DNA片段探針的應用實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 雜交液洗膜液儀器、耗材 注射器超聲儀水浴鍋實驗步驟 1. 用5~20 ml 雜交液Ⅰ依次浸泡10~20張硝酸纖維素濾膜。濾膜裝入雜交袋中，加入足夠的雜交液，密封后42℃預雜交1 h。 2. 往帶螺蓋的試管中，加入放射性探針和2 mg 超聲波處理的鯡魚精DNA，煮沸10 min。3. 探針混合液移至冰浴，加入2 ml 雜交液Ⅰ 。4. 用帶18-G針頭的注射器將探針混合液加入到雜交袋中濾膜上，重新密封后于42℃溫育過夜。5. 用約500 ml 低嚴緊性洗膜液Ⅰ于室溫洗滌濾膜3次，每次10~15 min。 6. 再用約500 ml 高嚴緊性雜交液Ⅰ（預熱到洗滌溫度）洗滌濾膜2次，每次15~20 min。7. 用塑料保鮮膜將濕潤的濾膜包裹好，或讓它貼在一塑料板上干燥后進行放射自顯影。......閱讀全文
DNA片段探針的應用實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 雜交液洗膜液儀器、耗材 注射器超聲儀水浴鍋實驗步驟 1. ?用5~20 ml 雜交液Ⅰ依次浸泡10~20張硝酸纖維素濾膜。濾膜裝入雜交袋中，加入足夠的雜交液，密封后42℃預雜交1 h。?2. ?往帶螺蓋的試管中，加入放射性探針和2 mg 超聲波處理的鯡魚精DNA，煮沸1
DNA片段探針的應用實驗
甲酰胺法 水溶液中雜交 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
DNA片段探針的應用實驗——甲酰胺法
所謂探針，一般是指用來檢測某一特定核苷酸序列或基因序列的DNA片段或RNA片段。但要使探針DNA片段能實際應用，必須使DNA或RNA分子帶上可識別的信號標志，以便跟蹤觀察探針與其同源的核苷酸序列發生雜交反應的位置，被探測DNA或RNA片段上的大小、雜交信號的強弱等。目前應用最多的是核素標記方法或非核
DNA片段探針的應用實驗——水溶液中雜交
實驗材料DNA試劑、試劑盒雜交液洗膜液儀器、耗材培養箱實驗步驟1. ?除了于65℃在雜交液Ⅰ中溫育的條件外，預雜交按甲酰胺法進行。?2. ?按甲酰胺法制備探針并用2 ml 雜交液Ⅰ稀釋。3. ?濾膜在65℃雜交過夜，然后移去雜交液，用低嚴緊性洗膜液Ⅰ洗膜2次。4. ?用高嚴緊性洗膜液Ⅰ在65℃迅速洗
DNA片段的回收實驗
實驗方法原理 本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法回收的片段可有效的用于重組載體構建。通過15分鐘的純化過程，PCR產物即能被有效地從含引物二聚體、非特異性擴增引物片斷等混合物中分離出來，成為高度無鹽的、不含其他大分子成分的純化片斷。在較寬的分子量范圍內有較高的回收
DNA片段的回收實驗
樹脂回收法 微量柱法 液氮凍融法 常規方法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法
DNA片段的亞克隆實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 CIPdNTPDNA聚合酶T4聚合酶DTTATP儀器、耗材 水浴鍋電泳儀培養箱實驗步驟 1. ?在20 μl 反應體積內用合適的酶完全消化DNA。75℃加熱15 min，滅活酶。如若無需進一步的酶促處理，接歩驟6。2. ?如果5’磷酸需要去除，加入2 μl 10×CIP
DNA片段的亞克隆實驗
基本方案 凝膠塊中DNA連接 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
DNA片段的回收實驗——常規方法
實驗材料NA片段試劑、試劑盒純化試劑盒異丙醇儀器、耗材離心機電泳儀電泳槽取液器微量真空裝置抽濾裝置實驗步驟1. ?PAGE電泳，如EB染色的則在紫外燈下切下目的片斷，如齦染或其他非放染色的則在關下切下目的片斷。2. ?用少量脫緩沖液I將目的片斷膠條洗至一Eppendorf管中，用玻棒將凝膠搗碎，用1
關于DNA探針的應用介紹
DNA探針可以用來診斷寄生蟲病，現場調查及蟲種鑒定，可用于病毒性肝炎的診斷，遺傳性疾病的診斷，可用于檢測飲用水病毒含量。具體方法：用一個特定的DNA片段制成探針，與被測的病毒DNA雜交，從而把病毒檢測出來。與傳統方法相比具有快速、靈敏的特點。傳統的檢測一次，需幾天或幾個星期的時間，精確度不高，而
DNA探針的標記實驗
實驗方法原理?分子雜交是核酸鏈以堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。放射性同位素標記是最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法。
DNA探針的標記實驗
探針標記法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 分子雜交是核酸鏈以堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一
DNA探針的標記實驗
核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類；根據是否存在互補鏈，可分為單鏈和雙鏈探針；根據放射性標記物摻入情況，可分為均勻
DNA片段的回收實驗——樹脂回收法
目的DNA片段的回收技術是重組DNA中的關鍵技術，回收是指從電泳介質中純化出目的片斷。實驗方法原理本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法回收的片段可有效的用于重組載體構建。通過15分鐘的純化過程，PCR產物即能被有效地從含引物二聚體、非特異性擴增引物片斷等混合物中分離
DNA片段的回收實驗——微量柱法
實驗材料DNA片段試劑、試劑盒純化試劑盒異丙醇儀器、耗材離心機電泳儀電泳槽取液器微量真空裝置抽濾裝置實驗步驟1. ?紫外燈下從膠上切下目的片段，放入一Epphendof管中。2. ?離心管在－20℃冷卻5~10分鐘。3. ?將微量柱下套上一Epphendof管，將冷卻的膠條裝進微量柱中，4℃12 0
DNA探針的概念和應用特點
DNA探針（DNA probe）是最常用的核酸探針，為長度在幾十到幾百甚至上千堿基對的單鏈或雙鏈DNA，用特殊示蹤劑（如同位素、酶或有色基團）進行標記；在適當的pH值、溫度和離子強度下，DNA探針利用分子的變性、復性以及堿基互補配對的高度精確性，能與待測樣本中互補的非標記單鏈DNA或RNA以氫鍵結合
DNA片段的亞克隆實驗——凝膠塊中DNA連接
實驗材料DNA試劑、試劑盒TAE瓊脂糖儀器、耗材電泳儀離心機實驗步驟1. ?重復基本方案中的步驟1~5。?2. ?在高質量的低融點膠中分離久DNA（0.7%，TAE緩沖液），切下體積盡可能小的所需DNA條帶（20~50 μl ）至小離心管中。3. ?在70℃融化低融點膠10 min 以上，每個連接反
DNA片段的回收實驗——液氮凍融法
實驗材料DNA片段試劑、試劑盒純化試劑盒異丙醇儀器、耗材離心機電泳儀電泳槽取液器微量真空裝置抽濾裝置實驗步驟1. ?紫外燈下從膠上切下目的片段，放入一Epphendof管中。2. ?離心1 min，加入500 ul TE，200 ul 酚/氯仿混勻。3. ?離心管放入液氮中10~15 min，再室溫
DNA片段的亞克隆實驗——基本方案
所謂亞克隆就是對已經獲得的目的DNA片段進行重新克隆，其目的在于對目的DNA進行進一步分析，或者進行重組改造等。亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。實驗材料DNA試劑、試劑盒CIPdNTPDNA聚合酶T4聚
高地辛標記的DNA探針制備實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 dTTPdUTPEDTASDS儀器、耗材 水浴鍋培養箱實驗步驟 1. ?建立一個標準100 μl 反應體系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液，DNA酶Ⅰ酶量不變，15℃溫育2 h。2. ?取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。3. ?繼續反應直
DNA－酶－I－足跡探針的制備實驗
試劑、試劑盒 TE牛腸堿性磷酸酶緩沖液 T4 多核苷酸激酶緩沖液TBE 加樣緩沖液TBE質粒 DNA合適的限制酶粉 氯仿氯仿 異戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛腸堿性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸銨 乙酸鈉丙烯酰胺雙丙烯酰胺過硫酸銨TEMED儀器、耗材 SpeedVac 旋轉濃縮器
DNA－酶－I－足跡探針的制備實驗
試劑、試劑盒TE牛腸堿性磷酸酶緩沖液T4 多核苷酸激酶緩沖液TBE 加樣緩沖液TBE質粒 DNA合適的限制酶粉 氯仿氯仿 異戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛腸堿性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸銨乙酸鈉丙烯酰胺雙丙烯酰胺過硫酸銨TEMED儀器、耗材SpeedVac 旋轉濃縮器實驗步驟
高地辛標記的DNA探針制備實驗
基本方法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
DNA－酶－I－足跡探針的制備實驗
DNA 酶 I 足跡探針的制備實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 TE 牛腸堿性磷酸酶緩沖液 T4 多核苷
DNA片段的連接技術
一、目的與原理DNA酶切片段的聯接是兩DNA片段相鄰的5‘磷酸和3’羥基間可有連接酶催化形成磷酸二酯鍵，這個連接反應在體外一般都有大腸桿菌DNA連接酶和T4DNA連接酶催化，但是分子生物學試驗中主要采用T4DNA連接酶，因該酶在正常條件下，即能完成連接反應。本實驗擬通過T4DNA連接酶對酶切片斷的連
DNA片段的制備方法
常用以下方法獲得DNA片段：①用限制性核酸內切酶將高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超聲波)取得DNA隨機片段；③在已知蛋白質的氨基酸順序情況下，用人工方法合成對應的基因片段；④從mRNA反轉錄產生cDNA。
分子雜交基因所用DNA探針應用介紹
DNA探針是最常用的核酸探針，指長度在幾百堿基對以上的雙鏈DNA或單鏈DNA探針。現已獲得DNA探針數量很多，有細菌、病毒、原蟲、真菌、動物和人類細胞DNA探針。這類探針多為某一基因的全部或部分序列，或某一非編碼序列。這些DNA片段須是特異的，如細菌的毒力因子基因探針和人類Alu探針。這些DNA探針
微生物檢測應用DNA探針法
在許多病原微生物的檢測上,常用的分離培養方法需要的時間較長,手續也較繁雜,而且病灶和糞便等病料含雜菌較多,阻礙病原微生物的檢出,不能快速做出診斷。免疫學方法也有許多不足之處,尤其是在持續性感染和感染潛伏期抗體尚未產生或不易檢測出抗體的情況下,即使有抗體存在也難以判斷。而應用核酸探針技術,就可以直接確
外源DNA片段在質粒載體中的克隆實驗
NA重組技術包括載體及外源DNA片段的酶切消化、目的片段的獲得及純化、目的片段與克隆載體的體外連接、重組子的篩選和鑒定等內容。主要用于（1）外源性基因轉染；（2）對外源性基因的轉化分離。實驗方法原理限制性內切酶可識別特定位點并切割DNA產生粘性末端或平端的外源片段，經DNA的純化處理后用于連接反應；
外源DNA片段在質粒載體中的克隆實驗
克隆法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 限制性內切酶可識別特定位點并切割DNA產生粘性末端或平端的外源片段，經DNA的純化處理后用于連接反應；選擇克隆載體pUC18多克隆位點上