GFP和熒光共振能量轉移技術測定蛋白質相互作用實驗2
16. 標記反應以后，采用下述公式計算標記率： Aλ X M / [ ( A280-? X Aλ ) X ελ ]式中 Aλ是染料在其最大吸收波長λ處的吸收度，A280 是蛋白質在 280nm 的吸收度，M 是以 kDa 為單位的蛋白質分子質量，ελ是染料在波長 λ 處的摩爾消光系數，以 L?mmol-1?cm-1 為單位。公式以染料在 280nm 處的吸收進行校正。系數?是染料在 280nm 和最大可見吸收波校λ的吸收度比值。例如，Cy3 標記抗體的標記率公式就變為： &nbs......閱讀全文
GFP 和熒光共振能量轉移技術測定蛋白質相互作用實驗 2
16. 標記反應以后，采用下述公式計算標記率：? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?Aλ X M / [ ( A280-? X Aλ ) X ελ ]式中 Aλ是染料在其最大吸收波長λ處的吸收度，A280 是蛋白質在 280nm 的吸收度，M 是以
GFP 和熒光共振能量轉移技術測定蛋白質相互作用實驗
我們將方案分成三個階段: 第一階段介紹蛋白質的制備及蛋白質的熒光染料標記；第二階段，通過轉染或微注射將適當的探針成分導入細胞；第三階段，圖像的收集和分析過程。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料進行轉染的細胞株按第二階段所介紹的方法制備
GFP 和熒光共振能量轉移技術測定蛋白質相互作用實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 進行轉染的細胞株 按第二階段所介紹的方法制備表達了蛋白質探針的細胞 試劑、試劑盒 N-二羥乙基甘氨酸
GFP 和熒光共振能量轉移技術測定蛋白質相互作用實驗 1
實驗材料 進行轉染的細胞株按第二階段所介紹的方法制備表達了蛋白質探針的細胞試劑、試劑盒 N-二羥乙基甘氨酸消化緩沖液NN-二甲基甲酰胺磷酸鈉磷酸鹽緩沖溶液TE木瓜蛋白酶Cy3 和 Cy5 OSu 單功能硫代吲哚花菁琥珀酰亞胺酯抗體SDS-聚丙烯酰胺凝膠明膠溶液聚-L-賴氨酸質粒 DNAGFP 融合載
何為熒光共振能量轉移技術
一、FRET技術基本原理熒光共振能量轉移是指兩個熒光發色基團在足夠靠近時，當供體分子吸收一定頻率的光子后被激發到更高的電子能態，在該電子回到基態前，通過偶極子相互作用，實現了能量向鄰近的受體分子轉移（即發生能量共振轉移）。FRET是一種非輻射能量躍遷，通過分子間的電偶極相互作用，將供體激發態能量轉移
三色熒光級聯熒光共振能量轉移技術
熒光共振能量轉移(fluorescence resonance energytransfer，FRET)，是指能量從一種受激發的熒光基團(fluorophore)以非輻射的方式轉移到另一種熒光基團的物理現象.FRET的能量轉移效率是兩個熒光基團間距離的函數，并對此距離十分敏感，它的有效響應距離一
生物大分子相互作用檢測技術新進展
熒光共振能量轉移 (fluorescence resonance energy transfer，FRET)，是指能量從一種受激發的熒光基團 (fluorophore)以非輻射的方式轉移到另一種熒光基團的物理現象。FRET的能量轉移效率是兩個熒光基團間距離的函數，并對此距離十分敏感，它的有效
熒光共振能量轉移（FRET）
一、活細胞研究遇到的問題：蛋白質或其他分子在活細胞內互相結合的時間和地點是了解它們功能的關鍵問題。要回答這一問題，需將蛋白質標上不同的熒光團。但是，光學顯微鏡的分辨率將蛋白質檢測精度限制在大約0.2μm左右。要研究蛋白質成分的相互物理作用，需要高的分辨率。二、什么是FRET？FRET就是采用非放射方
熒光共振能量轉移發生原理
熒光共振能量轉移是指在兩個不同的熒光基團中，如果一個熒光基團（供體 Donor）的發射光譜與另一個基團（受體 Acceptor）的吸收光譜有一定的重疊，當這兩個熒光基團間的距離合適時（一般小于100?），就可觀察到熒光能量由供體向受體轉移的現象，即以前一種基團的激發波長激發時，可觀察到后一個基團發射
熒光共振能量轉移的簡介
當一個熒光分子（又稱為供體分子）的熒光光譜與另一個熒光分子（又稱為受體分子） 的激發光譜相重疊時, 供體熒光分子的激發能誘發受體分子發出熒光, 同時供體熒光分子自身的熒光強度衰減。FRET 程度與供、受體分子的空間距離緊密相關, 一般為7～10 nm 時即可發生FRET； 隨著距離延長, FRE