Western實驗中內參基因的選擇及使用方法
Western Blot實驗常用于檢測蛋白表達量、蛋白表達產物的正確性等。相對于其他檢測蛋白的方法而言Western Blot實驗在蛋白的定性定量分析、與目的蛋白量的比較方面更簡單一些。雖然，順利的時候Western blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、抗體問題啦（一抗有問題還是二抗有問題啦）……畢竟，作為一種有活性的生物大分子，抗體和抗原的反應不象1+1那么明確，而用這種不確定的試劑來測定同樣知之甚少的表達產物，確實是有一定的不確定性的。所以，嚴謹的 Western Blot實驗設計中要求有良好的參照體系，對實驗結果分析是非常有用。特別是當實驗出現問題時，借助參照體系很容易就可以查出問題所在，而不必抓耳撓腮怨天尤人。良好的參照體系通常包括分子量marker(用來確定蛋白條帶對應的分子量大小)、空白載體對照 (如果是誘導表達體系還應該有誘導前的對照)、已知量標準......閱讀全文
realtime－PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的，而內參做出來差別大（比如3-4個CT值）那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多，內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的，那說明你的樣本要么降解了，要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響，必須換一個基因做內參
realtime－PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的，而內參做出來差別大（比如3-4個CT值）那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多，內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的，那說明你的樣本要么降解了，要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響，必須換一個基因做內參
集胞藻PCC6803蛋白抗體分類及功能
PHYTOAB公司開發了集胞藻PCC6803蛋白抗體，產品網址鏈接：http://www.phytoab.com/products/algae-antibodies/cyanobacteria聯系電話：400-810-0506PHYTOAB是一家專門從事植物抗體生產和定制服務的企業，總部位于美國加利
Western－Blotting,實驗標本處理
抗體和樣品要求1.為保證質量，抗體最好為進口單克隆抗體；2.樣本要求：盡可能新鮮；3.?樣本量：組織樣本，質量大于100mg；細胞樣本，細胞數大于1×106；注意事項：1.市內細胞樣品可直接常溫運送，運送時在培養瓶中裝滿培養液并以封口膜封口，建議凍存后運輸。2.取樣和存樣所用的凍存管、離心管、吸頭等
Western－Blot－Protocol實驗操作步驟
一、提取抗原蛋白 將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl100%酒精充分混勻，靜置 ?5min(RT),2000×g,4℃離心5min,吸取上清至新管中,加入750μl異丙醇,混勻,靜置10min(RT),12000×g,4℃離心 ?10min,棄上清,加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒
western－blot實驗結果怎么分析
灰度掃描目標條帶，與內參條帶灰度值比較，進行標準化數據。根據比值繪制圖表。IP=immunoprecipitation 免疫沉淀（富集樣品或避免抗體同原材料中其他物質發生非特異反應）IB=immunoblotting 免疫印跡 （不一定是蛋白免疫印跡=Western blotting）
線粒體內參抗體—克隆號為14Y2的COX－IV單克隆抗體
細胞色素c氧化酶(Cytochrome c oxidase，簡稱COX)是一種異源寡聚酶，通常含有13個亞基，定位于線粒體內膜，是線粒體呼吸鏈的酶復合物。細胞色素c氧化酶中形成催化中心的3個最大的亞基由線粒體DNA編碼，其余10個亞基包括COX IV由細胞核內的基因組DNA編碼。細胞色素
雙熒光素酶報告基因實驗怎么轉染目的和內參兩種質粒
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。
雙熒光素酶報告基因實驗怎么轉染目的和內參兩種質粒
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。
什么是內參,內參的作用是什么
內參就是取在一般細胞當中表達量較為穩定的基因，你的目的基因要與其進行比較。因為你每次的樣品不一定一樣，所以必須要有內參進行校正。要是內參沒有起峰，那這個數據基本沒用。
內參基因與目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之間表達量差異很大，可達上千甚至上萬倍之差，所以CT值差10以內屬正常現象，但通常選用內參基因屬于表達量較高的持家基因，如果目標基因和內存基因表達量（CT值差）過大，用內參基因來衡量目標基因的表達量（絕對值）就不完全可靠，但至少可以說明目標基因表達非常低。
有兩個內參基因時,目的基因的ct值怎么算
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致，說明你PCR的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
內參基因與目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之間表達量差異很大，可達上千甚至上萬倍之差，所以CT值差10以內屬正常現象，但通常選用內參基因屬于表達量較高的持家基因，如果目標基因和內存基因表達量（CT值差）過大，用內參基因來衡量目標基因的表達量（絕對值）就不完全可靠，但至少可以說明目標基因表達非常低。
有兩個內參基因時,目的基因的ct值怎么算
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致，說明你PCR的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
有兩個內參基因時,目的基因的ct值怎么算
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致，說明你PCR的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
內參基因與目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之間表達量差異很大，可達上千甚至上萬倍之差，所以CT值差10以內屬正常現象，但通常選用內參基因屬于表達量較高的持家基因，如果目標基因和內存基因表達量（CT值差）過大，用內參基因來衡量目標基因的表達量（絕對值）就不完全可靠，但至少可以說明目標基因表達非常低。
內參基因與目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之間表達量差異很大，可達上千甚至上萬倍之差，所以CT值差10以內屬正常現象，但通常選用內參基因屬于表達量較高的持家基因，如果目標基因和內存基因表達量（CT值差）過大，用內參基因來衡量目標基因的表達量（絕對值）就不完全可靠，但至少可以說明目標基因表達非常低。
內參基因與目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之間表達量差異很大，可達上千甚至上萬倍之差，所以CT值差10以內屬正常現象，但通常選用內參基因屬于表達量較高的持家基因，如果目標基因和內存基因表達量（CT值差）過大，用內參基因來衡量目標基因的表達量（絕對值）就不完全可靠，但至少可以說明目標基因表達非常低。
有兩個內參基因時,目的基因的ct值怎么算
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致，說明你PCR的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
內參基因與目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之間表達量差異很大，可達上千甚至上萬倍之差，所以CT值差10以內屬正常現象，但通常選用內參基因屬于表達量較高的持家基因，如果目標基因和內存基因表達量（CT值差）過大，用內參基因來衡量目標基因的表達量（絕對值）就不完全可靠，但至少可以說明目標基因表達非常低。
內參基因與目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之間表達量差異很大，可達上千甚至上萬倍之差，所以CT值差10以內屬正常現象，但通常選用內參基因屬于表達量較高的持家基因，如果目標基因和內存基因表達量（CT值差）過大，用內參基因來衡量目標基因的表達量（絕對值）就不完全可靠，但至少可以說明目標基因表達非常低。
實驗室Western－Blot熒光實驗干貨分享
聽說隔壁實驗室買了一臺新成像，可以做Western Blot熒光掃描式Azure Sapphire成像，效果很好，操作也簡單，小師妹一臉羨慕，問了句，我從來沒做過熒光實驗，現在期刊雜志要求也在升級，也建議使用熒光的方法，之前因為沒有合適的儀器，所以不能嘗試，現在可以準備我的實驗了，那從化學到熒光
實驗室Western－Blot熒光實驗干貨分享
聽說隔壁實驗室買了一臺新成像，可以做Western Blot熒光掃描式Azure Sapphire成像，效果很好，操作也簡單，小師妹一臉羨慕，問了句，我從來沒做過熒光實驗，現在期刊雜志要求也在升級，也建議使用熒光的方法，之前因為沒有合適的儀器，所以不能嘗試，現在可以準備我的實驗了，那從化學到熒光
pcr內參大小
初次做PCR，將反轉錄RNA濃度統一調整到900ng（20μl體系）后, 即45ng/μl。然后按照程序進行熒光定量PCR，但是在實際中，內參基因（β-actin）的CT值范圍從16-21不等。主要疑問有兩個，第一，內參CT值范圍多大合適，是一致才可靠嗎？第二，目的基因CT值，在實際測定中空白的CT
pcr內參大小
初次做PCR，將反轉錄RNA濃度統一調整到900ng（20μl體系）后, 即45ng/μl。然后按照程序進行熒光定量PCR，但是在實際中，內參基因（β-actin）的CT值范圍從16-21不等。主要疑問有兩個，第一，內參CT值范圍多大合適，是一致才可靠嗎？第二，目的基因CT值，在實際測定中空白的CT
PCR實驗時需要設置陽性內參照的目的
保證你檢測的每個樣品的均一性，保證檢測結果的可比性，如果某一個樣品中對PCR擴增有干擾作用，那么就會體現在陽性內參照的結果上，陽性內參照做出來是陰性或者比正常陽性內參照的值要低。
RTPCR內參基因選擇：除了βactin還能用什么？
Q1： 要做real-time pcr，而該種的β-actin未確定，我知道一般用持家基因作內參，但似乎其他基因各有缺點，有的作者用他們做內參時被SCI雜志要求用兩個內參以證實，我想知道的是除了β-actin，哪個基因是SCI公認的內參基因(不用作兩個內參了)?A1： 28S和18S rRNA甘油醛
甘油醛3磷酸脫氫酶的基本介紹
該酶是糖酵解反應中的一個酶，由4個30－40kDa的亞基組成，分子量146kDa。該酶基因為管家（house keeping）基因，幾乎在所有組織中都高水平表達，在同種細胞或者組織中的蛋白質表達量一般是恒定的，且不受含有的部分識別位點、佛波脂等的誘導物質的影響而保持恒定，故被廣泛用作抽提total
甘油醛3磷酸脫氫酶的基本信息介紹
該酶是糖酵解反應中的一個酶，由4個30－40kDa的亞基組成，分子量146kDa。該酶基因為管家（house keeping）基因，幾乎在所有組織中都高水平表達，在同種細胞或者組織中的蛋白質表達量一般是恒定的，且不受含有的部分識別位點、佛波脂等的誘導物質的影響而保持恒定，故被廣泛用作抽提tota
GAPDH抗體推薦—Abbkine高性價比GAPDH內參抗體的選擇
在Western Bloting實驗中，可能存在總蛋白濃度測定不準確，或者蛋白質樣品在電泳前上樣時產生的樣品間的操作誤差；這些誤差可以通過測定每個樣品中實際轉到膜上的內參，比如內參GAPDH的含量來進行校正。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是參與糖酵解的一種關鍵酶，由4個30-40kDa的亞基組