實驗原理在細胞核中,DNA是環狀附著在核基質上,細胞裂解過程中,核基質被溶解、抽提,DNA的結構則未發生變化。如果DNA鏈上存在缺口,則使DNA超螺旋變的松弛,DNA環向外展,同時由于暴露了陰電荷,在電場力的作用下,松動的DNA環向陽極遷移,但是由于這種松動的DNA環一端仍附著于核DNA,其遷移距離受到限制,因此尾長并不總是真實反映鏈缺口的多少。實際應當依靠尾長與尾部的熒光強度同時來進行分析。實驗步驟 1. 分離制備單細胞懸液: 1) 體外培養的細胞株:用胰酶消化,吹打成單細胞懸液; 2) 體內臟器細胞:處死動物,取出臟器,于Hanks’液中制備成單個細胞懸液。2. 膠板制備: 1) 取20~50μl于56℃水浴中保溫的0.5%普通熔點瓊脂糖,鋪于磨沙載玻片上,形成底膠。 2) 取100~150μl 0.5%普通熔點瓊脂糖加在底膠上,......閱讀全文
近日,MarketsandMarkets咨詢公司發布了全球western blotting市場的分析報告。據MarketsandMarkets預測,全球western blotting的市場規模將從2016年的5.75億美元增長到2021年的7.31億美元,復合年均增長率達4.9%。另一家Futur
實驗概要本實驗介紹了單細胞凝膠電泳標準操作流程。實驗原理在細胞核中,DNA是環狀附著在核基質上,細胞裂解過程中,核基質被溶解、抽提,DNA的結構則未發生變化。如果DNA鏈上存在缺口,則使DNA超螺旋變的松弛,DNA環向外展,同時由于暴露了陰電荷,在電場力的作用下,松動的DNA環向陽極遷移,但是由于這
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
1 概述 毛細管電泳又稱高效毛細管電泳,包括電泳、色譜及其交叉內容,是一類以毛細管為分離通道,以高壓直流電場為驅動力,以樣品的多種特性為根據的液相微分離分析技術。CE 是分析科學中繼高效液相色譜之后的又一重大進展,它使分析科學從微升水平進入納升水平,并使單細胞分析乃至單分子分析成為可能。198
關于包涵體的純化是一個令人頭疼的問題,包涵體的復性已經成為生物制藥的瓶頸,關于包涵體的處理一般包括這么幾步:菌體的破碎、包涵體的洗滌、溶解、復性以及純化,內容比較龐雜 一、菌體的裂解 1、怎樣裂解細菌? 細胞的破碎方法 1.高速組織搗碎
毛細管電泳(capillary electrophoresis,CE)又稱高效毛細管電泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE),是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅動力的新型液相分離技術。毛細管電泳實際上包含電泳、色譜及其交叉內
一、基于分子雜交的分子診斷技術 上世紀60年代至80年代是分子雜交技術發展最為迅猛的20年,由于當時尚無法對樣本中靶基因進行人為擴增,人們只能通過已知基因序列的探針對靶序列進行捕獲檢測。其中液相和固相雜交基礎理論、探針固定包被技術與cDNA探針人工合成的出現,為基于分子雜交的體外診斷方法進行了
單細胞凝膠電泳(SCGE)又稱“彗星”法,是一種操作簡便、快速、敏感性高的DNA損傷與修復的檢測技術。盡管此法無需復雜的實驗條件,但在建立過程中可能受諸多因素的影響而難以得到較理想的結果,我們就其主要的影響因素作如下分析。1.瓊脂糖凝膠薄板的制備:該實驗需要制備兩層瓊脂糖凝膠薄板,應注意瓊脂糖的濃度
彗星實驗,又稱單細胞凝膠電泳實驗,是用來檢測幾乎所有有核細胞中 D N A 損傷的方法。彗星實驗與其他遺傳毒性檢測實驗相比有明顯優勢,但是由于它對實驗中的細微變化非常敏感,可導致結果變化較大。本章的目的在于提供環境毒性實驗中與堿性彗星實驗相關的背景信息和詳細的標準化操作流程。我們將闡述彗星實驗相關缺
實驗概要本實驗詳細介紹了顯微注射法建立轉基因小鼠模型的操作流程。實驗原理轉基因小鼠制備的基本原理是將改建后的目的基因(或基因組片段)用顯微注射法注入供體小鼠的受精卵(或著床前胚胎細胞),然后將此受精卵(或著床前胚胎細胞)再植入受體動物的輸卵管(或子宮)中,使其發育成攜帶有外源基因的轉基因動物,通過分
要談測序,首先要向華人生物學家、DNA測序技術的奠基人吳瑞先生致敬。大家大多都聽過桑格,但很少有人知道吳瑞。其實吳瑞早在1968年就發表第一篇論文測定了DNA的堿基組成,1970年的新文章既測定DNA堿基組成又測定出順序,是真正的DNA測序第一人。而在吳瑞先生工作的啟發下,Sanger深入研究,
基于分子構象的分子診斷技術 (一)變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)與單鏈構象多態性(single strand conformation polymorphism,SSCP) 1970~1980年間,Fischer等
近10年來,現代分子生物學技術越來越廣泛地被用于人類疾病研究的諸領域,為了解病理狀態下基因組DNA的變化積累了新資料。目前認為,人類基因組并非人們想像的那樣穩定,諸如基因重排、擴增、缺失,突變和DNA甲基化類型改變等時有發生,這些改變對于基因表達和調控,以及疾病過程的發展與轉歸等方面均具有重要意義。
進化遺傳學具有兩個并列的研究方向:系統發育的重建和種群分析。自1962年, Zuckerkandl和Pauling提出蛋白質序列和基因序列的比較可以象分子種一樣用于標志 現存物種分化的時間以來,各種生化方法被用于系統發育的研究。在最初二十年內, 同功酶的電泳分析、免疫學比較和蛋白質序列分析被廣泛地應