包涵體沉淀（σ32)的溶解、重折疊和離子交換層析實驗
試劑、試劑盒包涵體沉淀緩沖液 A脫氧膽酸鈉N-十二烷基肌氨酸鈉儀器、耗材Tissuc-TearorTM 勻漿器透析袋POROS 50S 陽離子交換柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟材料與設備包涵體沉淀 (見實驗 1,P.147)Tissuc-TearorTM 勻漿器（FisherScientific15-338-55)透析袋 (Spectra/PorTM6; 截留分子量 25000Da)POROS 50S 陽離子交換柱（PerSeptive Biosystems)SDS-PAGE 電泳裝置試劑緩沖液 A緩沖液 A+1mol/L NaCl緩沖液 A+50% 甘油脫氧膽酸鈉（DOC)(20% 儲液)N-十二烷基肌氨酸鈉（SKL)(20% 儲液)(配方，見“試劑的配制”，PP.184~189)操作程序用 N-二烷基肌氨酸鈉溶解包涵體沉淀1) 加 18 ml 緩沖液 A 和 2 ml 20%DOC 儲液于包涵體沉淀（DOC ......閱讀全文
包涵體沉淀（σ32)的溶解、重折疊和離子交換層析實驗
試劑、試劑盒?包涵體沉淀緩沖液 A脫氧膽酸鈉N-十二烷基肌氨酸鈉儀器、耗材?Tissuc-TearorTM 勻漿器透析袋POROS 50S 陽離子交換柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟 材料與設備包涵體沉淀 (見實驗 1,P.147)Tissuc-TearorTM 勻漿器（FisherScient
包涵體沉淀（σ32)的溶解、重折疊和離子交換層析實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 包涵體沉淀 緩沖液 A 脫氧膽酸鈉 N-十二烷基肌氨酸鈉 儀器、耗材
包涵體沉淀（σ32)的溶解、重折疊和離子交換層析實驗
試劑、試劑盒包涵體沉淀緩沖液 A脫氧膽酸鈉N-十二烷基肌氨酸鈉儀器、耗材Tissuc-TearorTM 勻漿器透析袋POROS 50S 陽離子交換柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟材料與設備包涵體沉淀 (見實驗 1,P.147)Tissuc-TearorTM?勻漿器（FisherScientifi
包涵體蛋白溶解后的重折疊實驗
實驗步驟 一、常規操作方案 下面這個典型流程對許多蛋白質都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 據 N g u y e n 等(1993)首先開發的方案改編而成，并用于冷泉港蛋白質純化與鑒定課程的不溶性重組蛋白純化部分（Bu
包涵體蛋白溶解后的重折疊實驗
實驗步驟一、常規操作方案下面這個典型流程對許多蛋白質都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 據 N g u y e n 等(1993)首先開發的方案改編而成，并用于冷泉港蛋白質純化與鑒定課程的不溶性重組蛋白純化部分（Burgess and K n u t h ， 1996)。其他類似的流程也可能
包涵體蛋白溶解后的重折疊實驗（四）
三、蛋白質重折疊條件的篩選實驗1. 系統的重折疊篩選在 前 面 所 述 的 常 規 流 程 以 及 討 論 中 , 我 們 假 設 已 經 知 道 了 針 對 目 標 蛋 白 質 的 合 適 重折 疊 溶 液 。然 而 ，這 是 設 計 有 效 的 重 折 疊 方 案 時 最 不 可 缺 少
包涵體蛋白溶解后的重折疊實驗（三）
5. 高 分 辨 率 的 離 子 交 換 層 析蛋白質經過重折疊和過濾后，最后一步的高分辨率離子交換層析柱用于完成 下 面 5項重要工作。⑴ 濃 縮 蛋 白 質 ( 如 從 600 m L 濃 縮 到 4? 8 m L )(2) 去除變性劑(在流穿液中）(3) 去除次要的雜質(在流穿液中，或是與
包涵體蛋白溶解后的重折疊實驗（一）
一、常規操作方案下面這個典型流程對許多蛋白質都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 據 N g u y e n 等(1993)首先開發的方案改編而成，并用于冷泉港蛋白質純化與鑒定課程的不溶性重組蛋白純化部分（Burgess and K n u t h ， 1996)。其他類似的流程也
包涵體蛋白溶解后的重折疊實驗（五）
3. 一個實用的、經濟的、合理的方法有了所有的重折疊篩選方法，你還必須獲得某種讀出（readout)來顯示哪種條件最有效 。最好的情況是你的目標蛋白質是已知的酶，且很容易分析。你只需將你溶解的蛋白質稀釋至不同的重折疊緩沖液中, 等待一些時間以完成重折疊(通常為數小時），然后取一部分稀釋的溶液
包涵體蛋白溶解后的重折疊實驗（二）
二、對該常規操作流程的評論1. 大腸桿菌中重組蛋白的過表達獲得高水平表達與重折疊是不同的主題，在此不會進一步討論(可見本部分的第12章 )。許多系統可以獲得占總細胞蛋白質1 0 % ?4 0 % 的目標蛋白質表達水平(Mak r i d e s，1996; M u r b y et al.，