免疫電鏡膠體金標記法
第四節 免疫電鏡膠體金標記法 金標法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質,使其與抗體相吸附,從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時,在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色,不需加外進行染色。在電鏡水平,金顆粒具有很高的電子密度,清晰可辨。因此,免疫電鏡膠體金標記法近年來被成功地應用于生物學的各個方面,并取得了要喜的進展,解決了一些過去未能解決的問題,80年代以來似有取代免疫電鏡PAP技術的趨勢。膠體金標記抗體技術在電鏡水平應用有許多優點:首先,手續不如PAP法煩瑣,不需用H 2 O 2 等損傷微細結構的處理步驟,對微細結構的影響較少。其次,金顆粒具有很高的電子密度,在電鏡下金顆粒清晰可辨,易于與其他免疫產物相區別。因此,金標法還可以和PAP法相結合進行雙重或多重染色的超微結構定位。另外,利用不同直徑的金顆粒標記不同的抗體,是研究突觸小泡內神經遞質共存的有力工......閱讀全文
免疫電鏡膠體金標記法(簡稱金標法)
1、 包埋后染色 (超薄切片的金標記法)(1)超薄切片厚50~70nm左右,載于200~300網孔的鎳網上;(2)滴1%的H2O2液1滴于蠟板上,將網的載片面輕浮于液滴上10min至1h;(3)雙蒸水洗3次,每次10分鐘。第1、2次洗法如(2),浮于液面上,第3次以盛雙蒸水的注射器沿鎳網面沖洗,水流
免疫電鏡膠體金標記法
第四節 免疫電鏡膠體金標記法 金標法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質,使其與抗體相吸附,從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時,在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色,不需加外進行染色。在電鏡水平,金顆粒具有很高的電子密度,
免疫電鏡膠體金標記法-1
金標法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質,使其與抗體相吸附,從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時,在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色,不需加外進行染色。在電鏡水平,金顆粒具有很高的電子密度,清晰可辨。因此,免疫電鏡膠體金標
免疫電鏡膠體金標記法-2
(4)膠體金與蛋白A的結合和純化,依上法測得所需的比例超過10%,即每30ml膠體中加入2mg蛋白A,5min后,加入0.3ml PEG作為穩定劑,然后以15000r/min離心45min(不同方法制備的金離心速度不同),略帶紅色的松散的復合物沉淀即為PAg復合物。小心棄去上清液,加入PBS沖洗
免疫電鏡膠體金標記法操作大全
金標法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質,使其與抗體相吸附,從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原?反應時,在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色,不需加外進行染色。在電鏡水平,金顆粒具有很高的電子密度,清晰可辨。因此,免疫電鏡膠體金
干細胞的鑒定實驗——免 疫 電 鏡 膠 體 金 標 記 技 術
實驗步驟免 疫 電 鏡 膠 體 金 標 記 技 術免疫電鏡技術是利用抗原抗體特異性結合的原理,在細胞超微結構水平上定位、定性和定量,原位顯示抗原大分子的技術。 1971 年 Faulk 等將膠體金標記抗體技術應用到電鏡中,開始了免疫電鏡膠體金標記技術。該技術的優點是:膠體金顆粒致密,易于辨認 ;定位
免疫電鏡相關技術實驗——膠體金標記免疫電鏡技術
實驗材料病毒試劑、試劑盒膠體金儀器、耗材電子顯微鏡實驗步驟免疫膠體金標記技術又稱免疫金染色技術 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年發現直徑為 5~50nm 的膠體金 (colloidal gold) 在電鏡下具有很高的電
電鏡免疫膠體金―銀法染色技術
免疫膠體金―銀染色(immunogold-sliverstaining)技術系20世紀80年代Holgate將免疫 金染色和銀顯影方法結合而建立的一種新型檢測技術,亦可用于電鏡包埋前染色。其基本原理是先進行免疫膠體金染色標記抗原,使其結合在組織細胞抗原所在位置,然后進行物理顯影,當顯影劑中的對
免疫標記法及其分類
免疫標記法及其分類1.熒光免疫法原理是應用一對單克隆抗體的夾心法。底物用磷酸-4-甲基傘形酮,檢測產物發出的熒光,熒光強度與Mb濃度呈正比,可在8min內得出結果。結果以Mb每小時釋放的速率表示(△Mb)表示。該法重復性好,線性范圍寬,具有快速、敏感、準確的特點。以雙抗夾心法為例,首先將特異性抗體與
斷裂-標記免疫電鏡技術(2)
)超薄切片法步驟:①至⑤同臨界點干燥法。⑥1%鋨酸,室溫固定2h,系列酒精或丙酮脫水,常規電鏡包埋。⑦切半薄片,光鏡定位合適的斷裂部位,再切超薄切片,鈾鉛染色,透射電鏡觀察。斷裂標記法目前文獻報告應用較多的是植物凝集素-膠體金免疫標記技術,常用的如刀豆球蛋白(Con A)-- 膠體金免疫標記技術.C