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    一維固相pH梯度等電聚焦(IEFwithIPG)——IPGIEFpH梯度的選擇

    實驗材料膠條實驗步驟對一新樣品,常最先使用寬范圍、線性PH3.5-10梯度 但對大多數樣品,這樣做會喪失 pH4-7 區域的分辦率,許多蛋白質的 pI 值在該區域。利用非線性 pH3.5-10 IPG IEF 膠在一定程度緩解這個問題。 PH3.5-10 非線性膠條在 pH4-7 區域的梯度要比 pH7-10 更為平坦,保證大部分堿性蛋白質都能得到分離的前提下, pH4-7 區域得到更好的分離(圖 3.2) 但用 pH4-7 的 IPG IEF 膠則能在該范圍得到更好的分離效果(圖 J,J) 這些 pH 范圍的膠條目前已經商品化, 實驗室自制 pH4-9 的 IPG 膠也能覆蓋來自許多不同種類樣品的大多數蛋白質。這些梯度的 IPG 膠與加樣杯上桿或膠內泡脹兼容,仕 Muhipho, 和 IPG phor系統都工作良好 均適用于分析膠(上樣量 50-100μg) 或微量制備膠(上樣量至 1mg )典型運行條件如表 3.1 和 3.......閱讀全文

    植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗

    試劑、試劑盒尿素裂解溶液                                       &nbs

    植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗

    試劑、試劑盒尿素裂解溶液IPG 干膠條水化液IPG 膠條平衡液SDS 凝膠緩沖液電極緩沖液儲液丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺溶液過硫酸銨溶液瓊脂糖溶液儀器、耗材等電聚焦儀IPGphor多重垂直 SDS 電泳儀實驗步驟3.1 第一向:在 IPG 膠條中進行等電聚焦( IPG-IEF)采用 IPG ( IPG

    等電聚焦和二維凝膠電泳實驗

    對于復雜混合物,如全細胞裂解物或富集的亞細胞組分,通過兩步正交的分離 (orthogonalseperation),二維凝膠 (2D 膠)電泳可以很好地分離成幾百個至上千個單個蛋白質。第一次分離基于電荷,即使用變性等電聚焦電泳; 第二次分離基于表觀分子質量,即使用變性十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電

    等電聚焦和二維凝膠電泳實驗

    等電聚焦和二維凝膠電泳實驗             試劑、試劑盒 樣品緩沖液

    蛋白質技術——雙向電泳

    實驗概要蛋白質組研究的發展以雙向電泳技術作為核心.  雙向電泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分離約1000個E.coli蛋白,并表明蛋白質譜不是穩定的,而是隨環境而變化.  雙向電泳原理簡明,第一向進行等電聚焦,蛋白質沿pH梯度分離,至各自的等電點;隨后,再

    蛋白質組技術的研究進展

      大規模基因組測序計劃的實施已改變生命科學的重心,在相當短的時期內,一些原核生物和某些低等真核生物的基因組序列已被測定. 1995年,流感嗜血桿菌基因組序列首次被破譯,在此后不到兩年的時間,近50個細菌的基因組序列已被完成. 然而,這僅僅是理解有機物功能的一個起點. 在基因組時代,許多DNA序列信

    蛋白質組技術的研究進展

    大規模基因組測序計劃的實施已改變生命科學的重心,在相當短的時期內,一些原核生物和某些低等真核生物的基因組序列已被測定. 1995年,流感嗜血桿菌基因組序列首次被破譯,在此后不到兩年的時間,近50個細菌的基因組序列已被完成. 然而,這僅僅是理解有機物功能的一個起點. 在基因組時代,許多DNA序列信息僅

    等電聚焦和二維凝膠電泳實驗(一)

    試劑、試劑盒 樣品緩沖液羥乙基二硫化物細胞裂解緩沖液SDS-PAGE 現成溶液二硫蘇糖醇碘乙酰胺儀器、耗材 等電聚焦電泳系統二維SDS-PAGE 多凝膠系統恒溫循環器IPG 干膠條溶脹盤上樣杯旋轉搖動混合器實驗步驟 一、等電聚焦的基本原理等電聚焦 (IEF) 是一種能根據分子內的質子接受點的 p

    植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗(一)

    試劑、試劑盒 尿素裂解溶液IPG 干膠條水化液IPG 膠條平衡液SDS 凝膠緩沖液電極緩沖液儲液丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺溶液過硫酸銨溶液瓊脂糖溶液儀器、耗材 等電聚焦儀 IPGphor多重垂直 SDS 電泳儀實驗步驟 3.1 第一向:在 IPG 膠條中進行等電聚焦( IPG-IE

    一維固相 pH 梯度等電聚焦 (IEF with IPG)

    基本方案 膠條處理 加樣 IPG IEF pH 梯度的選擇 聚焦時間的優化            

    雙向電泳的新進展和新工具

      隨著蛋白質組學概念的提出,雙向電泳(2D gel electrophoresis)一度曾變得很流行。近幾年,因質譜技術的快速發展,LC-MS的熱度似乎更高。然而,在某些應用上,雙向電泳更有優勢。   雙向電泳提供了整個樣品的鳥瞰圖,而這是質譜無法比擬的。它可以對樣品中復雜的蛋白質進行整體性

    蛋白質組學研究中的核心技術—雙向凝膠電泳

    許華林 張曼人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于 2001 年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯合宣布,他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜,至此,人類基因組計劃已基本完成,隨著后基因組時代的到來,蛋白質組學得到了空前的發展,蛋白質組研究旨在揭示基因表達的真正執行生命活動的全部蛋白質

    蛋白質組學研究中的核心技術—雙向凝膠電泳

    人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于 2001 年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯合宣布,他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜,至此,人類基因組計劃已基本完成,隨著后基因組時代的到來,蛋白質組學得到了空前的發展,蛋白質組研究旨在揭示基因表達的真正執行生命活動的全部蛋白質的

    蛋白質組與蛋白質芯片研究現狀及應用

    摘要: 蛋白質組研究目的在于從蛋白水平闡明基因的功能,這對于探索生命的奧秘具有重要的意義。蛋白質芯片是近年來興起的一種強有力的高通量研究方法, 能夠一次平行分析成千上萬的蛋白樣品, 具有很高的敏感度與準確性。它將成為蛋白質組學研究中的強有力的研究方法, 并最終架起基因組學與蛋白質組學的橋梁。1  研

    蛋白質組學研究中的核心技術—雙向凝膠電泳

    人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于 2001 年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯合宣布,他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜,至此,人類基因組計劃已基本完成,隨著后基因組時代的到來,蛋白質組學得到了空前的發展,蛋白質組研究旨在揭示基因表達的真正執行生命活動的全部蛋白質的表達規律和

    幾種雙向凝膠電泳蛋白質檢測方法的比較

    蛋白質組研究要求有高分辨率的蛋白質分離及準確、靈敏的質譜鑒定技術。凝膠電泳中蛋白質的著色不僅影響蛋白質分離的分辨率,同時也影響后續的質譜鑒定。選擇適當的蛋白質染色法將有助于提高蛋白質組學研究結果的質量。蛋白質的染色常用的有4類:有機試劑染色、銀染、熒光染色及同位素顯色。其中有機試劑染色以考馬斯亮藍染

    顯著降低蛋白質樣品的復雜度

      蛋白質組的研究不僅能為生命活動規律提供物質基礎,也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據和解決途徑。由于基因表達往往是通過基因的轉錄、表達產生一個蛋白質前體,在此基礎上再進行加工、修飾,才成為一個具有生物活性的蛋白質,所以同樣的一個基因在不同條件、不同時間和空間可能不只有一種相應的蛋白質,可

    一維固相 pH 梯度等電聚焦 (IEF with IPG)——加樣

    實驗材料蛋白樣品實驗步驟樣品通常是加在放置在 IPG 膠陽極區或陰極區的硅橡膠框內或特殊加樣杯內(圖3. lg, h), 對不同類型的樣品,最好的加樣位置由經驗值確定。最初電壓衛限制在150V 、 30min, 從而使盡隊多的樣品進入加樣杯

    聚丙烯酰胺凝膠(polyacrylamide gel)選擇指導

    Invitrogen提供了大量的涵蓋面廣的蛋白分離預制膠,包括不同的成分,百分比濃度和格式。使用合適的膠百分比濃度,緩沖系統,上樣孔格式以及膠的厚度,對于獲得最好的結果非常重要。以下提供了幫助你選擇適合你應用的正確凝膠的信息。E-PAGE? 96 High-Throughput System是整合的

    用蛋白質組學方法對海洋環境中過氧 化物酶體增殖污...

    用蛋白質組學方法對海洋環境中過氧 化物酶體增殖污染物進行風險評估實驗實驗步驟 一、材料1.動物一 年 中 的 問 一 時 間 在 不 同 米 樣 點 潮 落 時 采 集 貽 貝 Lmk,35?45 mm 長)或者是貝殼長度為 5 cm 的 紫 貽 貝 edwfe)。其中一個采樣點是有記錄的清潔區域,

    用蛋白質組學方法對海洋環境中過氧化物進行風險評估

    實驗步驟一、材料1.動物一 年 中 的 問 一 時 間 在 不 同 米 樣 點 潮 落 時 采 集 貽 貝 Lmk,35?45 mm 長)或者是貝殼長度為 5 cm 的 紫 貽 貝 edwfe)。其中一個采樣點是有記錄的清潔區域,在這里采集到的動物作為對照。2. 富含過氧化物酶體組分的分離在分離過程

    用蛋白質組學方法對海洋環境中過氧 化物酶體增

    用蛋白質組學方法對海洋環境中過氧 化物酶體增殖污染物進行風險評估實驗             實驗步驟

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