DNA裂解分析實驗

實驗材料 細胞

試劑、試劑盒 溶解緩沖液RNA 酶A T1 混合液蛋白酶 KDNA 加樣緩沖液

儀器、耗材 Eppendorf 管移液管瓊脂糖凝膠

實驗步驟

1. 將 5X105 細胞移入無菌的 1.5 ml Eppendorf 管中，4℃ 2000 r/min 離心 5 分鐘，棄上清。

2. 加入 20 μl 溶解緩沖液。用移液管尖頭混勻細胞沉淀。

3. 加 10 μl RNA 酶A/T1 混合液，輕彈管尖混勻，不要形成旋渦。37℃ 孵育 30~120 分鐘。

4. 加 10 μl 蛋白酶 K，輕彈管尖混勻，50℃ 孵育至少 90 min，也可過夜。

5. 加 5 μl 6X DNA 加樣緩沖液，在含 0.5 μg/ml 溴化乙錠 TAE 的 1%~1.5% 瓊脂糖凝膠于孔中加 DNA 樣品。

6. 低電壓電泳，可以促進 DNA 片段的分離。

7. DNA 序列梯最后有紫外光顯示，攝影。凋亡細胞形成明顯的 DNA 梯度，而壞死細胞為不清晰的成片條帶。活細胞 DNA 在膠頂部，是一個高分子量條帶。