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3.用RNase III 消化長片斷雙鏈RNA制備siRNA其他制備siRNA的方法的缺陷是需要設計和檢驗多個siRNA序列以便找到一個有效的siRNA。而用這種方法——制備一份混合有各種siRNAs “混合雞尾酒” 就可以避免這個缺陷。選擇通常是200—1000堿基的靶mRNA模版，用體外轉錄的方法制備長片斷雙鏈dsRNA ，然后用RNase III (or Dicer) 在體外消化，得到一種siRNAs“混合雞尾酒”。在除掉沒有被消化的dsRNA后，這個siRNA混合物就可以直接轉染細胞，方法和單一的siRNA轉染一樣。由于siRNA混合物中有許多不同的siRNAs，通常能夠保證目的基因被有效地抑制。dsRNA消化法的主要優點在于可以跳過檢測和篩選有效siRNA序列的步驟，為研究人員節省時間和金錢（注意：通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜）。不過這種方法的缺點也很明顯，就是有可能引發非特異的基因......閱讀全文
1. RNAi 介紹 RNA 干擾（RNAi:RNA interference）是由諾貝爾生理學/醫學獎得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在線蟲實驗中發現的，2001 年 Elbashir 等人發現哺乳類的 siRNA 可以進行 RNAi 誘導
1. RNAi 介紹RNA 干擾（RNAi:RNA interference）是由諾貝爾生理學/醫學獎得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在線蟲實驗中發現的，2001 年 Elbashir 等人發現哺乳類的 siRNA 可以進行 RNAi 誘導。這個方法與常規方
前言Lipofectamine? 2000試劑是一項專利配方，用于高效轉染Stealth? RNA或者短的干擾RNA（siRNA）到哺乳動物細胞，以進行RNAi分析（1，2）。該說明書提供了一般的指導以及使用Lipofectamine? 2000轉染Stealth? RNA或者siRNAj進入哺乳動
本文來自于哈佛大學醫學院果蠅RNAi篩選中心的經典實驗方法，專門用于果蠅RNAi實驗方法。感謝哈佛大學醫學院果蠅RNAi篩選中心的支持！Primer Designed dsRNATemplate SelectionPCRIn vitro RNA TranscriptiondsRNA Pur
對于那些之前在研究基因功能方面受到挫折的研究人員而言，體內RNA干擾（RNA interference，RNAi）技術的出現就好像是救兵一般，令人欣喜。理論上體內RNAi能進行更加細致的敲除，從而研究人員能獲得時間和空間調控的基因敲除效果。 但是這并不意味著體內RNAi是一件容易完成的實驗，實際上
幾十年來生物學上最重要的進展，也許是關于RNA分子能調節基因表達的發現。RNA干涉（RNAi）是指雙鏈RNA分子使基因表達沉寂的現象，是在線蟲中發現的，在 1998年的一篇Nature論文中被公諸于眾。 此后，科學家們明白，RNAi還有其他形式，它既
三，RNAi的應用前景RNAi 技術中的相關問題主要涉及以下幾點：(1) dsRNA 序列的選擇dsRNA 主要選自已知的cDNA 的開放閱讀框架(ORF) 中的基因區域。為防止mRNA 調控蛋白對RISC 與靶RNA 結合的干擾,應避免選擇包括:1) 起始密碼子下游或終止密碼的50～100 核
RNAi實驗原理與方法近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾（
盡管有些公司推出了shRNA和siRNA試劑盒，但這些試劑盒大都突出操作簡單，畢竟涉及RNA操作，用戶自己難免會產生很多預料不到的困難，晶賽公司可以完全為您解決后顧之憂，您可以直接拿到有效的siRNA或shRNA序列。 3． Dicer酶法生產siRNA優點：可以跳過篩選與檢測有效siRN
馬氏珠母貝是一種具有較大經濟價值的海水養殖貝類和生產珍珠的主要母貝，也是國際上研究生物礦化機制的良好實驗材料。對馬氏珠母貝性狀分子遺傳基礎和重要基因功能進行解析，將有助于推動其遺傳改良技術的發展和品種創制。 近日獲悉，中國科學院南海海洋研究所何毛賢研究團隊利用RAD高通量SNP分型技術，構建了
實驗概要進行RNAi實驗實驗原理通過生化和遺傳學研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititation and effector steps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(small interfering RN
幾十年來生物學上最重要的進展，也許是關于RNA分子能調節基因表達的發現。RNA干涉（RNAi）是指雙鏈RNA分子使基因表達沉寂的現象，是在線蟲中發現的，在 1998年的一篇Nature論文中被公諸于眾。此后，科學家們明白，RNAi還有其他形式，它既是一種了解基因功能的強大工具，又是很多生物的基因組所
首次發現dsRNA能夠導致基因沉默的線索來源于線蟲Caenorhabditis elegans的研究。>1995年，康乃爾大學的Su Guo博士和>Kemphues在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲（C. elegans）中的par-1基因時，發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義
來自四川大學華西醫學中心微生物學教研室，成都生物制品研究所（Institute of Chengdu Biological Products）的研究人員通過構建質粒pAd-hTR證明了hTR siRNA在HeLa細胞系中有效和特異的端粒酶的敲除，從而指出了這種siRNA表達重組腺病毒系統在癌癥基因治
近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾（RNAi）。一、RNA
1995年，康乃爾大學的Su Guo博士在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲（C. elegans）中的par-1基因時，發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義RNA技術特異性地阻斷上述基因的表達，而同時在對照實驗中給線蟲注射正義RNA（sense RNA）以期觀察到基因表達的增強。但得到的結果
RNAi技術RNA干擾(RNA interference， RNAi)是近年來發現的研究生物體基因表達、調控與功能的一項嶄新技術，它利用了由小干擾RNA(small interfering RNA， siRNA)引起的生物細胞內同源基因的特異性沉默(silencing)現象，其本質是siRNA與對應
上回我們說到國自然基金的創新性，創新性是國自然項目評議要點的第一條。評議要點的第二條是針對研究內容、研究目標及擬解決的關鍵科學問題進行評議。這回，我們就來聊聊研究內容如何設計。 研究內容的設計與創新點息息相關，不能脫離創新點，研究內容就是圍繞創新點進行實驗設計，論證創新點的正確性。
基因沉默（gene silencing）是生物體內特定基因由于種種原因不表達的遺傳現象。一方面，基因沉默是生物遺傳操作創造新的遺傳修飾生物（genetically modified organisms）的障礙，另一方面，它又是植物抵抗外來核酸入侵（如病毒）的一種反應，為植物抗病毒的遺傳育
基因和siRNA選擇RNAi實驗的通量可從沉默單個感興趣的基因，到少量相關基因或同一個通路上的基因，到全基因組高通量篩選，取決于需要解決的生物學問題。siRNA的設計至關重要。轉染優化用于RNAi實驗的細胞應當有效轉染siRNA。轉染必須經過優化確保siRNA的濃度是最低的有效濃度以避免非特異性效應
棉鈴蟲病毒是控制棉鈴蟲危害的一種重要生物農藥，它能夠克服宿主的免疫系統，建立系統感染，最終殺死宿主昆蟲。在當前研究中，對棉鈴蟲病毒克服宿主免疫系統機制了解的缺乏，制約著對其殺蟲性能的進一步優化。 黑化反應是昆蟲一種獨特的天然免疫機制，由絲氨酸蛋白酶級聯反應介導對酚氧化酶原的剪切，這個過程被絲氨
棉鈴蟲病毒是控制棉鈴蟲危害的一種重要生物農藥，它能夠克服宿主的免疫系統，建立系統感染，最終殺死宿主昆蟲。在當前研究中，對棉鈴蟲病毒克服宿主免疫系統機制了解的缺乏，制約著對其殺蟲性能的進一步優化。 黑化反應是昆蟲一種獨特的天然免疫機制，由絲氨酸蛋白酶級聯反應介導對酚氧化酶原的剪切，這個過程被絲氨
引言寡核苷酸合成是非常高效和高產率的過程。在固相載體上進行寡核苷酸反應的典型產率為每耦合階98～99.5%。在典型的多階寡核苷酸合成中，雜質聚集在一起，即使是一般大小的21基體寡核苷酸的總產率也達到67～90%，較長鏈的寡核苷酸的產率相應較低。研究人員通常需要使用純度高于初步合成混合物的材料。因此，
圖2中所示被選中的餾份收集窗表示不同的質量負荷。峰值采集后，樣品可以根據需要對等分和干燥，以便長期儲存。TEAA的揮發性使離子對緩沖組分的去除非常容易。溶劑蒸發后被純化的寡核苷酸實際上是不含鹽的。 UPLC條件純化RNA寡核苷酸的純度通過ACQUITY UPLC系統來驗證。如圖3所示，我們
生物學家們總是沉迷于對基因組修修補補，而其中一種近期紅得發紫的技術就是 CRISPR。自2012年CRISPR/Cas 首次作為一種基因組編輯工具登臺以來，關于這種技術的論文數量就大幅增加，最好的證明之一就是2015年兩位科學家由于在CRISPR基因組編輯技術方面的重要貢獻而獲得“科學突破獎”，
4 產生RANi 的方法產生RANi 的方法主要有體外合成和體內合成siRNA 法。將siRNA 導入細胞的方法又分為微量注射法、電穿孔法、浸泡法、工程菌喂養法、轉基因法和病毒感染法等。Harborth 等[14 ]設計體外合成21nt siRNA 的方法是：在基因庫中尋找靶向基因的mRNA 序列，
siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是對特定信使RNA（mRNA）進行降解的指導要素，細胞轉染實驗中經常會遇到siRNA轉染，下面介紹一下siRNA轉染成功的主要關鍵點。圖片來源于網絡 1.設計合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA對相應mRNA進行有效的結合和作用。si
5月31日，應中國科學院昆明動物研究所孔慶鵬研究員的邀請，汕頭大學許麗艷教授和李恩民教授到研究所進行學術交流。當天下午，許麗艷教授和李恩民教授給所內師生們分別做了題為“fascin基因在食管癌中的功能、表達調控及其細胞信號傳導通路”以及“橋粒糖蛋白DSC2負性調控食管癌細胞侵襲遷移的分子機制”的
生物通報道：來自西安交通大學醫學部，瑞士巴塞爾大學的研究人員發表了題為“Constitutive high expression of protein arginine methyltransferase 1 in asthmatic airway smooth muscle cells is
RNAi療法因為能夠有效靶向普通藥物無法靶向的蛋白而成為醫藥界所關注的醫療手段。但是與其它靶向療法一樣，RNAi療法也會產生脫靶效應，而這些脫靶效應可能造成嚴重的毒副作用。日前，Alnylam Pharmaceuticals公司的研究人員對N-乙酰半乳糖 (GalNAc) 綴合的RNAi 造成肝