展，除了同源重組外，新的原理和技術也逐漸被應用，比較
基因敲除技術
一．概述：基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA 同源重組原理，用設計的同源片段替代靶基因片段，從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展，除了同源重組外，新的原理和技術也逐漸被應用，比較
基因敲除簡介
基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理，用設計的同源片段替代靶基因片段，從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展，除了同源重組外，新的原理和技術也逐漸被應用，比較成功的有基因
小干擾RNA轉錄后基因沉默的介紹
siRNA誘導的轉錄后基因沉默始于RNA誘導的沉默復合物（RISC）的組裝。該復合物通過切割編碼靶基因的mRNA分子來沉默某些基因表達。為了開始該過程，兩條siRNA鏈中的一條（引導鏈）將被裝載到RISC中，而另一條鏈即過客鏈被降解。某些Dicer酶可能負責將引導鏈加載到RISC中。然后，siR
RNA干擾技術(RNA－interference，RNAi)
1995年，康乃爾大學的Su Guo博士在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲（C. elegans）中的par-1基因時，發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義RNA技術特異性地阻斷上述基因的表達，而同時在對照實驗中給線蟲注射正義RNA（sense RNA）以期觀察到基因表達的增強。但得到的結果
基因靶向的基因敲除
實驗步驟構建重組基因載體絕大多數的基因敲除策略都是基于同源重組的機制，其基因載體包括載體骨架、靶基因同源序列和突變序列及選擇性標記基因等非同源序列，其中同源序列是影響同源重組效率的關鍵因素。用電穿孔顯微注射方法把重組DNA轉入受體細胞（一般是胚胎干細胞）核內。同源重組基因重組時以載體的同源序列取代染
RNA干擾實驗技術
實驗概要本文介紹了RNA干擾的原理及基本實驗方法，包括了siRNA的設計、siRNA的制備和siRNA的轉染等方法，及RNA干擾實驗中的注意事項。實驗原理近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因
RNA干擾的簡介
RNAi研究取得了突破性進展，被《Science》雜志評為2001年的十大科學進展之一，并名列2002年十大科學進展之首。由于使用RNAi技術可以特異性剔除或關閉特定基因的表達，所以該技術已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的基因治療領域。
RNA干擾的定義
RNA干擾（RNA interference，RNAi）是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。
RNA干擾主體實驗
siRNA表達載體構建好后，即可進行RNA干擾主體實驗。RNA干擾主體實驗的重點在于：成功將siRNA表達載體導入目的細胞如果目的細胞的質粒轉染效率較低（低于70%），則應采用腺病毒或慢病毒載體，利用病毒載體的高感染率、高表達特性，更好地開展RNA干擾主體實驗。設置好分組和對照按照nature的標準
RNA干擾回復實驗
RNA干擾回復實驗，主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects（脫靶效應）最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
RNA干擾的概念
RNA干擾（RNA interference，RNAi）是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。基因沉默，主要有轉錄前水平的基因沉默(TGS)和轉錄后水平的基因沉默(PTGS)兩類：TGS是指由于DNA修
RNA干擾的特點
1.高效性：Elbashir等在研究中發現分別為25 nmol/L與100 nmol/L的起始雙鏈RNA產生的結果是一樣的，只是高濃度起始的更有效些。將雙鏈RNA濃度降低到1.5 nmol/L時產生的基因沉默效果變化不大，只有當濃度降低到0.05 nmol/L時，沉默的效果才消失。Holen等也證實
RNA干擾主體實驗
siRNA表達載體構建好后，即可進行RNA干擾主體實驗。RNA干擾主體實驗的重點在于：成功將siRNA表達載體導入目的細胞如果目的細胞的質粒轉染效率較低（低于70%），則應采用腺病毒或慢病毒載體，利用病毒載體的高感染率、高表達特性，更好地開展RNA干擾主體實驗。設置好分組和對照按照nature的標準
RNA干擾回復實驗
RNA干擾回復實驗，主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects（脫靶效應）最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
RNA干擾功能特點
1.高效性：Elbashir等在研究中發現分別為25 nmol/L與100 nmol/L的起始雙鏈RNA產生的結果是一樣的，只是高濃度起始的更有效些。將雙鏈RNA濃度降低到1.5 nmol/L時產生的基因沉默效果變化不大，只有當濃度降低到0.05 nmol/L時，沉默的效果才消失。Holen等也證實
RNA干擾制備方法
化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3—4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的siRNA的情況
RNA干擾回復實驗
RNA干擾回復實驗，主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects（脫靶效應）最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
RNA干擾的概念
RNA干擾（RNA interference，RNAi）是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。基因沉默，主要有轉錄前水平的基因沉默(TGS)和轉錄后水平的基因沉默(PTGS)兩類：TGS是指由于DNA修
基因敲除的定義
基因敲除(geneknockout),是指對一個結構已知但功能未知的基因,從分子水平上設計實驗,將該基因去除,或用其它順序相近基因取代,然后從整體觀察實驗動物,推測相應基因的功能。這與早期生理學研究中常用的切除部分-觀察整體-推測功能的三部曲思想相似。基因敲除可中止某一基因的表達外,還包括引入新基因
基因敲除技術簡介
基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理，用設計的同源片段替代靶基因片段，從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展，除了同源重組外，新的原理和技術也逐漸被應用，比較成功的有基因
控制基因敲除法
【探針技術用于檢測由siRNA介導的基因調制】 為了研究基因功能，科學家們常常會有針對性地關斷某些特定的基因。 而要驗證這種基因沉默的有效性, 就需要運用適當的具特異性的檢測方法。理想的檢測方法不僅要測量準確, 而且還要能讓細胞保持完好無損。 ? 利用諸如RNA(核糖核酸)技
基因敲除技術簡介
基因敲除是一種遺傳工程技術，是指通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。基因敲除針對某個序列已知但功能未知的序列，改變生物的遺傳基因，令特定的基因功能喪失作用，從而使部分功能被屏蔽，并可進一步對生物體造成影響，進而推測出該基因的生物學功能。基因敲除技術克服了隨機整合的盲目性和偶然性，是一種理