干細胞的鑒定實驗——免疫電鏡膠體金標記技術
實驗步驟免 疫 電 鏡 膠 體 金 標 記 技 術免疫電鏡技術是利用抗原抗體特異性結合的原理，在細胞超微結構水平上定位、定性和定量，原位顯示抗原大分子的技術。 1971 年 Faulk 等將膠體金標記抗體技術應用到電鏡中，開始了免疫電鏡膠體金標記技術。該技術的優點是：膠體金顆粒致密，易于辨認 ；定位比酶標記反應物更精確，同時還可以做定量分析；由于金顆粒直徑的不同 (適合電鏡的金顆粒直徑為 5——10n m )，可以在同一切片上分別標記不同的抗體以做雙標記或多標記。免疫電鏡膠體金標記技術還可以用到冷凍超薄切片、冷凍置換、冷凍蝕刻和掃描電鏡樣品制備中。免疫電鏡膠體金標記法可以分成包埋前標記法和包埋后標記法。前者由于金顆粒較大 ，對細胞膜的穿透性差，一般只用于細胞表面的抗原表面標記。如果要做細胞內細胞器的定位標記，可 以 用 Triton X -IOO 等活性劑給細胞膜打洞，但是活性劑會破壞細胞的超微結構。目前國外已成功制備了 I n......閱讀全文
干細胞的鑒定實驗——免－疫－電－鏡－膠－體－金－標－記－技－術
實驗步驟免 疫 電 鏡 膠 體 金 標 記 技 術免疫電鏡技術是利用抗原抗體特異性結合的原理，在細胞超微結構水平上定位、定性和定量，原位顯示抗原大分子的技術。 1971 年 Faulk 等將膠體金標記抗體技術應用到電鏡中，開始了免疫電鏡膠體金標記技術。該技術的優點是：膠體金顆粒致密，易于辨認 ；定位
干細胞的鑒定實驗——透－射－電－鏡－樣－品－制－備－技－術
實驗步驟透 射 電 鏡 樣 品 制 備 技 術為了滿足透射電鏡觀察的要求，超薄切片必須做到以下幾點：①切片能夠耐受電子 束 的照射，在熱和高真空條件下有一定的穩定性。②細胞的超微結構保存良好，盡量減少人工假象。③ 切 片 厚 度 一 般 在 60?80nm 為 宜 。切片太薄可得到較高的分辨率，但
T－C－R－庫－的－抗－原－譜－/－免－疫－掃－描－技－術－分－析
實驗步驟基 本 方 案 1 人 和 小 鼠TCR受體庫多樣性的免疫掃描技術分析材 料展
干細胞的鑒定實驗——流－式－細－胞－儀－檢－測－分－析－技－術
實驗步驟流 式 細 胞 儀 檢 測 分 析 技 術實 驗 材 料(1) 不同來源的干細胞，細胞數不少于 5xl0?5?個/管。(2) 熒光標記的抗體或抗體及熒光二抗。(3)PBS。實 驗 步 驟(1) 將 細 胞 用 PBS 充分洗滌后重懸于 5000 PBS 中，如果細胞收集和鑒定不能同天完成，可
免－疫－球－蛋－白－M(IgM)和－免－疫－球－蛋－白－D(IgD)－的純化實驗
實驗步驟備 選 方 案 1 硫 酸 銨 沉 淀 法 純 化 IgM此法適用于多數 IgM 抗體，尤其是一些在水中不能形成沉淀的 IgM 抗體。附 加 材 料（其 他 材 料 見 基 本 方 案 1 )飽和硫酸銨（SAS)硫酸銨結晶（CAS)硼酸緩沖液，可選備 選 方 案 2 甘 露 聚 糖 結 合
干細胞的鑒定實驗——掃－描－電－鏡－樣－品－制－備－方－法
實驗步驟掃 描 電 鏡 樣 品 制 備 方 法取材取材的要求基本與透射電鏡相同，但觀察樣品面積可大些 [(l-l.5) mm x (3?5)mm 。清洗組織表面如覆蓋有黏液、分泌物 (如 氣管、腸等) 或有一些雜物 (如胃表面除有分泌物外還有未消化的食物等) 的樣品，需經過充分清洗后方可固定，否則將
單－鏈－抗－體－的－噬－菌－體－展－示－技－術
實驗步驟?基 本 方 案 1 全套單鏈抗體噬菌體載體的構建材 料新鮮分離的小鼠脾臟或者 IO7 雜 交 瘤 細 胞（單 元 1*3)R N A 提取試劑R T -P C R 試劑D E P C 水寡 核 苷 酸 引 物（表 14. 3.1)DNA marker瓊脂糖膠回收試劑盒（Qiaquick G
蛋白質分離和分析——免－疫－印－跡－和－免－疫－檢－測
實驗步驟基 本 方 案 1 液體容器中的蛋白質印跡材 料待分析樣品標準分子質量蛋白質，預 染 型（Sigma 或 Bio-Rad) 或 生 物 素 化 型（Vector labs 或Sigma)轉移緩沖液無粉手套Scotch-Brite 墊 片（3M ) 或類似海綿Whatman 3M M 濾紙或類
免－疫－球－蛋－白－M(IgM)和－免－疫－球－蛋－白－D(IgD)－的純化
實驗步驟基 本 方 案 1 用透析和凝膠過濾層析法純化 IgM此 法 純 化 的 IgM 可達到較好純度，可用于酶解、異 硫 氰 酸 鹽 熒 光 素（FITC) 標記 、生物素標記或放射性標記。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)腹 水 或 單 克 隆 抗 體（MAb) 上 清（單 元 1.4)
前庭功能檢查眼震電描記術的簡介
用眼震電描記儀記錄眼球震顫。其生理基礎是利用電子儀器記錄角膜和視網膜之間的電位改變。眼球后部和視網膜帶負電,而眼球前部及角膜帶正電,因此眼球運動就產生電位改變,此稱為莫勒氏原理。 眼震電圖(ENG)是眼震的客觀記錄,較肉眼觀察為準確。根據記錄可測出快慢相時間及眼震頻率。 測量眼震的強度以慢相
干細胞的鑒定實驗
透 射 電 鏡 樣 品 制 備 技 術為了滿足透射電鏡觀察的要求，超薄切片必須做到以下幾點：①切片能夠耐受電子 束 的照射，在熱和高真空條件下有一定的穩定性。②細胞的超微結構保存良好，盡量減少人工假象。③ 切 片 厚 度 一 般 在 60?80nm 為 宜 。切片太薄可得到較高的分辨率，但
酶－聯－免－疫－吸－附－實－驗2
十 字 交 叉 連 續 稀 釋 分 析 法 （criss-cross serial-dilution analysis) 測定試劑最適濃度實驗步驟展開
“金標準”誕生記
中國主導制定的控釋肥料國際標準正式頒布，一舉改寫了全球沒有統一控釋肥料標準的歷史。但是，在這一國際肥料行業“游戲規則”出臺前后發生了許多曲折的故事。控釋肥料國際標準頒布實施研討會現場控釋肥生產車間外觀金正大科研人員正在檢測分析控釋肥新產品金正大在全國各地推廣控釋肥產品 編者按 近日，國際標準
Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測（一）
一、蛋白質印跡法蛋白質印跡 (Western Blotting) 法是在混合的復合物中鑒定和定量特定蛋白質的一種有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。這一技術對固定在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白質樣本進行非直接的檢測。在常規的蛋白質印跡中，
實驗室準則：抗體質量的金標
幾乎所有實驗室都會用到抗體，抗體不僅是生命科學研究的重要工具，在免疫學診斷領域也是不可或缺的。市面上的抗體種類繁多同時也良莠不齊，由于缺乏評估抗體質量的標準方法，人們過去只能依賴于生產廠家的信用。 做過免疫熒光、免疫沉淀（IP）或者Western blot實驗的人都知道，抗體優劣對實驗結果有
定－量－PCR－技－術－簡－介
聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction, PCR）是微量核酸擴增的有效工具，由于其靈敏、特異、快速等優點，在醫學上已廣泛應用與病毒、細菌病原體及遺傳病、腫瘤的早期診斷。隨著PCR技術的發展，特別是病毒或腫瘤的治療監測、疾病的診斷、機體基因表達調控方面，不僅需要檢測其存在是否
膠體金（金標）檢驗法
膠體金是一種常用的標記技術，有其獨特的優點。近年已在各種生物學研究中廣泛使用。免疫膠體金技術的基本原理是：氯金酸?(HAuCl4)在還原劑作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，形成帶負電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成為穩定的膠體狀態，故稱膠體金。膠體金標記，實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒
免－疫－球－蛋－白－融－合－蛋－白－的－構－建
實驗步驟?基 本 方 案 1 免疫球蛋白融合蛋白的構建材 料編碼靶基因的 D N A展開
免－疫－球－蛋－白－G－(IgG)－片－段－的－水－解
一個新的抗體需要片段化的時候往往要進行摸索性的試驗。選擇反應時間的時候寧可保留部分抗體不被完全降解，這樣可以避免蛋白酶過分裂解后導致抗體結合位點的破壞 。實驗步驟木 瓜 蛋 白 酶 水 解 IgG 成 Fab 片段摸索性試驗此 法 適 用 于 小 鼠（任何亞類）、大鼠、人 、山羊、綿羊、馬 、雞 、
固相pH梯度等電聚焦實驗——制膠
實驗方法原理固相 pH 梯度凝膠是由固相 pH 梯度介質（丙烯酰胺衍生物）共價結合到聚丙烯酰胺凝膠中并形成 pH 梯度，所以制膠過程比載體兩性電解質凝膠復雜。灌膠的方法與常規聚丙烯酰胺梯度凝膠和 SDS 梯度凝膠相似。高質量的凝膠介質和固相 pH 梯度介質，聚合過程以及漂洗對固相 pH 梯度凝膠是非
Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測（三）
四、化學發光信號4.1 信號捕捉雖然化學發光蛋白質印跡法十分常用，但是對于難于捕獲的信號的捕捉卻很棘手。蛋白質印跡法要用到一系列需要技巧的技術，因此許多因素都會導致無法捕捉到信號。由于變量較多 (表 33. 2)，問題印跡的問題診斷和排除就如同大海撈針一樣困難。傳統的方案在檢測某一個蛋白質時通常
蛋白質分離和分析——免－疫－親－和－層－析
詳細闡述利用親和層析分離蛋白質的過程，進行蛋白質分析時，需將此規模縮小至微量離心管中進行免疫沉淀過程，對于單一的蛋白質或由相同亞基組成的蛋白質，經單向凝膠電泳后檢測到單一的 蛋 白 質 條 帶對熒光染色法進行了闡述，它主要用于磷蛋白和糖蛋白的檢測。為了確定蛋白質是否是特異性抗原，可采用相對應的抗體進
采用細胞內熒光染料CFSE檢測淋巴細胞的遷移和增殖
實驗步驟基 本 方 案 淋 巴 細 胞 的 CFSE 標記材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)實驗動物，人外周血或者培養的淋巴細胞VPBS, pH7. 4H a n k s 平 衡 鹽 溶 液（H B S S ) p H 7. 4含 5 % (V /V ) 熱 滅 活 F B S 的 P B S
采用細胞內熒光染料CFSE檢測淋巴細胞的遷移和增殖
基 本 方 案 淋 巴 細 胞 的 CFSE 標記材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)實驗動物，人外周血或者培養的淋巴細胞VPBS, pH7. 4H a n k s 平 衡 鹽 溶 液（H B S S ) p H 7. 4含 5 % (V /V ) 熱 滅 活 F B S 的 P B S5m m
Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測
實驗步驟一、蛋白質印跡法蛋白質印跡 (Western Blotting) 法是在混合的復合物中鑒定和定量特定蛋白質的一種有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。這一技術對固定在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白質樣本進行非直接的檢測。在常規的蛋白質印跡中，蛋白
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗3
三、蛋白質的硝化修飾酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸側鏈的硝化與亞硝化作用構成了蛋白質硝化PT M 的主要部分。這些加成反應由發育、氧化應激及衰老過程中產生的活性氮介導。活性氮的增加是由一氧化氮和活性氧的過度反應或調控紊亂造成的（Yeo et al.，2008)。活性氮和活性氧能夠靶向于DNA、脂
“膠類中藥源性DNA分子鑒定實驗室”成立
據山東廣播電視臺新聞中心《山東新聞聯播》報道，國內首個“膠類中藥源性DNA分子鑒定實驗室”今天在省農科院揭牌成立，依托DNA測序，動物源性分子鑒定和動物疾病疫病快速檢測技術，首次應用到傳統的阿膠生產工藝中，做到每一張驢皮都能鑒別，每一塊阿膠都可追溯。
什么是膠體金（金標）檢驗法？
膠體金是一種常用的標記技術，有其獨特的優點。近年已在各種生物學研究中廣泛使用。免疫膠體金技術的基本原理是：氯金酸?(HAuCl4)在還原劑作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，形成帶負電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成為穩定的膠體狀態，故稱膠體金。膠體金標記，實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的
膠體金檢測快速金標試劑技術
是將特異的抗體先固定于酸類纖維素膜的某一區帶，當該干燥的酸類纖維素一端浸入樣品（尿液或血清）后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗體的區域時，樣品中相應的抗原即與該抗體發生特異性結合。同時利用金粒具有高電子密度的特性，在金標蛋白結合處。當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，
皮膚干細胞的鑒定
利用皮膚干細胞一些相對特異的標志建立了一系列的皮膚干細胞鑒別方法。最初，一些學者是從研究細胞黏附特性入手的。他們發現，在表皮基底細胞定向分化時，它會失去其對基底膜蛋白的黏附性，而這種黏附性是受細胞表面受體-整合素家族調控的。 整合素為異源雙聚體，包括α和β兩種亞基。在基底層細胞定向分化過程中，