固相化pH梯度雙向凝膠電泳實驗1
方案1 雙向凝膠電泳鼠肝蛋白質提取物的制備實驗實驗方法原理肝與其他動物組織一樣，可制備用作雙向電泳的材料。離心之后，溶于合適的溶液中即可。不需要濃縮蛋白質或去除干擾物質等額外步驟。所用抽提溶液包括脲、硫脲和酰胺烷基硫代甜采堿去垢劑ASB-14，它們配合使用可最大量地溶解蛋白質。實驗材料鼠肝試劑、試劑盒二硫蘇糖醇（DTT)抽提溶液苯甲基硫酰氟（PMSF)儀器、耗材液氮低溫離心機研缽和研杵實驗步驟1.取一些肝放入研缽中，如果事先沒有被冰凍，可用液氮充滿研缽來保持肝冰凍。用研杵將肝破碎成小塊。2.稱量冰凍肝的小塊 10~40 mg，將其轉移至在冰上放置的離心小管中。操作應迅速以盡可能減少肝樣品的解凍。將剩余的肝儲存在一 80°C。3.在有肝樣品的離心管中，每 40 mg 肝加入 1ml 冷的抽提溶液。每 1ml 抽提溶液加 100 mmol/L PMSF。4.用小研杵（其大小適合在離心管中使用）磨碎肝樣品。5.每 1ml 抽提物中加 ......閱讀全文
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗
實驗方法原理 肝與其他動物組織一樣，可制備用作雙向電泳的材料。離心之后，溶于合適的溶液中即可。不需要濃縮蛋白質或去除干擾物質等額外步驟。所用抽提溶液包括脲、硫脲和酰胺烷基硫代甜采堿去垢劑ASB-14，它們配合使用可最大量地溶解蛋白質。實驗材料 鼠肝試劑、試劑盒 二硫蘇糖醇（DTT)抽提溶液苯甲基硫酰
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗
方案4 雙向凝膠電泳腦脊液蛋白樣品的制備實驗實驗方法原理可用乙醇沉淀人類腦脊液以濃縮其中的蛋白質和除去鹽分，否則這些物質會干擾第一向?IEF。實驗材料人類腦脊液試劑、試劑盒乙醇NaOH增溶溶液β-巰基乙醇儀器、耗材離心管冷凍離心機超聲波儀實驗步驟1.在室溫下解凍腦脊液樣品。當樣品解凍后，旋緊試管蓋，
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗
方案1 雙向凝膠電泳鼠肝蛋白質提取物的制備實驗 方案2 雙向凝膠電泳真核生物細胞裂解物的制備實驗 方案3 雙向凝膠電泳大腸桿菌裂解液的制備實驗 方案4 雙向凝膠電泳腦脊液蛋白樣品的制備實驗 方案5 第一向：蛋白質的等電聚焦電泳實驗
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗1
方案1 雙向凝膠電泳鼠肝蛋白質提取物的制備實驗實驗方法原理肝與其他動物組織一樣，可制備用作雙向電泳的材料。離心之后，溶于合適的溶液中即可。不需要濃縮蛋白質或去除干擾物質等額外步驟。所用抽提溶液包括脲、硫脲和酰胺烷基硫代甜采堿去垢劑ASB-14，它們配合使用可最大量地溶解蛋白質。實驗材料鼠肝試劑、試劑
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗2
方案2 雙向凝膠電泳真核生物細胞裂解物的制備實驗實驗方法原理在生物醫學研究中，培養的哺乳動物細胞是被廣泛使用的材料。本方案中介紹的方法已經成功用于許多人類克隆的癌細胞系和纖維原細胞系（Ji,etal，1994,1997)。雖然多數細胞蛋白質能用此方法提取，但是一些 DNA 結合蛋白可能會丟失。如果研
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗3
方案3 雙向凝膠電泳大腸桿菌裂解液的制備實驗實驗方法原理細菌裂解液含大量核酸，在進行雙向凝膠電泳之前，需先對核酸進行處理。可通過超聲波處理包含脲和 CHAPS 的細菌提取液。當脲存在時，核酸酶（Benzonase) 是有活性的，但是其活性依賴于 Mg2+。核酸酶處理后加入 EDTA 以抑制金屬蛋白酶
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗5
方案5 第一向：蛋白質的等電聚焦電泳實驗實驗方法原理這里所描述的分離蛋白質的兩種方法都是基于蛋白質所帶凈電荷的多少，使用固相化的 pH 梯度凝膠進行的 IEF 技術。這些方法作為雙向凝膠分離的第一向，除了利用傳統的水平電泳儀進行 IPG 凝膠的等電聚焦外（方案 5 方法 A)，還能在自帶的電泳槽里使
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗6
方案6 垂直 SDS 平板凝膠的制備：均一凝膠的灌制實驗實驗方法原理蛋白質通過 IEF 進行分離之后，可進行第二向電泳，即 SDS-PAGE。本方案詳細介紹了灌制均一 SDS-PAGE 凝膠的方法。均一凝膠（具完全相同的%T和％c) 對特殊分子量范圍的蛋白質有較好的分離效果，因其灌制方法簡單而被普遍
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗7
方案7 垂直SDS 平板凝膠制備：同時灌制多梯度凝膠實驗實驗方法原理對于分離寬分子量范圍的蛋白質，梯度 SDS-PAGE 凝膠可提供最佳分析方法，產生更清晰的蛋白質點。通過減少凝膠中孔的尺寸，可使擴散減少。但是，梯度凝膠重復性較差，所以通常用多凝膠灌制裝置來同時灌制，制作一套凝膠來進行同一系列的實驗
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗8
方案8 第二向：蛋白質的 SDS-PAGE 實驗實驗方法原理在第一向 IEF 和 IPG 膠條平衡之后，需進行第二向 SDS-PAGE。SDS-PAGE 是基于蛋白質分子量的不同而將其分離的。這種分離系統可從多家供應商處獲得，在許多蛋白質化學實驗室中也普遍使用。這里介紹放置 IPG 膠條的方法以及第
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗9
方案9 膠體考馬斯亮藍染色實驗暫未評分點評實驗，有機會獲丁當獎勵?+收藏固相化 pH 梯度雙向凝膠電泳實驗標簽：雙向凝膠電泳蛋白質 固相化pH 蛋白質與蛋白質組學實驗指南 第四章雙向電泳是研究蛋白質組學的一種有效方法。與單向電泳相比，它能從復雜的蛋白質混合物中分離出更多的成分。電泳時，蛋白質遷移速度
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗10
方案11 銀氨染色實驗方法原理銀染聚丙烯酰胺凝膠首先由 Switzer 等引進（1979)，已迅速成為一種最普遍使用的高靈敏度蛋白質染色方法。因存在背景高、重復性不好及銀鏡等問題，多年來對此方法的改進較多。目前，Rabilloud 等（1994b）在文獻中發現 100 多種不同的方案，但所有這些方案
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗11
方案11 與質譜兼容的銀染法實驗實驗方法原理在方案 11 中介紹的銀氨方法是用于檢測在 SDS-PAGE 凝膠上蛋白質的最靈敏的方法之一。但是，這種方法和其他標準銀染方法都不適合于質譜分析，而質譜已成為鑒定雙向凝膠上蛋白質的最好方法。因為在凝膠中被質譜分析的蛋白質不能被修飾，許多通常用的敏化試劑（例
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗12
方案12 用 SYPRO Ruby 進行熒光染色實驗材料含蛋白質樣品的凝膠試劑、試劑盒固定液SYPRO Ruby 染料儀器、耗材聚丙烯塑料平皿往復式或定軌式搖床UV或藍光透射儀實驗步驟1.將膠放入聚丙烯塑料平皿中，其中應有足夠的固定溶液，使凝膠在平皿中能自由漂浮。在搖床上搖動 30 min。如果是多
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗13
方案13 用 GelCode 磷蛋白染色試劑盒對磷蛋白進行染色實驗實驗材料含蛋白質樣品的凝膠試劑、試劑盒乙酸鉬酸銨溶液含硝酸的鉬酸銨溶液甲基綠溶液NaOH磺基水楊酸溶液含氯化鈣的磺基水楊酸溶液儀器、耗材帶有蓋子的玻璃或塑料平皿烘箱往復式或定軌式搖床實驗步驟1.將凝膠放入盛有 50 ml 水的平皿中，
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗14
方案14 雙向凝膠的槽式轉移實驗實驗材料包含蛋白質樣品的凝膠試劑、試劑盒轉移緩沖液儀器、耗材印跡紙硝化纖維素薄膜或 PVDF 膜電源電泳轉移設備實驗步驟1.測量 SDS-PAGE 凝膠的尺寸，將轉移膜剪成與凝膠相適應的尺寸。槽式轉移系統的膜根據需要可以剪成比凝膠大或者小。2.用水將薄膜潤濕或用甲醇將
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗15
方案15 雙向凝膠的半干印跡實驗實驗方法原理當 “ 三明治”結構中的濾紙浸透緩沖液時，半干印跡轉移設備能將蛋白質從凝膠轉移到膜上。和槽式印跡轉移設備相比，半干印跡只用較少的緩沖液；因為電極板靠得很近，故轉移時只要求較低的電壓。實驗材料含有蛋白質樣品的凝膠試劑、試劑盒轉移緩沖液儀器、耗材印跡紙支持性纖
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗16
方案16?用麗春紅 S 染色膜上的蛋白質實驗材料轉膜的蛋白質試劑、試劑盒麗春紅乙酸實驗步驟1.用麗春紅 S 染液浸沒轉移后的膜，輕搖 5 min。2.棄去染液，用水清洗膜，重復幾次，直到蛋白質條帶變得清晰。不要重復使用染料，因為這可能使結果重復性變差。第一次用完后，將染料盡量排盡。3.用一只軟鉛筆標
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗17
方案17 用考馬斯亮藍 R250 染色膜上的蛋白質實驗材料轉膜的蛋白質試劑、試劑盒考馬斯亮藍 R250甲醇乙酸實驗步驟1.將轉移后的膜浸在考馬斯亮藍染液中，輕搖 5min?。2.棄去染液，在搖床上用含乙酸的甲醇進行脫色。不要重復使用染液，因為這樣會使結果的重復性變差。3. 用水洗膜，輕搖 5min。
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗18
方案18 用印度墨水染色膜上的蛋白質實驗材料轉膜蛋白試劑、試劑盒印度墨水PBS吐溫-20溶液實驗步驟1.將膜浸人吐溫-20 溶液中，輕搖 10 min。2.棄去吐溫-20 溶液。3.重復步驟1與2三次。4.將膜轉人印度墨水中，輕搖染色 2~18 h。5.棄去染液，用吐溫-20 溶液洗膜，輕搖 5 m
固相化－pH－梯度雙向凝膠電泳實驗19
方案19 用膠體金染色膜上的蛋白質實驗材料轉膜蛋白試劑、試劑盒膠體金染液PBS (PH 7. 2)吐溫-20溶液實驗步驟1.將膜浸入吐溫-20 溶液中，37°C，輕搖 45 min。2.室溫下，用吐溫-20 溶液洗膜，輕搖 5 min。3.棄去洗液，多次重復步驟①和②。4.室溫下在膠體金染液中染膜
固相萃取前調節ph
近年來分析檢測技術有了很大的飛躍，但樣品前處理依然是科研工作者必須面對的挑戰。 固相萃取（Solid Phase Extraction，簡稱SPE）是一種從二十世紀七十年代中期開始發展起來，用途廣泛而且越來越受歡迎的樣品前處理技術。根據吸附劑填料及吸附機理的不同，主要分為正相、反相、離子交換和
簡述固相萃取中的PH影響
西蒙-奧德里奇生物與化學制品有限公司總部位于德意志聯邦共和國巴伐利亞首府慕尼黑，創辦于1988年，是一家世界著名的生物與化學制品研發制造商。旗下產品Simon Aldrich固相萃取柱在業界獲得廣泛好評。固相萃取柱的使用有許多需要注意的問題。用在固相萃取中的溶液有很大pH范圍的溶液有。硅膠
固相pH梯度等電聚焦實驗
實驗方法原理 固相 pH 梯度凝膠是由固相 pH 梯度介質（丙烯酰胺衍生物）共價結合到聚丙烯酰胺凝膠中并形成 pH 梯度，所以制膠過程比載體兩性電解質凝膠復雜。灌膠的方法與常規聚丙烯酰胺梯度凝膠和 SDS 梯度凝膠相似。高質量的凝膠介質和固相 pH 梯度介質，聚合過程以及漂洗對固相 pH
固相pH梯度等電聚焦實驗
制膠 等電聚焦 pH 梯度的測定 檢測 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 固相 pH 梯度凝膠是由固相 pH 梯度介質（丙烯酰胺衍生物）共價結合到聚
簡述固相萃取中的PH影響
用在固相萃取中的溶液有很大pH范圍的溶液有。硅膠作為基體原料，如高壓液相色譜柱，通常穩定的pH范圍是2-7.5。當pH高于和低于這個范圍，鍵合相就會水解和從硅膠上斷鏈下來，或者硅膠本身就溶解了。然而，在固相萃取中，常常溶液只與吸附劑接觸較短的時間。實際上固相萃取管都是一次性使用，允許任何pH溶液以
固相pH梯度等電聚焦實驗——pH－梯度的測定
試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液過硫酸銨貯液實驗步驟由于固相 pH 梯度凝膠的導電性很低，不可能用表面電極測定凝膠表面的 pH。但對于寬范圍的固相 pH 梯度可以用等電點蛋白標準來測定，方法同載體兩性電解質等電聚焦。但目前還沒有合適的市售蛋白標準可用于測定窄范圍的固相 pH 梯度。灌制凝膠時，pH 梯度
固相pH梯度等電聚焦實驗——檢測
試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液過硫酸銨貯液實驗步驟1. 各種染色方法在所述的染色方法，包括各種考馬斯亮藍方法、銀染色、熒光探針法、放射自顯影、免疫固定等均適用于固相 pH 梯度等電聚焦后的檢測。作者實驗室進行轉鐵蛋白的考馬斯亮藍 R-250 染色時，脫色困難。用 G-250 染色時，脫色同樣困難。為了
固相萃取萃取方式、鹽濃度和pH
萃取方式、鹽濃度和pH：SPME的操作方式有兩種，一種為頂空萃取方式，另一種為浸入萃取方式，實驗中采取何種萃取方式主要取決于樣品組分是否存在蒸氣壓，沒有蒸氣壓的組分只能采用浸入方式來萃取。在萃取前于樣品中添加無機鹽可以降低極性有機化合物的溶解度，產生鹽析，提高分配系數，從而達到增加萃取頭固定相對分析
手動固相萃取裝置與自動化固相萃取儀的介紹
手動固相萃取裝置類似于溶劑過濾裝置，所不同的是由萃取膜片取代過濾膜片。自動化固相萃取儀則可以自動完成大體積水樣萃取的全過程。