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肽質量指紋圖譜—MALDITOF法鑒定蛋白質實驗

實驗材料測序級豬胰蛋白酶試劑、試劑盒碳酸氫銨碳酸氫銨緩沖液乙腈 碳酸氫銨緩沖液消化緩沖液儀器、耗材真空離心機烤箱實驗步驟許多凝膠染色方法適用于后續的 MALDI-TOF 肽質量指紋圖譜（PMF ) 分析。在第 14 章已經比較討論了一些染色方法的性能和兼容性。3.1 膠內消化凝膠消化方法改編自 Jensen 等。對于凝膠處理和消化步驟，必須認真處理樣品，盡量減少外源性角蛋白的污染（如頭發、皮膚、羊毛衣服、氣流、通風冷卻等）（見注釋 1)。1. 從二維聚丙烯酰胺凝膠挖蛋白質點( 1 ) 將 1 ml 槍頭在離尖端 5 mm 處用刀片切除，做一個打孔器（切口直徑 1~2 mm ) ( 見注釋 2) 。( 2 ) 挖取凝膠點，并轉移到離心管中。2. 清洗凝膠碎片( 1 ) 用 100 μl 碳酸氫銨緩沖液清洗（振蕩 15 min) ，然后棄上清液。( 2 ) 用 100 μl 乙腈/碳酸氫銨緩沖液洗兩次（振蕩 15 min) ，然后棄......閱讀全文