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    活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用(三)

    細胞骨架如微管、微絲等一直是生命科學研究的重點。近期Johnsson等科學家將SiR直接標記于與微管和微絲分別特異性結合的小分子docetaxel和jasplakinolide,即形成SiR-tubulin和SiR-actin,實現了在不對細胞或組織進行任何轉染或基因組修飾的條件下直接進行活細胞成像[18](圖9)。SiR-tubulin和SiR-actin仍然保留了SiR的優良特性,非常適用于STED成像(圖10)。SiR-tubulin標記人成纖維活細胞中的微管后, STED超高分辨率顯微鏡揭示了細胞質中及中心體上tubulin的定位及結構信息。在這種標記和成像方法下,細胞質中微管的粗細測量為39±10 nm, 這是目前活細胞中微管成像的最高分辨率。STED成像也清晰的揭示了中心體上的微管以9個亞復合體排布成直徑約176±10 nm的環形(圖10a,b),兩個臨近亞復合體之間的夾角成39°±13°(圖10c),這......閱讀全文

    活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用(三)

    細胞骨架如微管、微絲等一直是生命科學研究的重點。近期Johnsson等科學家將SiR直接標記于與微管和微絲分別特異性結合的小分子docetaxel和jasplakinolide,即形成SiR-tubulin和SiR-actin,實現了在不對細胞或組織進行任何轉染或基因組修飾的條件下直接進行活細胞成像

    活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用(一)

    如何免除活細胞標記中的清洗(washout)步驟?SNAP-tag等標記方法為活細胞顯微成像帶來了革命性的變化,也因此被Nature雜志評為2004年最熱門的科研技術之一。但是傳統的SNAP-tag標記仍然有很大的缺陷。將帶有熒光探針的底物BG加入細胞后需要多次清洗細胞,才能將未結合的BG去除從而消

    活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用(二)

    圖5.EGFR在細胞中轉運的實時記錄。(a)示意圖,用于解釋如何利用FAPL探針來實時追蹤EGFR相關的細胞膜轉運過程。(b)COS7細胞中表達的EGFR用DRBG-488標記(綠色),溶酶體用lysosometracker(紅色)標記。(c)對表達SNAP-EGFR–CFP的MDCK細胞進行共聚焦

    活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用(四)

    熒光顯微鏡在研究活細胞中蛋白質分子的定位、相互作用及動力學等生命活動中起著不可或缺的作用。將熒光蛋白如綠色熒光蛋白和目的蛋白融合表達,然后利用熒光蛋白發出的特異性熒光來觀察和追蹤目的蛋白分子在科學研究中得到了廣泛的應用。但是熒光蛋白具有量子產量低、成熟速度受限、光譜容易受到環境因素影響及容易形成聚集

    活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用(五)

    SNAP-tag技術在STED超高分辨率顯微成像中的應用近十年中,顯微成像技術得到了飛躍的發展,填補光學顯微鏡(~200 nm)到電子顯微鏡(~0.1 nm)分辨率缺口,打破光學衍射極限的超高分辨率顯微鏡也越來越趨于成熟化。其中,德國馬普研究所的Stefan Hell教授憑借其研發的受激發射

    熒光標記基團的選擇及其在熒光定量PCR中的應用

    PCR實驗室產品選擇指南 熒光  基團是吸收一定波長的光子后發射特定波長的光波,可以作為抗體等分子的標記物,實時熒光定量PCR中的Taqman探針常用熒光基團FAM標記熒光基團和TAMRA標記。 熒光基團 吸收特定波長的光子后熒光染料(通常稱為“熒光基團”或簡稱為“熒光

    免疫標記法及其分類

    免疫標記法及其分類1.熒光免疫法原理是應用一對單克隆抗體的夾心法。底物用磷酸-4-甲基傘形酮,檢測產物發出的熒光,熒光強度與Mb濃度呈正比,可在8min內得出結果。結果以Mb每小時釋放的速率表示(△Mb)表示。該法重復性好,線性范圍寬,具有快速、敏感、準確的特點。以雙抗夾心法為例,首先將特異性抗體與

    關于活性氧分子熒光探針標記法的應用

    眾所周知,氧氣是生命運動過程中不可缺少的一種氣體,而細胞使用氧氣時會產生副產品,以高能氧氣分子形式存在的廢棄物質即為自由基。自由基會對人體組織和細胞結構造成損害,我們把這種損害稱為氧化應激,人體在利用氧氣過程中會加重自身的壓力。活性氧(ROS)是含有氧的化學活性分子,ROS是需氧細胞在代謝過程中產生

    熒光染料-CFSE活細胞標記的特點

    熒光染料CFSE(CFDA-SE),是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料,可以標記活體細胞。其基本原理如下:CFSE能夠輕易穿透細胞膜,在活細胞內與胞內蛋白共價結合,水解后釋放出綠色熒光。在細胞分裂增殖過程中,它的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減,標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,因此其熒光強

    熒光染料-CFSE活細胞標記的特點

    熒光染料CFSE(CFDA-SE),是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料,可以標記活體細胞。其基本原理如下:CFSE能夠輕易穿透細胞膜,在活細胞內與胞內蛋白共價結合,水解后釋放出綠色熒光。在細胞分裂增殖過程中,它的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減,標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,因此其熒光強

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