微量全血間接熒光染色法流式細胞術樣本制備
實驗步驟 1. 取肝素或EDTA抗凝全血（100μl/份），置12×75mm專用塑料試管中。2. 加入50μl特異的單克隆抗體（一抗），室溫下孵育30min。3. 置Q-PREP儀上溶解紅細胞，穩定和固定白細胞。4. 離心（800～1000rpm，5min）棄上清液，用PBS洗滌細胞2次。5. 加入50μl熒光（FITC或PE）標記的第二抗體，室溫下避光染色30min。6. 上流式細胞儀檢測。注意事項 1. 新鮮全血一般室溫下放置8小時以內可以使用，時間過長會使活性降低，影響測定結果。2. 抗凝血應保證無血塊凝集。3. 全血加入試管中時，應盡量避免加到試管壁上，如沾到了管壁上必須用用棉簽擦凈，否則會影響細胞二維點圖的細胞群的分離效果。......閱讀全文
微量全血間接熒光染色法流式細胞術樣本制備
實驗步驟 1. 取肝素或EDTA抗凝全血（100μl/份），置12×75mm專用塑料試管中。2. 加入50μl特異的單克隆抗體（一抗），室溫下孵育30min。3. 置Q-PREP儀上溶解紅細胞，穩定和固定白細胞。4. 離心（800～1000rpm，5min）棄上清液，用PBS洗滌細胞2次。5. 加入
微量全血間接熒光染色法流式細胞術樣本制備實驗
微量全血間接熒光染色法流式細胞術樣本制備實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 1. 取肝素或EDTA抗凝全血（100μl/份），置1
微量全血間接熒光染色法流式細胞術樣本制備實驗
實驗步驟 1. 取肝素或EDTA抗凝全血（100μl/份），置12×75mm專用塑料試管中。2. 加入50μl特異的單克隆抗體（一抗），室溫下孵育30min。3. 置Q-PREP儀上溶解紅細胞，穩定和固定白細胞。4. 離心（800～1000r
微量全血間接熒光染色法流式細胞術樣本制備實驗
實驗步驟1. 取肝素或EDTA抗凝全血（100μl/份），置12×75mm專用塑料試管中。2. 加入50μl特異的單克隆抗體（一抗），室溫下孵育30min。3. 置Q-PREP儀上溶解紅細胞，穩定和固定白細胞。4. 離心（800～1000rpm，5min）棄上清液，用PBS洗滌細胞2次。5. 加入5
微量全血直接熒光染色法流式細胞術樣品制備實驗
實驗步驟目前制備全血細胞樣品的方法很多，且很成熟，常用的方法是用淋巴細胞分離液分離淋巴細胞，然后進行特異性熒光染色，其染色方法與前面介紹的方法相同。下面主要介紹與流式細胞儀配套的Q-PREP（免疫學樣品處理器）進行快速制備微量全血樣品的方法。1. 取肝素或EDTA抗凝全血（100μl/份），置12×
微量全血直接熒光染色法流式細胞術樣品制備實驗
實驗步驟 目前制備全血細胞樣品的方法很多，且很成熟，常用的方法是用淋巴細胞分離液分離淋巴細胞，然后進行特異性熒光染色，其染色方法與前面介紹的方法相同。下面主要介紹與流式細胞儀配套的Q-PREP（免疫學樣品處理器）進行快速制備微量全血樣品的方法。1
微量全血直接熒光染色法流式細胞術樣品制備實驗
目前制備全血細胞樣品的方法很多，且很成熟，常用的方法是用淋巴細胞分離液分離淋巴細胞，然后進行特異性熒光染色，其染色方法與前面介紹的方法相同。下面主要介紹與流式細胞儀配套的Q-PREP（免疫學樣品處理器）進行快速制備微量全血樣品的方法。1. 取肝素或ED
流式細胞術間接免疫熒光標記的樣品制備實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 取一定量的細胞懸液，先加入特異的第一抗體，待反應完全后洗去未結合抗體，在加入熒光標記的第二抗體，生成抗原-抗體復合物，以流式細胞儀檢測其上標記的熒光素被激發后發出的熒光。 實
流式細胞術間接免疫熒光標記的樣品制備實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 取一定量的細胞懸液，先加入特異的第一抗體，待反應完全后洗去未結合抗體，在加入熒光標記的第二抗體，生成抗原-抗體復合物，以流式細胞儀檢測其上標記的熒光素被激發后發出的熒光。 實
流式細胞術間接免疫熒光標記的樣品制備實驗
實驗方法原理取一定量的細胞懸液，先加入特異的第一抗體，待反應完全后洗去未結合抗體，在加入熒光標記的第二抗體，生成抗原-抗體復合物，以流式細胞儀檢測其上標記的熒光素被激發后發出的熒光。實驗材料實驗樣品試劑、試劑盒抗體、PBS溶液儀器、耗材移液器移液吸頭離心機實驗步驟一、不同來源樣品的處理1 . 培養細
流式細胞術的樣本制備和實驗設計
細胞來源和細胞懸液制備全血標本：1. 選擇抗凝劑時要注意你要檢測的抗原是否受抗凝劑中的組分影響？例如一些CD41抗體對EDTA非常敏感。2. 裂解液的選擇，可選擇自配的氯化銨裂解液（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-178-1-1.html）或者商業化含固定成份的裂
流式細胞術，怎么處理樣本？
流式細胞術（Flow Cytometry，FCM）能夠快速測定細胞懸液中單個細胞的生物學性質，并可以對特定的細胞進行分選收集。廣泛用于細胞生物學，免疫學，遺傳學，基礎醫學等領域。接下來的 Protocol 中以小鼠的淋巴細胞為例進行細胞表面和胞內染色。一. 試劑準備Wash Buffer：PBS+1
正常細胞常規核型的標本制備實驗_微量全血培養
正常細胞常規核型的標本制備可應用于：（1）進行核型分析；（2）與腫瘤核型進行對比研究。實驗方法原理采用微量全血培養人體外周血中淋巴細胞，在淋巴母細胞分裂高峰時加入秋水仙素，破壞細胞紡錘體的形成，使細胞停止在分裂中期。然后收集細胞，低滲處理，使細胞脹大，染色體伸展。接著進行固定并除去中期分裂相中殘存的
簡介流式細胞術實驗樣本的保存
樣本的保存：理想狀態下，樣本應在采集后立刻進行處理和染色。肝素抗凝的血和骨髓通常可保存至48-72小時/室溫（16-25）；EDTA抗凝的外周血和骨髓可保存12-24小時/室溫（16-25）；ACD抗凝的外周血可保存至72小時/室溫（16-25）；對于只作胞內染色的樣本，可固定細胞以長期保存。但
血液樣本采集和血涂片制備
?一、血液生理概要 要點1： 離體后的血液自然凝固，分離出來的淡黃色透明液體稱為血清。血液加抗凝劑后分離出來的淡黃色液體稱為血漿。血清與血漿差別是：血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纖維蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅷ等。 要點2： 全血適用于臨床血液學檢查，如血細胞計數、分類和形態學檢查
流式細胞術的樣品制備
樣本制備的基本原則：1.使各種液體和懸浮細胞樣本新鮮，盡快完成樣本制備和檢測；2.針對不同的細胞樣本進行適當洗滌、酶消化或EDTA處理，以清除雜質，使粘附的細胞彼此分離而形成單細胞狀態；3.對新鮮實體瘤組織可選用或聯用酶消化法，機械打散法和化學分散法來獲得足夠數量的單細胞懸液；4.對石蠟包埋組織應先
間接免疫熒光術的技術特點
中文名稱間接免疫熒光英文名稱indirect immunofluorescence定 義直接免疫熒光技術的改進。待檢細胞首先用未標記的抗體處理，使之與特異的抗原形成復合物，然后再用抗抗體的熒光標記抗體著色，即可檢測出特異抗原在細胞中的存在部位，具有熒光增強效應。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞
膠體金標記技術在免疫學中的應用
膠體金標記技術由于標記物的制備簡便，方法敏感、特異，不需要使用放射性同位素，或有潛在致癌物質的酶顯色底物，也不要熒光顯微鏡，它的應用范圍廣，除應用于光鏡或電鏡的免疫組化法外，更廣泛地應用于各種液相免疫測定和固相免疫分析以及流式細胞術等。1．液相免疫測定：將膠體金與抗體結合，建立微量凝集試驗檢測相應的
免疫膠體金技術的應用
膠體金標記技術由于標記物的制備簡便，方法敏感、特異，不需要使用放射性同位素，或有潛在致癌物質的酶顯色底物，也不要熒光顯微鏡，它的應用范圍廣，除應用于光鏡或電鏡的免疫組化法外，更廣泛地應用于各種液相免疫測定和固相免疫分析以及流式細胞術等。1．液相免疫測定：將膠體金與抗體結合，建立微量凝集試驗檢測相應的
免疫膠體金技術的應用
膠體金標記技術由于標記物的制備簡便，方法敏感、特異，不需要使用放射性同位素，或有潛在致癌物質的酶顯色底物，也不要熒光顯微鏡，它的應用范圍廣，除應用于光鏡或電鏡的免疫組化法外，更廣泛地應用于各種液相免疫測定和固相免疫分析以及流式細胞術等。 1．液相免疫測定：將膠體金與抗體結合，建立微量凝集試驗檢
流式細胞術熒光那些事兒
自上世紀70年代問世以來，流式細胞術（FCM）在基礎科研和臨床診斷和治療上得到了越來越廣泛的應用。但是，做FCM往往會遇到熒光信號太弱的情況。好不容易搞了一管細胞去做流式，卻做不出熒光信號。真的是急死個人。其實，毛博也是到米國做博士猴以后才開始做流式的。時間不算長。但是做得非常非常多。每天都要做好幾
流式細胞術實驗樣本的質量控制
用于流式分析的樣本種類很多，包括外周血、骨髓穿刺液、骨髓活檢物、組織活檢物、漿膜腔積液、腦脊液、皮膚、黏膜（內窺鏡活檢物）、細針穿刺物等等。樣本的條件控制可能是免疫表型分析質控最困難的環節之一。每種樣本都有不同的采集、保存、運輸和制備要求。觀測樣本外觀：有嚴重溶血、凝聚或壞死的樣本應棄用。
人末梢血微量全血培養染色體顯示法
實驗概要? ? ? ? 人末梢血微量全血培養染色體顯示法實驗步驟1．培養液準備：取15ml培養瓶數個，每瓶內分別充入5ml培養液（pH 7.2），內含：1640培養液（含10％～15％小牛血清），PHA 0.1ml，青霉素100單位和鏈霉素100微克/毫升?培養液2．抽血針管準備：取2～5ml針管一
免疫膠體金技術的測試原理及應用
測試原理 層析法免疫膠體金檢測試劑實際上是免疫金標記技術和抗原抗體反應相結合而形成的一種應用形式，相比ELISA試劑，除標記物不同外，同樣服從于抗原抗體反應的特性。此種檢測方法具有明顯的優點： *方便使用，體現在操作簡單，不需經過特殊培訓。 *短時間獲得檢測結果，一般10－15分鐘即可得出
流式細胞術常用樣品的制備方法
實驗概要流式細胞術的實驗檢測對象是單細胞懸液，因此，在組織化學和免疫組織化學實驗中欲對待測樣品細胞進行分類計數，也需把樣品制備成細胞懸液，并要求被檢細胞大小為0.2～80pm，每個樣品中至少有20 000個細胞，細胞濃度為105～107個／ml。制備成的單細胞懸液經熒光或免疫熒光標記即可上機檢測。本
流式細胞術檢測樣品推薦制備方法
A. 直接標記抗體（FITC標記抗體）：(1) 收集1×106個細胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞，800rpm離心5min。(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸
流式細胞術常規檢測時的樣品制備
一、流式細胞術常規檢測時的樣品制備??(一)直接免疫熒光標記法??取一定量細胞(約1X106細胞／ml)，在每一管中分別加入50μl的HAB，并充分混勻，于室溫中靜置1分鐘以上(),再直接加入連接有熒光素的抗體進行免疫標記反應(如做雙標或多標染色，可把幾種標記有不同熒光素的抗體同時加入)，。孵育20
免疫膠體金技術3
為了得到顆粒均一的免疫金試劑，可將上述初步純化的結合物再進一步用10％～30％蔗糖或甘油進行密度梯度離心,分帶收集不同梯度的膠體金與蛋白的結合物。（2）凝膠過濾法：此法只適用于以BSA作穩定劑的膠體金蛋白結合物的純化。將膠體金蛋白結合物裝入透析袋，在硅膠中脫水濃縮至原體積的 1／5～1／10。再
常規血液分析標準化的進展及質量管理
數十年來，國際血液學標準化委員會（ICSH）先后推薦了血紅蛋白測定（J Clin Pathol,1996年），血細胞壓積（J Clin Pathol,1980年）和紅細胞、白細胞計數（Clin Lab Haematol,1994年）的參考方法。由于種種原因，血小板計數的參考方法直到2001年才正式公
常規血液分析標準化的進展及質量管理（一）
?????? 數十年來，國際血液學標準化委員會（ICSH）先后推薦了血紅蛋白測定（J Clin Pathol,1996年），血細胞壓積（J Clin Pathol,1980年）和紅細胞、白細胞計數（Clin Lab Haematol,1994年）的參考方法。由于種種原因，血小板計數的參考方法