Northern雜交

DNA 或 RNA 探針

預雜交液 SSC

濾紙 沸水浴 水浴

一、材料

1. 緩沖液和溶液

預雜交液（0.5 mol/L pH 7.2)，7% (m/V) SDS，1 mmol/L EDTA ( pH 7.0)）

SSC ( 0.5X，1X，和 2X ) 含 0.1% (m/V) SDS

SSC ( 0.1X 和 0.5X）含 0.1% (m/V) SDS

2. 核酸和寡核苷酸

DNA 或 RNA 探針（> 2X10⁸ cpm/μg）

固定于膜上的 RNA

3. 專用設備

濾紙（Whamian 3 MM 或相當效果的濾紙)

沸水浴

預熱到 68℃ 的水浴

預設到雜交溫度的水浴

二、方法

1. 在 10~20 ml 預雜交液中 68℃ 溫育膜 2 h。

2. 若使用雙鏈探針，在 100℃ 下加熱 ³²P 標記的雙鏈 DNA 5 min，使之變性，然后迅速移至冰水中冷卻。

3. 把變性的或單鏈放射性標記的探針直接加到預雜交液中，在合適的溫度下繼續溫育 12~16 h。

4. 雜交后，將膜從塑料袋中取出，在室溫下迅速轉移到含有 100~200 ml 1X SSC，0.1% SDS 的塑料盒內，將盒蓋好，置于水平振蕩器上，溫和振蕩 10 min。

5. 將膜轉移至另一含有 100~200 ml 預熱至 68℃、含 0.1% SDS 的 0.5X SSC 的塑料盒中。68℃ 下溫和振蕩 10 min。

6. 重復步驟 5，再洗滌至少 2 次，使 68℃ 下共洗滌 3 次。

7. 在印跡紙上晾干膜，然后讓膜于 -70℃ 下在含增感屏的暗盒內對 X 線片（Kodak XAR-5 或相應的膠片）放射自顯影 24~48 h。此外，也可通過磷圖像系統掃描得到膜上的圖像。