使用流式細胞儀進行人類單核細胞亞群的全血染色
一、材料與試劑1. 抗體(1)鼠抗人CD56FITC(BD,340410)(2)鼠抗人CD2FITC(BD555326)(3)鼠抗人CD19FITC(555412)(4)鼠抗人CD14PerCP(Invitrogen,MHCD1431)(5)鼠抗人CD16PacBlue(BD,558122)(6)鼠抗人HLA-DRAPC-Cy7(BioLegend,307617)2. 其他材料(1)帶K3EDTA的玻璃全血管(BDVacutainer366450)(2)10×BDFACS裂解液(BDPharmigen349202)(3)20%甲醛(Tousimis1008A)(4)PBS(CalciumandMagnesiumfree,Gibco20012-027)(5)5 mL 聚丙烯管(BDFalcon352063)二、儀器1. BDLSRII流式細胞儀三、步驟1. 將人血加入到帶K3EDTA的玻璃全血管,然后輕搖幾次混合血液。2......閱讀全文
使用流式細胞儀進行人類單核細胞亞群的全血染色
一、材料與試劑1.?抗體(1)鼠抗人CD56FITC(BD,340410)(2)鼠抗人CD2FITC(BD555326)(3)鼠抗人CD19FITC(555412)(4)鼠抗人CD14PerCP(Invitrogen,MHCD1431)(5)鼠抗人CD16PacBlue(BD,558122)(6)鼠
流式細胞儀檢測細胞信號研究的幾個優點
隨著收集數據的能力,在單個細胞的水平,流式細胞儀檢測細胞信號研究提供了幾個優點流式細胞儀與裂解為基礎的方法,有利于異構信號反應的檢測和分析。因此,有可能區分一個強大的蛋白磷酸化響應于一個更小的,但更均勻的響應細胞與一小口。此外,特定的細胞表面標志物的復雜的細胞混合物,如全血細胞亞群內的熒光抗體,蛋白
如何運用流式細胞儀進行T淋巴細胞亞群分析
簡單的概括:1、先在FSC/SSC散點圖gate出淋巴細胞;2、然后把淋巴細胞顯示到柱狀圖,gate出CD3陽性的(T細胞);3、再把T細胞顯示到散點圖,橫坐標,縱坐標分別為CD4和CD8。
采用-CytoFLEX-對-PBMC-的-T-細胞-受體進行表征分析
概述:如何借助 DuraClone 通過流式細胞術對人外周血單核細胞 (PBMC) 進行染色,以進行 T 細胞受體分析。如何運用 CytoFLEX 流式細胞儀和 DuraClone 對 TCR 亞群進行鑒定。介紹:T 細胞在免疫系統的功能與調控中扮演著重要角色。成熟的 T 細胞可以同時表達 CD
人末梢血微量全血培養染色體顯示法
實驗概要? ? ? ? 人末梢血微量全血培養染色體顯示法實驗步驟1.培養液準備:取15ml培養瓶數個,每瓶內分別充入5ml培養液(pH 7.2),內含:1640培養液(含10%~15%小牛血清),PHA 0.1ml,青霉素100單位和鏈霉素100微克/毫升?培養液2.抽血針管準備:取2~5ml針管一
流式細胞儀檢測全血的人淋巴細胞
基本方案材 料(打 V 項 目 見 附 錄 1)全血,通 常 用 E D T A 抗凝P B S ,有 或 無 0.1% (m /V ) 疊氮鈉,過濾除菌單 克 隆 抗 體(標記的,未標記的或生物素化的),通過滴定確定最佳工作濃度間 標 二 抗(僅用于未標記的一抗)F T T C 標記的鏈霉親和素或
流式細胞儀檢測全血的人淋巴細胞
實驗步驟基本方案材 料(打 V 項 目 見 附 錄 1)全血,通 常 用 E D T A 抗凝P B S ,有 或 無 0.1% (m /V ) 疊氮鈉,過濾除菌單 克 隆 抗 體(標記的,未標記的或生物素化的),通過滴定確定最佳工作濃度間 標 二 抗(僅用于未標記的一抗)F T T C 標記的鏈霉
西工大團隊研發太空乘員健康檢測儀-實現在軌“驗血”
西工大研制的全血全自動預處理樣機 隨著宇航技術的飛速發展,適用于普通人的太空旅行計劃計日可待,但太空旅行短則幾日長則一年,那么如何快速有效檢測乘客在旅行途中身體健康情況?日前,西北工業大學空天微納系統教育部重點實驗常洪龍教授課題組與邁瑞醫療合作研制出適用于太空環境的健康檢測儀,成功實現在微重力環
鑒定細胞產生的細胞因子等炎癥介質的分析
各種激活類型的細胞可以分泌細胞因子,趨化因子和其他炎癥介質,如穿孔素,粒酶免疫或炎癥反應的一部分。如ELISA和BD?式微珠陣列(CBA)測量整個細胞群所產生的分泌蛋白的方法。與此相反,細胞內流式細胞儀允許于感興趣的細胞群,表型鑒定的個別類型的細胞產生的細胞因子等炎癥介質的分析。 流式細胞儀檢測細
激活的淋巴細胞內細胞因子的檢測
簡介細胞因子是可溶性蛋白,在淋巴細胞應答中有重要的免疫調節作用。細胞因子可以調節細胞生長、分化以及一系列功能,并且介導正常與病理性免疫應答。細胞因子是具有效應及調節雙重作用的獨特蛋白。近來研究顯示,細胞因子可以具有多重功能,作用于多個細胞亞群并可在不同亞群細胞表達。早期細胞因子表達與T細胞功能相關性
如何使用流式細胞儀進行細胞分選?
使用流式細胞儀進行細胞分選通常包括以下步驟:樣品制備:將待分選的細胞樣品制備成單細胞懸液,調整細胞濃度至合適范圍。儀器校準和設置:啟動流式細胞儀,進行液流系統的校準,確保液流穩定。根據要分選的細胞特性,設置合適的激光波長、熒光通道、散射光參數等。染色標記:如果需要,使用特異性的熒光標記抗體或染料對細
用母體血進行染色體異常的產前診斷實驗
實驗材料Ficoll 淋巴細胞分離液CD3、CD13 抗體均用生物素標記試劑、試劑盒PBS 溶液臺盼藍溶液. 量化鏈霉親和素磁化稀土FBS溶液FITC 標記的 CD71 膜抗體多聚甲醛carnoy 固定液乙醇溶液儀器、耗材氬離子激光流式細胞儀直標探針實驗步驟展
血涂片染色
?(一)瑞氏染色法? ? 1﹒原理? ? 瑞氏(Wright)染液由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍溶解于甲醇而成。不同的細胞因所含化學成分不同,對各種染料的親和力也不同,其中,堿性(陽離子)染料能與細胞內酸性物質,如核酸(DNA和RNA)、核蛋白、嗜堿性顆粒、中性顆粒等陰離子結合染成藍灰色。酸
流式細胞儀檢測外周血樹突狀細胞
概述樹突狀細胞(DC)的主要功能是吸收抗原,進行加工,并向T淋巴細胞呈遞。其它抗原呈遞細胞也有此功能,如B淋巴細胞和單核細胞。但是,與其它細胞不同的是,DC細胞具有誘導初發免疫反應的獨特功能,例如,可以活化處女T細胞(Naive T cell)。DC細胞存在于外周淋巴組織中,已在血液和非淋巴器官中發
流式細胞儀實驗方法(二)
第二部分 細胞因子 細胞內細胞因子的流式細胞儀檢測 一、簡介隨著研究的進展,僅僅對細胞進行定量和活性的檢測已不能滿足需要。在單細胞水平研究細胞因子的表達能力對研究細胞因子在疾病中的作用越來越顯的重要無比。目前檢測單個細胞特定細胞因子的表達手段包括:ELIspot、原位雜交、免疫細胞化學、限制
全血錳的概述
人體內含錳12-18mg。錳主要在腸道吸收,通過肝臟隨膽汁排入糞便,少量可由腸道再吸收。經尿排泄的錳尚不到總排出量的10%。骨骼中錳積蓄量約占全身總量43%。由于錳參與多種酶的組成和激活作用,既與蛋白質合成有關,又可改善動脈粥樣硬化者的脂質代謝。錳還能促進鐵吸收和利用,參與黏多糖合成(黏多糖是軟
全血輸血的應用
全血是指血液的全部成分,包括各種血細胞及血漿中各種成分,還有抗凝劑及保存液。全血有保存全血及新鮮全血之分,常用的是保存4±2攝氏度的全血。新鮮全血定義難以統一規定,要依輸血的目的而定,為了補充新鮮的紅細胞,可用保存5天的ACD全血或10天的CPD全血;如同時還要補充血小板或白細胞,則應分別用保存1天
流式細胞術應用-|-鑒別-NLRP3-敲除小鼠的循環髓系細胞群
實驗簡介表面標志物通常用于區分循環血液中的群體。使用表面標志物 Ly6C(造血細胞)、Ly6 G(粒細胞 / 嗜中性粒細胞)和 CD115(MCSF 受體),我們能夠描述來自 C57BL/6J 野生型對照小鼠和 NLRP3 敲除樣品的新鮮血液中的 循環細胞群。由于 NLRP3 可影響炎癥小體形成,所
全血RNA提取
摘要:?RNA提取應該說已經成為了一種常見的分子生物學操作步驟了,但是不少科研人員仍然煩惱著如何尋找一種最好的方法,或者找到一種適合于特殊用途方法。比如說傳統的血液標本表達譜芯片實驗需要先把有核細胞從全血中分離出來,加白細胞分離液、離心等步驟,比較繁瑣,如果能進行全血的提取,那就再好不過。RNA提取
利用PI單染色法進行流式細胞儀檢測細胞凋亡
一、基本原理流式細胞儀檢測細胞凋亡:PI單染色法其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變zui具特征性,主要包括以下幾個方面:1、細胞核的改變由于凋亡細胞核的改變,造成各種染色
利用PI單染色法進行流式細胞儀檢測細胞凋亡
一、基本原理流式細胞儀檢測細胞凋亡:PI單染色法其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核?的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征性,主要包括以下幾個方面:1、細胞核?的改變由于凋亡細胞核?的改變,造成各種染
利用PI單染色法進行流式細胞儀檢測細胞凋亡
一、基本原理流式細胞儀檢測細胞凋亡:PI單染色法其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變特征性,主要包括以下幾個方面:1、細胞核的改變由于凋亡細胞核的改變,造成各種染色體熒光染
自動白細胞分類計數的技術現狀和展望
? ? ? 隨著細胞計數技術實現自動化后,1970年代對白細胞分類計數的自動化需求也隨之增加,先后有兩種不同的技術被引入該領域,其一為基于顯微鏡的自動方法,采用自動影像分析技術直接識別和分析染色的血涂片上白細胞;其二為所謂流式系統(flow system),基于自動細胞計數的原理,對白細
peprotech細胞因子注意事項(一)
目前檢測單個細胞特定細胞因子的表達手段包括:ELIspot、原位雜交、免疫細胞化學、限制性稀釋分析(limiting dilution analysis,LDA)和單細胞PCR,應用原位雜交技術和免疫組化方法觀察細胞因子蛋白表達及mRNA表達可以識別Th1和Th2細胞,此方法可獲得較強的細胞
16色人類免疫細胞亞群的抑制性受體特征
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ? ? 免疫 ? ??免疫是人體的一種生理功能,人體依靠這種功能識別“自己”和“
微量全血間接熒光染色法流式細胞術樣本制備
實驗步驟 1. 取肝素或EDTA抗凝全血(100μl/份),置12×75mm專用塑料試管中。2. 加入50μl特異的單克隆抗體(一抗),室溫下孵育30min。3. 置Q-PREP儀上溶解紅細胞,穩定和固定白細胞。4. 離心(800~1000rpm,5min)棄上清液,用PBS洗滌細胞2次。5. 加入
哪些受血者不宜應用全血?
(1)血容量正常的慢性貧血受血者。(2)低血容量已被糾正的急性貧血受血者。(3)貧血伴有心功能不全或心力衰竭的受血者。(4)年老體弱、嬰幼兒需輸血的受血者。(5)輸血或多次妊娠已產生白細胞或血小板凝集素(抗體)的受血者(6)因血漿蛋白過敏引起蕁麻疹反應,甚至重度過敏反應的受血者(7)可能實施造血干細
怎樣利用PI單染色法進行流式細胞儀檢測細胞凋亡
PI 單染并不是很好的看凋亡的方法。一般可以作為早期的篩選實驗,因為特異性不好方法和做細胞周期是一樣的,你可以查一下做細胞周期的實驗方法,我這里就不貼了。幾點注意:一定要設置單細胞gate,以防多聚細胞核雜質的干擾RNA酶不要忘記了固定時間半小時足以,千萬不要在酒精中過夜,不然會產生大量碎片
怎樣利用PI單染色法進行流式細胞儀檢測細胞凋亡
這個方法看凋亡,主要是看sub-G1期的細胞數量。原理就是凋亡的細胞,由于DNA正在降解,所以含量比正常細胞要少。在以PI熒光強度(代表DNA量)為橫坐標的柱狀圖上,一般會有2個峰,G1和G2,G1就是正常細胞,G2是正在分裂的2倍體。2者間是S期細胞。如果有凋亡的細胞,在G1前會有細胞出現,就是D
自動白細胞分類計數的技術現狀和展望
? ? 胡曉波,上海交通大學醫學院附屬第三人民醫院檢驗科主任,副主任技師。1993年畢業于上海第二醫科大學,并留校任醫學檢驗系教師。1999年至上海市臨床檢驗中心,擔任中心副主任,負責業務和部分行政管理工作。2006年至上海交通大學醫學院附屬第三人民醫院檢驗科工作,擔任科副主任、主任,負責業務和部分