活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（四）
熒光顯微鏡在研究活細胞中蛋白質分子的定位、相互作用及動力學等生命活動中起著不可或缺的作用。將熒光蛋白如綠色熒光蛋白和目的蛋白融合表達，然后利用熒光蛋白發出的特異性熒光來觀察和追蹤目的蛋白分子在科學研究中得到了廣泛的應用。但是熒光蛋白具有量子產量低、成熟速度受限、光譜容易受到環境因素影響及容易形成聚集體等缺點，這些在一些特殊的顯微熒光成像中會造成假象而影響最終的實驗結果。因此，科學家們也開始尋找、發明越來越合適的活細胞標記方法，以配合越來越精準的顯微成像（如超高分辨率等）技術來更加真實的觀察、記錄各種微觀生命活動。本文中重點介紹了SNAP-tag和SiR等新型標記方法和染料的特征及應用。SNAP-tag技術簡介圖1. SNAP-tag標記示意圖。該標記方法具有特異性高、速度快、穩定性高及熒光探針選擇靈活多樣等優點如何才能將活細胞中的目的蛋白標記上特異的熒光信號呢？談到特異性，科學家們首先考慮到的是酶和底物的相互作用。因此，從酶促反......閱讀全文
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（四）
熒光顯微鏡在研究活細胞中蛋白質分子的定位、相互作用及動力學等生命活動中起著不可或缺的作用。將熒光蛋白如綠色熒光蛋白和目的蛋白融合表達，然后利用熒光蛋白發出的特異性熒光來觀察和追蹤目的蛋白分子在科學研究中得到了廣泛的應用。但是熒光蛋白具有量子產量低、成熟速度受限、光譜容易受到環境因素影響及容易形成聚集
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（一）
如何免除活細胞標記中的清洗（washout）步驟？SNAP-tag等標記方法為活細胞顯微成像帶來了革命性的變化，也因此被Nature雜志評為2004年最熱門的科研技術之一。但是傳統的SNAP-tag標記仍然有很大的缺陷。將帶有熒光探針的底物BG加入細胞后需要多次清洗細胞，才能將未結合的BG去除從而消
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（三）
細胞骨架如微管、微絲等一直是生命科學研究的重點。近期Johnsson等科學家將SiR直接標記于與微管和微絲分別特異性結合的小分子docetaxel和jasplakinolide，即形成SiR-tubulin和SiR-actin，實現了在不對細胞或組織進行任何轉染或基因組修飾的條件下直接進行活細胞成像
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（二）
圖5.EGFR在細胞中轉運的實時記錄。（a）示意圖，用于解釋如何利用FAPL探針來實時追蹤EGFR相關的細胞膜轉運過程。（b）COS7細胞中表達的EGFR用DRBG-488標記（綠色），溶酶體用lysosometracker（紅色）標記。（c）對表達SNAP-EGFR–CFP的MDCK細胞進行共聚焦
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（五）
SNAP-tag技術在STED超高分辨率顯微成像中的應用近十年中，顯微成像技術得到了飛躍的發展，填補光學顯微鏡（~200 nm）到電子顯微鏡（~0.1 nm）分辨率缺口，打破光學衍射極限的超高分辨率顯微鏡也越來越趨于成熟化。其中，德國馬普研究所的Stefan Hell教授憑借其研發的受激發射
活細胞成像要求在成像過程中的知識
活細胞成像要求在成像過程中始終保持鏡臺上細胞的存活.應注愈使用zui小強度的激光，因為激光束造成的光損傷在多次掃描時可以錄加起來。抗氧化劑（如維生素C）加人培養液可減少來自激發的熒光分子產生的權.因為級可引起自由基形成并殺死細胞。對于一些熒光標記實驗.需評價光基礴對標本的影響.一般應進行成像后組織活
活細胞成像系統在實際應用上有哪些功能？
活細胞成像系統是用于活細胞長時間、高清晰度、高靈敏度成像的設備。當用活細胞染料標記細胞內特定生物大分子，或者使用熒光蛋白標記體內特定蛋白時，使用該熒光染料或者熒光分子特定的激發光線激發，通過探測其特用的發射光線即可探測到該生物大分子。活細胞成像系統一方面控制細胞生存的外部環境，提供合適的溫度、適度
LED光源在熒光顯微成像中的應用簡述（一）
熒光顯微鏡中的LED光源具有便利與綠色環保的優點。這些LED能夠保持研究成分的有效性，特別是對成像和敏感樣品的保存。LED技術在我們的生活中發揮越來越重要的作用。在過去的50年里，該技術的應用已從簡單的電子產品指示燈擴展到替代白熾燈以節約大量能源。LED具有高強度、使用壽命長、可控制性及光譜輸出穩定
LED光源在熒光顯微成像中的應用簡述（二）
目前可以使用的LED芯片的功率與100W汞燈泡中等離子弧產生的輻射相差甚遠。燈泡能夠發射極寬譜段范圍的能量，但在給定的約20nm的譜段范圍內，LED更有優勢甚至超過了汞燈泡在360nm至800nm的大部分區域。LED的過度使用在熒光應用領域非常常見，這使熱量管理變得極為重要。冷卻技術包括珀爾帖（Pe
熒光標記基團的選擇及其在熒光定量PCR中的應用
PCR實驗室產品選擇指南 熒光 ?基團是吸收一定波長的光子后發射特定波長的光波，可以作為抗體等分子的標記物，實時熒光定量PCR中的Taqman探針常用熒光基團FAM標記熒光基團和TAMRA標記。 熒光基團 吸收特定波長的光子后熒光染料(通常稱為“熒光基團”或簡稱為“熒光素”)的化