用肽適配體正向分析細胞過程實驗1
實驗材料用于遺傳學篩選的酵母株肽適配體庫試劑、試劑盒完全極限（CM） 缺失成分液體培養基和平板儀器、耗材30℃ 培養箱實驗步驟1. 用高效乙酸鋰轉化法將 50～100 ug 肽適配體庫（在 pJM-2 或 pJM-3 中）轉化酵母篩選株（106～107 轉化株）。將轉化株涂布到 10 cm Glu/CM-Trp 平板上并于 30℃ 培養至克隆直徑為 1 mm （2～3 天）。2. 收集酵母細胞，測定平板效率。3. 接種 10 個庫等價物到 1 ml Gal/Raf/CM-Trp 液體培養基中。于 30℃ 振蕩培養 4 h。4. 室溫下，于 3000 g 離心 4 min。吸去上清，將酵母沉淀重懸于無菌水中。5. 將酵母涂布到 10 cm Gal/Raf/CM-Trp 篩選平板上并于選擇條件下培養。6. 將陽性克隆劃線接種到 Glu/CM-Trp 主平板上。7. 將主平板復印到 Glu/CM-Trp 和 Gal/Raf/......閱讀全文
用肽適配體正向分析細胞過程實驗1
實驗材料 用于遺傳學篩選的酵母株肽適配體庫 試劑、試劑盒 完全極限（CM） 缺失成分液體培養基和平板 儀器、耗材 30℃ 培養箱 實驗步驟 1. 用高效乙酸鋰轉化法將 50～100 ug 肽適配體庫（在 pJM-2 或 pJM-3 中）轉化酵母篩
用肽適配體正向分析細胞過程實驗
實驗方法原理 實驗材料 用于遺傳學篩選的酵母株肽適配體庫試劑、試劑盒 完全極限（CM） 缺失成分液體培養基和平板儀器、耗材 30℃ 培養箱實驗步驟 1. 用高效乙酸鋰轉化法將 50～100 ug 肽適配體庫（在 pJM-2 或 pJM-3 中）轉化酵母篩選株（106～107 轉化株）。將轉化株涂布到
用肽適配體正向分析細胞過程實驗2
輔助方案 肽適配體靶點的鑒定 實驗方法原理 通過配對相互作用或捕獲法鑒定的肽適配體的假定靶點應當通過遺傳學測試進行驗 證，例如： 1. 用免疫沉淀法確定體內適配體的相互作用； 2. 通過上位（顯）性分析以確定適配體在與靶蛋白相同的區域發揮功能； 3. 比較由靶蛋白刪除或過表
構建硫氧還蛋白肽適配體組合庫實驗
實驗材料 E.coli MC 1061 （Bio－Rad）硫氧還蛋白表達載體質粒DNA 洗脫液 試劑、試劑盒 DNA 聚合酶DNA 連接酶小牛腸堿性磷酸酶（CIP）限制性內切核酸酶反應緩沖液4dNTPTris·Cl培養基 儀器、耗材 QIAquick 膠回收試劑盒
構建硫氧還蛋白肽適配體組合庫實驗
實驗方法原理 實驗材料 E.coli MC 1061 （Bio－Rad）硫氧還蛋白表達載體質粒DNA 洗脫液試劑、試劑盒 DNA 聚合酶DNA 連接酶小牛腸堿性磷酸酶（CIP）限制性內切核酸酶反應緩沖液 4dNTPTris·Cl培養基儀器、耗材 QIAquick 膠回收試劑盒質粒制備試劑盒DNA 合
肽適配體的親和力成熟實驗
實驗材料質粒 DNA酵母株試劑、試劑盒Taq 聚合酶10×緩沖液引物dATPdGTPdCTPdTTPMgCl2MnCl2完全極限（CM） 缺失成分培養基和平板Xgal 平板儀器、耗材PCR 管PCR 純化柱自動熱循環器30℃ 培養箱實驗步驟實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」1. 制備
肽適配體的親和力成熟實驗
實驗方法原理 實驗材料 質粒 DNA酵母株試劑、試劑盒 Taq 聚合酶10×緩沖液引物 dATPdGTP dCTPdTTPMgCl2 MnCl2完全極限（CM） 缺失成分培養基和平板Xgal 平板儀器、耗材 PCR 管PCR 純化柱自動熱循環器 30℃ 培養箱實驗步驟 實驗所需「材料」、「試劑」、「
抗肽抗體的制備實驗1
實驗材料抗體試劑、試劑盒磷酸鈉緩沖液MBS二甲基酰胺EDTAPBS儀器、耗材分光光度計離心機實驗步驟1. ?將10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸鈉緩沖液中，置于一個2 ml 的玻璃試管，加50 μl MBS/DMF溶液，于室溫下溫和攪拌30 min。?2. ?加
用肽底物檢測蛋白質激酶的活性和特異性實驗1
利用肽底物分析酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ試劑、試劑盒酪氨酸激酶分析緩沖液酪蛋白激酶肽底物溶液實驗步驟1. 在離心管里配制 50 μl 反應混合物：5X 酪氨酸激酶分析緩沖液?????????????????????????? 10 μl10 mmol/L 酪蛋白激酶肽底物溶液??????????????? 5
利用雙雜交系統相互作用阱／篩選特定蛋白肽適配體實驗
實驗材料DNA酵母株試劑、試劑盒PCR 引物聚乙二醇甘油存儲液Tris·ClX-gal 平板完全極限（CM） 缺失成分培養基和平板儀器、耗材30℃ 和 42℃ 培養箱或水浴實驗步驟實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」1. 使用標準的亞克隆技術，將編碼誘餌蛋白的 DNA 插入 PEG20