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CaCl2轉化法 一步法制備和轉化感受態細菌實驗 電轉化法 實驗材料 菌落 質粒DNA 試劑、試劑盒 CaCl2 儀器、耗材 培養基 平板 實驗步驟 1. 接種一個單菌落于50 ml LB培養液中，于37°C中速搖床培養過夜（250 r/min)。 2. ......閱讀全文
第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定 第二章DNA 酶切及凝膠電泳 第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重組質粒的連接、轉化及篩選 第六章基因組DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技術 第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆 第九章分
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統，由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷，人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今
分子生物學是在生物化學基礎上發展起來的，以研究核酸和蛋白質結構、功能等生命本質的學科，在核酸、蛋白質分子水平研究發病、診斷、治療和預后的機制。其中基因工程（基因技術，基因重組）是目前分子生物學研究熱點，這些技術可以改造或擴增基因和基因產物，使微量的研究對象達到分析水平，是研究基因調控和表達的方法，也
摘要： 下文介紹大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化. 1、感受態細胞的概念重組 DNA 分子體外構建完成后,必須導入特定的宿主(受體)細胞,使之無性繁殖并高效表達外源基因或直接改變其遺傳性狀,這個導入過程及操作統稱為重組DNA分子的轉化.
目的基因的亞克隆可應用于：（1）進一步分析目的基因；（2）基因重組。實驗方法原理亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。實驗材料E.coli JM109試劑、試劑盒牛肉膏胰蛋白胨NaCl微量細菌基因組抽提試劑盒
實驗方法原理 亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。
實驗概要本實驗將人Bcl-2重組質粒轉化DH5α擴增菌，轉化后在含Amp的培養基上進行篩選，生長的菌落即為含重組質粒的工程菌。含人Bcl-2重組質粒的DH5α菌用于質粒DNA的擴增，獲得的質粒將作為限制性內切酶的酶切底物DNA。實驗原理轉化是將外源DNA分子導入到受體細胞，使之獲得新的遺傳特性的一種
第一節 概 述 在自然條件下,很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內,但在人工構建的質粒載體中,一般缺乏此種轉移所必需的mob基因,因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉移。如需將質粒載體轉移進受體細菌,需誘導受體細菌產生一種短暫的感受態以攝取外源DNA。轉化(Transfo
實驗概要 獲得感受態細胞；制備含有目的片段的克隆。實驗原理 在自然條件下，很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內，但在人工構建的質粒載體中，一般缺乏此種轉移所必需的mob基因，因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉移。如需
目的：在體外連接組裝而成的重組DNA分子只能轉入合適的受體細胞，才能大量地進行復制、增殖和表達。通過實驗學會重組DNA轉化的最基本的操作以及如何提高轉化效率的基本思路。 原理：帶有外源DNA片段的重組體分子在體外構建成后，需要導入適當的宿主細胞內進行繁殖或表達出具有一定生物活性的蛋白。能夠
實驗方法原理轉化活性是檢測質粒生物活性的重要指標，在基因克隆技術中，轉化（transformation）是特指以質粒 DNA 或以它為載體構建的重組質粒 DNA（包括人工染色體）導入細胞的過程， 是一種常用的基本實驗技術。 該過程的關鍵是受體細胞的遺傳學特性及其所處的生理狀態，用于轉化的受體細胞一般
1. 實驗目的和要求通過本實驗學習氯化鈣法制備大腸桿菌感受態細胞和外源質粒DNA轉入受體菌細胞的技術以及篩選轉化體的技術。了解細胞轉化的概念及其在分子生物學研究中的意義。2. 相關知識及原理感受態細胞(Competent cells)：受體細胞經過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化學試劑法）
實驗概要所謂亞克隆就是對已經獲得的目的DNA片段進行重新克隆，其目的在于對目的DNA進行進一步分析，或者進行重組改造等。亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。主要試劑1．LB液體培養基：胰化蛋白胨（細菌培養用
各位小伙伴，大家還記得當初進實驗室的時候接觸到的一個實驗技能是什么呢？沒錯，是 PCR 擴增。小編曾經也是，看著自己親自配比 PCR 克隆擴增的每個組分，親眼看著瓊脂糖凝膠在紫外透光臺上發出的幽綠色的熒光，也是深深被迷住。但總不可能成天就對著這個邪魅的熒光發呆，對吧？看久了，她會愛上你的眼
DNA重組技術（或基因工程）是20世紀生物學的偉大成就，并已滲透到生命科學包括醫學 各個領域，為腫瘤的實驗研究和臨床診斷及治療提供了嶄新的技術和有用的工具。本附錄扼要介紹在分子腫瘤學領域中常用的分子生物學基本技術及其在腫瘤研究中的應用，著重介紹它們的原理和應用。至于具體的技術方法和操作步驟可參閱《分
一、目的1.了解感受態細胞生理特性及制備條件，掌握大腸桿菌感受態細胞制備方法。2.掌握質粒DNA 轉化大腸桿菌的方法，了解轉化的條件和利用半乳糖苷酶基因插入失活選擇重組質粒DNA 的原理。二、原理（一）大腸桿菌感受態細胞制備的原理所謂感受態，是指細菌生長過程中的某一階段的培養物，只有某一生長階段中的
目的基因的亞克隆所謂亞克隆就是對已經獲得的目的DNA片段進行重新克隆，其目的在于對目的DNA進行進一步分析，或者進行重組改造等。 亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。&n
實驗概要學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法—脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。實驗原理外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂
[實驗目的]通過本實驗，掌握大腸桿菌感受態細胞的制備及轉化的方法和技術[實驗原理]細菌處于容易吸收外源DNA 的狀態叫感受態。轉化是指質粒DNA或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。其原理是細菌處于0℃，CaCl2低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形。轉化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復
轉染的定義是“將具生物功能的核酸轉移或運送到細胞內并使核酸在細胞內維持其生物功能”。其中，核酸包括DNA （質粒和線性雙鏈DNA ），反義寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。基因轉染技術已廣泛應用于基因組功能研究（基因表達調控，基因功能，信號轉導和藥物篩選研究）和基因治療研究。基
轉染的定義是“將具生物功能的核酸轉移或運送到細胞內并使核酸在細胞內維持其生物功能”。其中，核酸包括DNA （質粒和線性雙鏈DNA ），反義寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。基因轉染技術已廣泛應用于基因組功能研究（基因表達調控，基因功能，信號轉導和藥物篩選研究）和基因治
第七節 實驗動物的處死當實驗中途停止或結束時，實驗者應站在實驗動物的立場上以人道的原則去處置動物，原則上不給實驗動物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安樂死。安樂死是指實驗動物在沒有痛苦感覺的情況下死去。實驗動物安樂死方法的選擇取決于動物的種類與研究的課題。一、蛙 類常用金屬探針插入枕骨大孔,破壞腦脊髓的
細菌與真核細胞存在著很大的區別，但也有相同之處。細菌與真核細胞的轉染有何異同準確來說，細菌叫“轉化”，真核細胞叫“轉染”。轉染的定義是“將具生物功能的核酸轉移或運送到細胞內并使核酸在細胞內維持其生物功能”。其中，核酸包括DNA（質粒和線性雙鏈DNA），反義寡核苷酸及RNAi（RNAinterfere
體外連接的DNA重組分子導入合適的受體細胞才能大量增殖。為了提高受體菌攝取外源DNA的能力，提高轉化效率以獲得更多的轉化子，人們摸索出了不同的方法處理細菌，使其處于感受態。目前主要采用電轉化法和CaCl2法將外源DNA導入受體細胞中，并需要相應地制備電轉化感受態細胞和CaCl2感受態細胞。實驗目的：
這種 PCR-SDM 方法的要點包括如下幾個方面。1. 使用的模板濃度有所增加，這樣就可以減少循環數，因此減少了非特異產物擴增的可能性。2. 加入了 Taq Extender, 擴增較長的 PCR 產物時產量和可靠性都有所提高。3. 使用 Dpm I 限制性內切酶，降低了母本分子的數量。4
桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒，可用于（1）作為基因工程病毒殺蟲劑 ,提高害蟲防治效率（2）作為超高效的真核基因表達載體 ,生產有用的工程蛋白（3）研究桿狀病毒基因組的結構與功能（4）研究真核基因表達的調控機制。實驗方法原理由于昆蟲桿狀病毒環狀雙鏈DNA基因組很大 (約 13
實驗方法原理 這種 PCR-SDM 方法的要點包括如下幾個方面。1. 使用的模板濃度有所增加，這樣就可以減少循環數，因此減少了非特異產物擴增的可能性。2. 加入了 Taq Ext
實驗概要轉化是將外源基因引入受體細胞，使之獲得新的遺傳性狀的一種手段，它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領域的基本實驗技術。轉化過程所用的受體細胞經過一些特殊方法處理后，細胞膜的通透性發生了暫時性改變，成為允許外源DNA分子進入的狀態，這種細胞稱為感受態細胞。進入受體細胞的DNA分子通過復制，
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導致了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗