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    控制基因敲除法

    【探針技術用于檢測由siRNA介導的基因調制】 為了研究基因功能,科學家們常常會有針對性地關斷某些特定的基因。 而要驗證這種基因沉默的有效性, 就需要運用適當的具特異性的檢測方法。理想的檢測方法不僅要測量準確, 而且還要能讓細胞保持完好無損。 利用諸如RNA(核糖核酸)技術來調節基因表達已成為研究基因功能和生物反應機理的一種基本手段。常規的測定基因沉默率(基因敲除)的方法,需要采用細胞裂解或細胞壁通透以及細胞固定的方法將細胞加以破壞。而且這些技術的缺點還在于所測定的結果只能反映細胞群體的平均的基因表達。 轉染報告構建是一種對細胞無損害的檢測方法。然而這種方法雖能讓細胞保持活性, 卻不能對內源基因的表達進行檢驗。此外, 該方法對細胞的活性也有負面影響。理想的、非破壞性的RNA檢測試劑不僅要適合基因表達的研究, 還應能夠用于后續離析得到的活細胞的分選及分析中。 Smartflare“......閱讀全文

    廣州生物院利用CRISPR/Cas9技術建立基因敲除克隆豬

      中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院研究員、吉林大學教授賴良學博士的研究團隊利用最新的CRISPR/Cas9技術成功地培育出兩種基因敲除克隆小型豬,即酪氨酸酶基因敲除豬和PARK2和PINK1雙基因敲除豬,建立了人類白化病和帕金森綜合征兩種豬模型,該研究成果于10月2日在線發表在Cellular

    倚天屠龍,誰與爭鋒——且看基因敲除與RNA干擾的關系

      研究歷史   20世紀80年代初,胚胎干細胞分離和體外培養的成功為基因敲除奠定了技術基礎。1985年,首次證實的哺乳動物細胞中同源重組(homology recombination, HR)的存在為基因敲除奠定了理論基礎[2]。為了編輯基因,傳統的靶向特定等位基因的同源重組技術被使用,但是,這

    如何讓基因敲除效率提升3倍,價格降低一半?

      CRISPR/Cas9基因編輯技術以它效率高、操作簡便、成本低等特點被廣泛應用于基因敲除小鼠實驗中,但是在將RNAs注入受精卵的環節中,傳統的顯微注射技術需要借助顯微操作系統人工逐個進行受精卵注射,十分耗時。同時,想要提高基因敲除的成功率,需要獲得更多受精卵,再加上人工設計基因打靶方案耗時費力,

    Multiplex sgRNA技術解決多基因或LncRNA敲除難題的技術研究

      苦于多基因 or LncRNA敲除的同學,你的福音來啦!   我們都知道基因剪刀CRISPR/CAS9技術今年大火,之所以這個技術這么火和其對基因操作的方便性,高效性,準確性及高性價比是分不開的。CRISPR/Cas9是一種能夠對任何物種基因組的特定位點進行精確編輯的技術。其原理是核酸內切酶C

    中國農大特聘教授發表CRISPR文章

      2015年12月10日,中國農業大學特聘教授韓建永帶領的研究小組,以Letter的形式在《Protein & Cell》雜志上發表題為“Highly efficient generation of biallelic reporter gene knock-in mice via CRI

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    如何讓基因敲除效率提升3倍,價格降低一半?

      CRISPR/Cas9基因編輯技術以它效率高、操作簡便、成本低等特點被廣泛應用于基因敲除小鼠實驗中,但是在將RNAs注入受精卵的環節中,傳統的顯微注射技術需要借助顯微操作系統人工逐個進行受精卵注射,十分耗時。同時,想要提高基因敲除的成功率,需要獲得更多受精卵,再加上人工設計基因打靶方案耗時費力,

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    20世紀80年代初,胚胎干細胞分離和體外培養的成功為基因敲除奠定了技術基礎。1985年,首次證實的哺乳動物細胞中同源重組(homology recombination, HR)的存在為基因敲除奠定了理論基礎[2]。為了編輯基因,傳統的靶向特定等位基因的同源重組技術被使用,但是,這個方法在當年來說,存

    識別健康人體內敲除基因有助開發生物醫學新療法

      Daniel MacArthur對人體功能不需要的基因的尋找起源于兩個生病的男孩。2000年,作為一名大學生,他開始在Kathryn North的實驗室工作,North是一位研究罕見病例的遺傳學家,她在澳大利亞悉尼大學的團隊最近發布了兩兄弟肌營養不良癥早發性形成的可能原因。他們懷疑其原因是ACT

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    基因編輯培育出首例白化西藏小型豬

      從南方醫科大學獲悉,該校實驗動物中心科研團隊運用CRISPR/Cas9基因編輯技術,成功培育出世界首例白化西藏小型豬,同時敲除了與免疫相關的基因,這標志著自主構筑的基于小型豬受精卵制備基因修飾豬的平臺取得了突破性進展。而在此之前,全世界尚未有純白藏豬的先例。  藏豬作為我國獨有的高原特殊品種,全

    TetraOne KO——基因敲除技術的重大突破

      TetraOne KO——基因敲除技術的重大突破   近日,賽業生物科技(Cyagen Biosciences)宣布推出其全球專利技術TetraOne基因敲除,一種不僅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9(把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6個月),而且避免了TALEN、

    Nature:基因揭開巴基斯坦小漁村里心血管的健康秘密

      人類有自然發生的基因敲除  科學家經常用基因敲除的小鼠來了解基因的功能。在人類中自然發生的“基因敲除”是指從父母中繼承了兩個非活性的拷貝,而導致基因失活。  4月12日的Nature在線報道了超過1800個人攜帶的“基因敲除”。這是賓夕法尼亞大學醫學院的研究人員領導的一項國際合作項目。該計劃迄今

    AV-TBG-Cre/GOI在小鼠肝臟特異性基因表達敲除應用與分析

      AAV-TBG-Cre/GOI系統簡介:   l AAV-TBG-Cre系統是整合了肝臟特異性TBG啟動子和Cre重組酶的腺相關病毒載體。   ? TBG啟動子是一種基于人甲狀腺結合球蛋白(TBG)啟動子和微球蛋白增強子的混合型啟動子,用于肝臟特異性轉外源基因表達。   ? Cre重組酶是

    基因敲除的不簡單-論p53基因的重要性

      p53基因位于17號染色體p13,全長16-20kb,含有11個外顯子,轉錄2.8kb的mRNA,編碼一種分子量為43.7KDa的P53蛋白質,是一種核內磷酸化蛋白。因蛋白條帶出現在Marker所示53KDa處,命名為P53。p53基因是人體一種腫瘤抑制基因(tumor suppressor g

    Circulation Research |器官特異性血管遺傳靶向技術及應用

      5月15日,中國科學院生物化學與細胞生物學研究所周斌研究組在國際學術期刊Circulation Research上發表了題為“Genetic Targeting of Organ-Specific Blood Vessels”的最新研究成果。該項工作建立一套新的遺傳操作系統以實現更加精確的遺傳靶

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    TetraOne KO——基因敲除技術的重大突破

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    小鼠資源庫應用Cas9技術獲得世界首批基因敲除動物

       CRISPR/Cas系統是細菌進化形成的免疫防御機制。國家遺傳工程小鼠資源庫瞄準該系統,開發出CRISPR/Cas9技術用于基因組改造,實現了基因精確定點插入,且無需胚胎干細胞,無物種限制,直接注射受精卵,實驗周期僅為傳統方法的1/10,材料成本也大大降低。  目前,資源庫已成功利用該技術獲得

    p53基因的重要性

    p53基因位于17號染色體p13,全長16-20kb,含有11個外顯子,轉錄2.8kb的mRNA,編碼一種分子量為43.7KDa的P53蛋白質,是一種核內磷酸化蛋白。因蛋白條帶出現在Marker所示53KDa處,命名為P53。p53基因是人體一種腫瘤抑制基因(tumor suppressor gen

    Natureasia聚焦:CRISPR/Cas研究進展Top20

      CRISPR/Cas系統是目前發現存在于大多數細菌與所有的古菌中的一種后天免疫系統,其以消滅外來的質體或者噬菌體并在自身基因組中留下外來基因片段作為“記憶”。  CRISPR/Cas系統全名為常間回文重復序列叢集/常間回文重復序列叢集關聯蛋白系統(clustered regularly inte

    多位中國學者合作發文:世界首個基因敲除狗模型

      近日,中科院廣州生物醫藥與健康研究院、南京大學-南京生物醫藥研究院和廣州醫藥研究總院合作,利用CRISPR/Cas9技術成功培育兩只肌肉生長抑制素(Myostatin)基因敲除狗,從而在世界上首次建立了狗的基因打靶技術體系,該研究成果已被國際學術期刊Journal of Molecular Ce

    應用優化CRISPR技術建立基因完全敲除的小鼠及猴

      6月6日,《細胞研究》在線發表了一項成果,應用改進的“C-CRISPR”技術可以獲得單基因或多基因功能完全敲除的小鼠及猴。這項研究由中國科學院上海生命科學研究院神經科學研究所、腦科學與智能技術卓越創新中心的楊輝研究組、熊志奇研究組以及神經所蘇州非人靈長類研究平臺孫強團隊合作完成。該研究通過將多個

    CRISPR-Cas9基因編輯技術在三大熱門腫瘤免疫治療中的應用

      基因編輯技術是對某一核苷酸序列中的特定基因位點進行人為改變,插入、刪除、替換或修飾基因組中的特定目的基因使其表達性狀改變的一種新興分子生物技術。CRISPR -Cas9作為一種新興的基因編輯技術,通過定向敲除腫瘤免疫檢查點分子或者通過快速簡便的基因編輯,而被廣泛應用于腫瘤治療領域,其顯著降低了腫

    廣州生物院用TALENs基因敲除技術成功培育免疫缺陷性家兔

      中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院賴良學博士和裴端卿博士領導的研究團隊將轉錄激活因子樣效應物核酸酶(TALENs)技術應用于兔基因敲除研究,建立了兔基因打靶的高效平臺。并利用該技術平臺成功地將負責T細胞和B細胞重排的重組激活基因(RAG)敲除,建立了世界首例免疫缺陷家兔疾病模型,該成果于7月9日

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    Development:利用改進的CRISPR基因編輯平臺研究人類發育

      在一項新的研究中,來自英國韋爾科姆基金會桑格研究所和劍橋大學的研究人員構建出一種更加高效的和可控的CRISPR基因組編輯平臺:sOPTiKO。他們描述了這種免費獲得的單步驟系統如何在體內每個細胞和每個發育步驟中發揮作用。這種新方法將有助科學家們開展發育生物學、組織再生和癌癥研究。相關研究結果發表

    CRISPR 技術進行細胞 TP53 基因敲除

    實驗原理 TP53 是重要的抑癌基因。在多種腫瘤中都能發現 TP53 基因突變及功能喪失。我們將針對 TP53 基因設計的靶點構建到 pCas9/gRNA1 載體,轉染 293T 細胞,構建了 TP53 基因敲除 293T 細胞系。 1、本實驗基因敲除原理:pCas9/gRNA1 載體表達

    如何選擇基因敲除動物模型制備技術?

    動物模型是現代生命科學研究的重要工具,特別是基因工程小鼠和大鼠,在基因功能研究、人類生理病理機制研究及新藥研發中起著不可替代的作用。近幾年來,制 備動物模型的基因修飾技術層出不窮,這不僅包括傳統ES打靶、TALEN、CRISPR/Cas9, 還有TetraOne基因敲除新技術。如此繁

    Cell子刊:基因組,牽一發而動全身

      約翰霍普金斯大學的研究人員報告稱,在酵母中任何一個基因缺失都會給生物體基因組施加壓力去進行補償,從而導致另一個基因突變。鑒于不同物種間DNA的保守性,他們的研究發現或許也適應于人類遺傳學,有可能對癌癥和其他研究領域的遺傳分析方式造成重大的影響。   在發表于11月21日《分子細胞》(Molec

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