培養神經元原位雜交技術實驗
實驗方法原理 流程圖實驗材料 溶液和緩沖液原位雜交試劑、試劑盒 RNA 聚合酶地高辛-UTP 標記混合物實驗步驟 一、制備地高辛標記的探針將 cDNAs 克隆入 pBluescript 載體中。為了能在體外轉錄，質粒需經線性化或 PCR 然后根據插入 cDNA 的方向應用 T3 或 T7RNA 聚合酶合成反義 RNA 探針。體外轉錄之后，DNA 模板用 DNA 酶 I(無 RNA 酶）降解，cDNA 水解成大約 200 個核苷酸的片段。質粒的線性化：用合適的限制性內切酶在緊鄰插入序列終止密碼子的下游位點切開質粒。然后通過苯酚抽提，乙醇沉淀的方法純化 DNA。PCR 擴增插入序列：根據 pBluescript 中 T3 和 T7RNA 聚合酶啟動子的側翼序列設計引物，經 PCR 擴增 cDNA，然后經凝膠電泳提純 DNA。(這些技術的詳細介紹可參見 Maniatisetal.1982)探針制備1.下列物質加入滅菌微量離......閱讀全文
培養神經元原位雜交技術實驗
原位雜交（inhybridization,ISH) 的目的是在細胞結構內顯 TKmRNA 分子。在 ISH 步驟中要采用高溫，這就對細胞的固定有特殊要求。如果原位雜交方法不能提供陽性的雜交信號，還可以應用其他的技術，如通過 mRNA 擴增來檢測神經突起微小區域內的低豐度 mRNA 的存在（Miyas
培養神經元原位雜交技術實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 流程圖 實驗材料 溶液和緩沖液 原位雜交
培養神經元原位雜交技術實驗
實驗方法原理 流程圖實驗材料 溶液和緩沖液原位雜交試劑、試劑盒 RNA 聚合酶地高辛-UTP 標記混合物實驗步驟 一、制備地高辛標記的探針將 cDNAs 克隆入 pBluescript 載體中。為了能在體外轉錄，質粒需經線性化或 PCR 然后根據插入 cDNA 的方向應用 T3 或 T7RN
培養單神經元的光學記錄技術實驗1
實驗方法原理進行單神經元光學記錄的重要步驟可分為三個部分：儀器的設計和安裝；實驗的設計和實施；信號的分析和顯示。下文將詳述實驗的設計和實施，信號的分析和顯示兩個部分。實驗材料細胞溶液試劑、試劑盒光指示劑儀器、耗材光學記錄系統輔助電生理設備數據采集系統實驗步驟這一部分著重討論一些對成功記錄光學十分重要
培養單神經元的光學記錄技術實驗2
五、信號處理方法即使選用最好的指示劑和最佳的儀器，有些光學信號仍然很弱，伴有或只有噪聲。另一方面，所用探測器的靈敏度可能很差，或所測生理指標性質上為量子性信號。無論怎樣，都要格外注意從背景噪聲中提取出所需要的信號。噪聲可能包括：系統噪聲和隨機噪聲。在某些情況下，系統噪聲能被檢測出來，進而能用減法或除
熒光原位雜交實驗——熒光原位雜交技術
熒光原位雜交可應用于：（1）動植物基因組結構研究；（2）染色體精細結構變異分析；（3）病毒感染分析；（4）腫瘤遺傳學和基因組進化研究。實驗方法原理用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱
電鏡原位雜交技術實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 從理論上講，前包埋原位雜交技術的敏感性高于后包埋原位雜交技術，因為前者可觀察到來自整個切片厚度的信號。但是，探針并不一定能穿透整個切片厚度，特別是用較長的探針。為了增加穿透性，經常應用凍融法或者蛋白酶和去污劑處理，而這樣做會導致
電鏡原位雜交技術實驗
電鏡原位雜交實驗可以用于：（1）研究特定核苷酸序列的亞細胞定位；（2）許多研究者已經從光學顯微觀察擴展到對超微結構的觀察。（3）特別是利用地高辛或生物素作為報告分子的非放射性探針，不必像放射性探針那樣需要長時間暴露，因此整個過程可以在 24 h 內完成。實驗方法原理從理論上講，前包埋原位雜交技術的敏
電鏡原位雜交技術實驗
實驗方法原理?從理論上講，前包埋原位雜交技術的敏感性高于后包埋原位雜交技術，因為前者可觀察到來自整個切片厚度的信號。但是，探針并不一定能穿透整個切片厚度，特別是用較長的探針。為了增加穿透性，經常應用凍融法或者蛋白酶和去污劑處理，而這樣做會導致一些胞內成分如核糖體的丟失，嚴重時會造成超微結構的形態改變
熒光原位雜交技術實驗心得
熒光原位雜交技術（ fluorescence in situ Hybridization,FISH）是一種非放射性原位雜交方法，用特殊的熒光素標記核酸探針，在細胞或組織切片標本上進行雜交，以檢測細胞內 DNA 或 RNA 特定序列存在與否。FISH 實驗操作與用非熒光標記探針的原位雜交基本相似。在組
大鼠神經元細胞分離培養實驗_解離神經元培養物的制備
實驗材料母鼠試劑、試劑盒BSS儀器、耗材無菌器械顯微鏡實驗步驟1. 殺死懷孕 18 天母鼠（常用過量 CO2?使其窒息），用無菌器械取出胚胎，放在無菌的培養皿中。2. 取下胚胎的頭，放在盛有 4 ml 不含 Ca2+ 和 Mg2+ 的平衡鹽溶液（BSS）的培養皿中。3. 從頭顱骨上取下腦，放在 35
細胞技術專題：大鼠大腦皮層神經元細胞培養實驗
大鼠大腦皮層神經元細胞培養可以：（1）獲得大鼠大腦皮層神經元細胞；（2）用于神經元細胞定向分化研究；（3）用于神經元細胞凋亡研究。實驗方法機械性劃割培養 酶消化法 實驗方法原理SD胎鼠腦皮層神經元體外培養7 d，微量移液器塑料滴頭于培養孔內機械性劃割培養之神經元，依劃割程度不同分為輕、中、重
大鼠神經元細胞分離和培養實驗_培養神經元支持物制備
試劑、試劑盒濃硝酸儀器、耗材玻璃蓋玻片層流柜實驗步驟一、蓋玻片的預處理1. 玻璃蓋玻片放在瓷染色架上，用蒸餾水沖洗。2. 架子放在玻璃容器中，濃硝酸泡 48 小時。3. MilliQ 水漂洗蓋玻片 1 小時，重復 3 次。4. 200℃ 烤 8 小時滅菌蓋玻片。5. 在層流柜中將蓋玻片放在 60 m
DNA實驗技術：原位雜交實驗要求及步驟1
原位雜交組織（或細胞）化學 （In situ Hybridization Histochemistry，ISHH） 簡稱原位雜交（In Situ Hybridization），屬于固相分子雜交的范疇，它是用標記的DNA或RNA為探針，在原位檢測組織細胞內特定核酸序列的方法。根據所用探針和靶核酸的不同
DNA實驗技術：原位雜交實驗要求及步驟2
三、操作步驟（一）取材、冰凍切片：將動物以3%戊巴比妥鈉麻醉，打開胸腔，暴露心臟，刺破右心耳，將針尖刺入左心室用生理鹽水灌注（灌注量約為動物體重的2倍），再注入等量的4%多聚甲醛。（見圖2-7）。取材，置于4%多聚甲醛中后固定4hr。以0.1M PBS浸泡沖洗4-5次（換液：1次/hr）。將組織塊入
小腦顆粒神經元的原代培養實驗
基本方案實驗方法原理小腦顆粒神經元的體外培養受取材部位、特殊培養條件等因素的影響，易于獲得純度較高的培養物。該細胞為雙極突起，常用來研究神經突起的生長。其培養條件具有高濃度鉀離子依賴特性，常用來作為誘導神經元凋亡的研究模型。當成熟顆粒神經元的培養液由高KCl(通常是25-30mmol/L)換為低KC
小腦顆粒神經元的原代培養實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 小腦顆粒神經元的體外培養受取材部位、特殊培養條件等因素的影響，易于獲得純度較高的培養物。該細胞為雙極突起，常用來研究神經突起的生長。其
大鼠神經元細胞的分離和培養實驗
解離神經元培養物的制備 培養神經元的支持物的制備 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 母鼠
皮層／海馬神經元的原代培養實驗
實驗方法原理神經元在發育過程中早于膠質細胞，因此通常選擇胎鼠做腦內神經元培養。一般取El7-l8d孕大鼠或El4-16d孕小鼠做神經元培養。新生1d的仔鼠也可以用來培養神經元，但培養成功后雜細胞較多，有時需要進一步純化。這兩個部位的細胞培養方法類似實驗材料El7-18d孕大鼠或E14-16d孕小鼠新
小腦顆粒神經元的原代培養實驗
實驗方法原理小腦顆粒神經元的體外培養受取材部位、特殊培養條件等因素的影響，易于獲得純度較高的培養物。該細胞為雙極突起，常用來研究神經突起的生長。其培養條件具有高濃度鉀離子依賴特性，常用來作為誘導神經元凋亡的研究模型。當成熟顆粒神經元的培養液由高KCl(通常是25-30mmol/L)換為低KC!(基本
大鼠神經元細胞的分離和培養實驗
實驗材料?母鼠試劑、試劑盒?BSS儀器、耗材?無菌器械顯微鏡實驗步驟 1. 殺死懷孕 18 天母鼠（常用過量 CO2 使其窒息），用無菌器械取出胚胎，放在無菌的培養皿中。2. 取下胚胎的頭，放在盛有 4 ml 不含 Ca2+ 和 Mg2+ 的平衡鹽溶液（BSS）的培養皿中。3. 從頭顱骨上取下腦，放
大鼠神經元細胞的分離和培養實驗
解離神經元培養物的制備 培養神經元的支持物的制備 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 母鼠
皮層／海馬神經元的原代培養實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 神經元在發育過程中早于膠質細胞，因此通常選擇胎鼠做腦內神經元培養。一般取El7-l8d孕大鼠或El4-16d孕小鼠做神經元培養。新生1
原位雜交技術
導語我們常說，科學家也是藝術家，在明確真理探索科學的道路上，往往會創造出很多極具美感的藝術作品。所以今天小編為大家介紹的就是能做出美美圖的新技能。先欣賞一下美美的實驗結果圖~---Olson, B. D. and Downes, G. B.?---in situ Hybridization of w
原代神經元培養
Protocol for the Primary Culture of Cortical and Hippocampal neurons?Solutions and media required:Poly D-lysine/laminin solution?-?pdfDM/KY?-?pdfOptim
原位雜交儀—原位雜交實驗（三）
原位雜交第三天 1） 用1ml含10%熱滅活血清的MABT溶液置換抗體溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，最后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。 2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置
原位雜交儀—原位雜交實驗（二）
原位雜交第二天 1. 1）將探針回收，放于－20C保存（通常探針可重復使用十次左右）。 2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復一次。 3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。 4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。
原位雜交實驗儀的技術參數
技術參數： 控溫范圍：室溫+5℃~100℃ 溫度設置范圍：0℃~100℃ 時間設置：1min~99h59min 控溫精度：≤±1℃ 溫度均勻性：≤±1℃ 加熱時間：≤2分鐘（37℃升溫到95℃） 降溫時間：≤6分鐘（95℃降溫到45℃） 樣本容量：12片 輸入功率：350W
原位雜交組織化學實驗技術1
第一節 原位雜交組織化學概述 一、核酸分子雜交技術 1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質
原位雜交組織化學實驗技術6
二、快速原位雜交細胞化學技術 原位雜交免疫細胞化學技術存在的難點之一是實驗手續繁瑣，實驗周期長。國外Liesi等（1986）和國內學者何彬等應用光敏生物素-鏈親合素（Biotin-streptavidin）膠體金系統進行原位雜交，得到了快速滿意的結果，全部實驗可在數小時內完成。 作用把含某種多肽