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細胞培養（cell culture）就是從機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養基 中，讓這些細胞生長和增殖。體外細胞培養最常見的是合成培養基如DMEM,F12,MEM等混合一定比例的牛血清進行培養；但是大量使用牛血清制品有許多缺陷，如，動物源成分，無法用于臨床研究；成分復雜，批間差大，質量不穩定，重復性差，影響實驗和生產，而且極易引起交叉污染；所以無血清培養正在替代有血清培養；無血清培養基的基本配方:基本成分為基礎培養基及添加組分兩大部分。 用于生物制藥和疫苗生產的細胞在體外培養時，多數呈貼壁生長或兼性貼壁生長；而當其在無血清、無蛋白培養基中生長時，由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白，細胞往往以懸浮形式生長。 添加組分1. 促貼壁物質：許多細胞必須貼壁才能生長，這種情況下無血清培養基中一定要添加促貼壁和擴展因子，一般為細胞外基質，如纖連蛋白、層......閱讀全文
經歷了天然培養基、合成培養基后，無血清培養基和無血清培養成為當今細胞培養領域的一大趨勢。采用無血清培養可降低生產成本，簡化分離純化步驟，避免病毒污染造成的危害。 無血清培養基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養基。但是
經歷了天然培養基、合成培養基后，無血清培養基和無血清培養成為當今細胞培養領域的一大趨勢。采用無血清培養可降低生產成本，簡化分離純化步驟，避免病毒污染造成的危害。 無血清培養基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養基。但是它們
實驗概要 經歷了天然培養基、合成培養基后，無血清培養基和無血清培養成為當今細胞培養領域的一大趨勢。采用無血清培養可降低生產成本，簡化分離純化步驟，避免病毒污染造成的危害。 實驗原理 無血清培養基(serum free medi
間充質干細胞培養，無血清培養基與血清培養基相比，有何不同？近來，國家的干細胞的政策是一個接一個。對應的，來自用戶的咨詢也是一個接一個。大多數的問題是：現在都在說無血清培養基，無血清培養基和血清培養基到底有什么差別？差別很大，從用途方面簡單說下你感受的可能更具體。如果你是提供間充質干細胞（MSC）藥物
無血清培養基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎培養基加少量血清所配制的完全培養基可以滿足大部分細胞培養的要求，但對有些實驗卻
CHO細胞無血清培養入門技術手冊——深圳百恩維生物1、CHO細胞背景CHO細胞是中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)，1957年美國科羅拉多大學Dr. Theodore T. Puck從一成年雌性倉鼠卵巢分離獲得，為
在描述產品區別之前，先簡單描述下間充質干細胞無血清培養基。間充質干細胞無血清培養基是怎么開發出來的？研發人員根據近幾十年來，中國及國外的科研人員在間充質干細胞研究方面取得的一些成果，比如什么樣的物質可以很好的促進干細胞生長，什么樣的物質可以抑制間充質干細胞的分化，什么樣的物質有更好的貼壁效果等等。在
很難一句話來說。但可以從幾個方面分別比較。1. 產品性能方面無血清培養基更好。血清并不是生來就為養細胞而來的。血清是全血的一部分，組分很復雜，有150多種已知組分組分，多種未知組分。這些組分中，有些對細胞生長是有利的，有些對細胞生長是無作用的，有些對細胞生長反而是有害的。另外，不同的牛，由
很難一句話來說。但可以從幾個方面分別比較。1. 產品性能方面無血清培養基更好。血清并不是生來就為養細胞而來的。血清是全血的一部分，組分很復雜，有 150 多種已知組分組分，多種未知組分。這些組分中，有些對細胞生長是有利的，有些對細胞生長是無作用的，有些對細胞生長反而是有害的。另外，不同的牛
細胞培養（cell culture）就是從機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養基 中，讓這些細胞生長和增殖。體外細胞培養最常見的是合成培養基如DMEM,F12,MEM等混合一定比例的牛血清進行培養；但是大量使用牛血清制品有許多缺陷，如，動物源成分，
無血清培養基是在合成培養基的基礎上發展起來的，與傳統的培養基相比，既能滿足細胞在體外長時間培養的要求，又能避免動物血清所帶來的不利因素。無血清培養基的發展歷程分為無血清培養基（Serum-Free Medium，SFM）、無動物源培養基（Animal Component Free Medium，AC
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
目前，血清仍是動物細胞培養中zui基本的的添加物，尤其是在原代培養或者細胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養液進行培養，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養液。細胞轉入無血清培養基培養要有一個適應過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養。在降低過程中要注意觀
㈠無血清培養基和試劑被廣泛的應用于培養哺乳動物和無脊動物細胞以制備單克隆抗體，病毒抗原和重組蛋白等。大多數的無血清產品含有向細胞內轉運離子的轉鐵蛋白和調節葡萄糖攝取量的胰島素，以及一些蛋白質如清蛋白，纖連蛋白，胎球蛋白等，這些蛋白在細胞培養中發揮各種不同功能，如吸附毒性化合物，抗生物反應器剪切力，提
無血清培養基的出現是培養基發展歷程上的一個里程碑，其一般是在合成培養基的基礎上，引入成分完全明確的或部分明確的血清替代成分，使培養基能滿足動物細胞培養的要求，又可有效的克服因使用血清所引發的問題。進入20世紀80年代后，新的無血清培養基不斷問世，人們經過研究發現，只要在培養基中增加某些適于細胞生長的
獲得穩定的雜交瘤細胞系后，即可根據需要大量生產單抗，以用于不同目的。 一、單抗的大規模制備 目前大量制備單抗的方法主要有兩大系統，一是動物體內生產法，這是國內外實驗室所廣泛采用；另一是體外培養法。 1、動物體內生產單抗的方法 迄今為止，通常情況下均采用動物體內
以下翻譯僅供參考！最終使用者請參看英文原文說明書。 使細胞能在無血清環境中生長確保無動物成分且經過GMP認證的細胞培養添加物細胞的無血清培養具有一定的挑戰性。這篇文章的目的是指導終端使用者平穩過渡到無血清環境中，且避免所有不足的或不恰當的努力。理想的過渡到無血清環境下應該經歷幾個階段，逐漸
五、親代桿狀病毒基因組的改進就像轉移質粒的改進，對親代桿狀病毒基因組的改進也是為了滿足各種不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重組桿狀病毒載體構建和分離低效率的方法，這也是最初的桿狀病毒-昆蟲細胞系統存在的主要問題。現在已經知道這個問題的根源在于, 在共轉染的昆蟲細胞系中，轉移質粒和親代桿狀病毒
㈠無血清培養基和試劑被廣泛 的應用于培養哺乳動物和無脊動物細胞以制備單克隆抗體，病毒抗原和重組蛋白等。大多數的無血清產品含有向細胞內轉運離子的轉鐵蛋白和調節葡萄糖攝取量的胰 島素，以及一些蛋白質如清蛋白，纖連蛋白，胎球蛋白等，這些蛋白在細胞培養中發揮各種不同功能，如吸附毒性化合物，抗
用基因工程方法將bcl-2基因這種細胞凋亡抑制基因導入細胞，成為眾多研究者的選擇。bcl-2基因的過量表達能抑制Gln或氧缺乏引起的細胞凋亡，減少細胞特定營養成分的消耗，提高細胞密度和目的蛋白產量,這對于細胞大規模培養具有重大意義。對細胞的這種保護作用依賴于bcl-2等抑制基因的高水平表達。因此，需
⑺UltraMDCKTM培養基UltraMDCKTM 培養基是一種無血清限定培養劑，適于高/低平板密度培養MADIN-DABBY犬腎細胞（MDCK）。該培養基只添加了兩種蛋白-重組的人胰島素和牛轉鐵 蛋白，因此蛋白含量極低。經UltraMDCKTM培養基培養的MDCK細胞較在含血清基
FuGENE6（Roche）轉染步驟： 轉染前一天將細胞分至培養板，轉染當天細胞應50-80％融合。將細胞以1-3×105/2 ml接種于6孔板后孵育過夜將達到如此密度。 將FuGENE6 Reagent在室溫孵育10-15分鐘。使用之前將FuGENE6顛倒混勻一下。 1. 在PCR管中加入不含血
A．siRNA轉染的方法 哺乳動物轉染的常見方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽離子脂質體試劑，其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。應用脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的
◇水解乳蛋白 水解乳蛋白為淡黃色粉末，雖易潮解結塊，但不影響使用。 不同批號和牌號質量有差異。水解乳蛋白是乳白蛋白經蛋白酶和肽酶水解后的產物，含有豐富的氨基酸。開始時它是專為猴腎細胞培養設計的，而實際上它對許多細胞系(株)，如Hela細胞和原代細胞都是一種優良培養基。使用時用Hanks液配制成0
細胞懸浮培養是利用生物反應器大規模培養動物細胞生產生物制品的核心技術，是當前國際上生物制品生產的主流模式，其最大優勢是通過更為精確有效的工藝控制手段，在獲得最大產量的同時能穩步提高產品的質量。但該技術目前在國內尚未得到廣泛應用，生物制品生產仍主要采用病毒產率低、生產成本高、勞動強度大的轉瓶細胞培養方
LIPOFECTAMINE 2000轉染試劑轉染步驟此實驗步驟設計用來進行24孔板貼壁細胞的瞬時或穩定轉染，其為設計用來在生長培養基中直接加入復合物。1. 轉染前一天，胰酶消化細胞并計數，細胞鋪板，使其在轉染日密度為90%。細胞鋪板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生長的培養基中。2. 對于每孔細
輔 助 方 案 4 DEAE 葡聚糖凝膠的制備材料D E A E 葡聚糖凝膠 A -25lmol/L N a O H0.5 m o l / L 乙酸：將 57. 5m l 的冰乙酸稀釋于2 L 水中甲醇溶 劑 A : 30 : 60 : 8 (V /V /V ) 氯仿/甲醇/水4L 側臂燒瓶帶濾 紙
輔 助 方 案 4 DEAE 葡聚糖凝膠的制備材料D E A E 葡聚糖凝膠 A -25lmol/L N a O H0.5 m o l / L 乙酸：將 57. 5m l 的冰乙酸稀釋于2 L 水中甲醇溶 劑 A : 30 : 60 : 8 (V /V /V ) 氯仿/甲醇/水4L 側臂燒瓶帶濾 紙
細胞分離技術一、從原代組織中分離細胞 將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，最常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。從原代組織中獲得單細胞懸液的一般方法是酶解聚。細胞暴露在酶中的時間要盡可能的短，以保持最大的活性。下列步驟可以解聚整個組織，獲得較高產量的有活性細胞。1.胰蛋
6 細胞培養基的選擇 6.1根據細胞特點、蛋白表達及病毒特點和培養方式選擇細胞培養基 商售工業用細胞培養基主要是干粉培養基，常用的培養基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等系列，根據細胞的特性及工業化的生產需求，開發或生產的同一系列的細胞培養基在成份上也有