PCR常見問題及對策
PCR常見問題及對策（一）沒有得到擴增產物（1）酶失活或在反應體系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結果。（2）模板含有雜質。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結果。（3）變性溫度是否準確：PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符，過高酶在前幾個循環就迅速失活；過低則模板變性不徹底。（4）反應系統中污染了蛋白酶及核酸酶，應在未加Taq酶以前，將反應體系95℃加熱5－10分鐘。（5）引物變質失效。人工合成的引物是否正確。是否純化，或因儲存條件不當而失活。（6）使用PCR試劑盒時還應注意：①是否嚴格按照說明書操作；②試劑使用前是否充分混勻；③試劑儲存過久或不當而失效。（二）擴增產物在凝膠中涂布或成片狀（1）酶量過高。減少酶量；酶的質量差，調換另一來源的酶。（2）dNTP濃度過高。減少dNTP的濃度。（3）MgCl2濃度過高。可......閱讀全文
PCR常見問題及對策
PCR常見問題及對策（一）沒有得到擴增產物（1）酶失活或在反應體系中未加入酶。Taq?DNA聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結果。（2）模板含有雜質。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結果。（3）變性溫度是否準確：PCR
PCR常見問題分析與對策
1.PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?2.假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白
PCR中常見問題分析與對策
PCR產物的電泳檢測時間?一般認為PCR產物應在48h以內完成電泳檢測，有些zui好于當日電泳檢測，大于48h后帶型就會出現不規則，甚至消失。?1? 假陰性，不出現擴增條帶???? PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節
PCR技術（五）：常見問題分析與對策
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
PCR污染及解決對策
?聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法，在微生物感染的診斷中具有重要的價值。在PCR擴增過程中，擴增的DNA產量是呈指數上升的，經過n個循環的擴增，一個DNA分子的產量便達到2n個拷貝。PCR產物一般為1013拷貝/
血培養，臨床常見問題及對策
?血流感染（BSI）是指病原微生物侵入血流，隨血行播散的感染，可以表現為菌血癥、真菌血癥、病毒血癥和膿毒癥。血流感染是一種全身性感染疾病，嚴重者可引起休克、彌散性血管內凝血和多臟器功能衰竭。? ? 導管相關性血流感染（CRBSI）是指帶有血管內導管或者拔除血管內導管48小時內，患者出現菌血癥
免疫組化常見問題及對策
免疫組織化學是應用抗原和抗體結合的原理，檢測細胞內多肽、蛋白質等大分子物質的分布。這種方法的特異性強、敏感度高、發展迅速、應用廣泛，成為生物學和醫學眾多學科的重要研究手段。做免疫組化可能遇到許多問題，大體歸納起來，主要有非特異性著色﹑著色部位不對﹑假陽性﹑無陽性﹑陽性弱五大類以及其他一些小問題。
免疫組化常見問題及對策
免疫組織化學是應用抗原和抗體結合的原理，檢測細胞內多肽、蛋白質等大分子物質的分布。這種方法的特異性強、敏感度高、發展迅速、應用廣泛，成為生物學和醫學眾多學科的重要研究手段。做免疫組化可能遇到許多問題，大體歸納起來，主要有非特異性著色﹑著色部位不對﹑假陽性﹑無陽性﹑陽性弱五大類以及其他一些小問題。現在
PCR污染與對策
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生.污染原因 (一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污
PCR污染與對策
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生. 一、污染原因 1、標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣