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實驗材料 原始細胞試劑、試劑盒 乙醇儀器、耗材 組織均化器MicroPoly(A)Pure 試劑盒實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑乙醇,100%2. 特殊設備組織均化器（可選），見二、方法步驟 4水浴，預設到 70°C3. 其他MicroPoly(A)Pure 試劑盒（Ambion)4. 細胞和組織原始細胞二、方法1. 將洗脫緩沖液預熱到 70°C。2.250 g 離心沉降細胞后移棄上清液。3. 在 PBS 中溫和重懸后離心，對細胞沉降物進行第一次洗滌。棄上清液。4. 加 250ul 裂解液。用組織均化器或通過劇烈振蕩或抽吸進行均質化。估計裂解產的體積，以作為「起始體積」。5. 加 2 倍起始體積的稀釋緩沖液。倒置或搖動 10s 進行混合。6.4°C 下 12000 g 離心 15 min。將上清液轉至一新管中。7. 向樣品中加一小瓶 oligo(dT) 纖維素。倒置混合。室溫下輕柔攪動溫育 30~60 min。8. ......閱讀全文
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
血液是唯一與所有器官都有接觸的組織，攜帶著有關機體的大量寶貴信息。在理論上，檢測血液攜帶的 DNA、RNA、囊泡和細胞殘骸可以幫助人們診斷和監控各種疾病。 產前基因篩查是血液檢測的一個重要應用，通過分析孕婦血液中的胎兒DNA來鑒定染色體異常（比如唐氏綜合癥）。此外，越來越多的研究者開始關注血液
類似方案 1、方案 2 描述了在真核表達載體上進行 cDNA 文庫構建與篩選的方法, 流程分為以下兩個階段：1. 在真核表達載體上構建 cDNA 文庫；2. 在真核表達載體上構建的 cDNA 文庫的篩選。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。實驗材料宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體
實驗材料 宿主細胞 質粒或λ噬菌體表達載體 包裝提取物 電轉化感受態大腸桿菌
實驗材料 宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體包裝提取物電轉化感受態大腸桿菌試劑、試劑盒 限制性內切核酸酶緩沖液限制性內切核酸酶通過 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文庫含適當抗生素的 Terrific 球脂平板含適當抗生素的 Terrific 肉湯培養基儀器、耗材 cDNA 合成試劑盒實驗步驟
銳賽小課堂技術篇0702-113 摘要: 腺相關病毒(AAV)是一種人細小病毒， 因為能作為一種基因治療載體而受到廣泛關注。目前大多數生成rAAV的實驗方案需要共轉染一個載體質粒和一個表達病毒復制和結構基因的包裝質粒到腺病毒(Ad)感染的培養細胞中。但是也可以通過新的輔助質粒(pH
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單
差異顯示聚合酶鏈反應（PCR) 可促進在諸多物種中與污染暴露相關的新分子標志物的鑒定。至今，已有多種差異顯示方法被詳細描述。這里，我們描述了一種改良的RNA 隨機引物觸發的 PCR 方 法（RNAarbitrarily primed PCR， RAP-PCR) , 主要涉及通過 羅 丹 明（rhod
實驗步驟 ##一、 從組織和培養細胞中分離RNA1.TRIzol試 劑（Invitrogen)。該試劑含有苯酚和硫氰酸鹽化合物，操作時應穿實驗服，戴手套，存放于 4°C 。2.氯仿。3.異丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯（DEPC) 處理的水
靶向序列捕獲和新一代測序前對石蠟包埋組織及新鮮冷凍組織進行DNA質控靶向序列捕獲和新一代測序前對福爾馬林固定石蠟包埋組織及新鮮冷凍組織進行 DNA 質量控制 作者Melissa Huang Liu安捷倫科技有限公司美國加利福尼亞州拉霍亞Maria Celeste Ramirez安捷倫科技有
SAGE(Velculescuetal.1995) 是基于 PCR 技術的一種高靈敏度研究基因表達的方法，可得到 mRNA 文庫的定性及定量信息。自 1995 年此技術產生以來，發表了大量的相關文章，表明 SAGE 可同時檢測大量基因的表達水平的變化。實驗材料玻璃及塑料器皿試劑、試劑盒溶液與緩沖液引
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
實驗材料 玻璃及塑料器皿 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液 引
實驗材料 玻璃及塑料器皿試劑、試劑盒 溶液與緩沖液引物儀器、耗材 試劑盒MPC-EPCR儀Gene PulserII 型系統實驗步驟 一、一般原則若用于 SAGE 的 RNA 有足夠的量，最好用 2.5~5 ug polyA+RNA, 可按實驗方案 A 進行。這里我們還
第一節 概 述 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工
八十年代以來由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染而引起的艾滋病(AIDS)因其嚴重的危害性而受到人們高度重視，力爭早期診斷和尋求有效治療是防止其廣泛傳播的關鍵所在.聚合酶鏈反應(PCR)具有敏感、特異和快速的特點，是檢測病毒、評價病情進展和探討發病機理的有效工具.一、HIV的基因結構 HIV的基因
分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN
microRNA的實時定量莖環RT-PCR技術 摘要： 已開發出一種新型的microRNA（miRNA）的定量方法，即利用莖環反轉錄，Taqman PCR分析。莖環RT引物在RT 效率和特異性方面比傳統的更好。TaqMan miRNA的檢測是很具體的，可以檢測成熟miRNA和區分
從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工等一系列問題。總之
##六、從組織或培養細胞提取 RNARNA可以從各種來源的樣本包括培養的細胞（例如神經元細胞、肝細胞等）和組織中分離得到（見 注 釋 1) 。 mRNA 的 純 化 對 FRAP-PCR 方法來說并不需要，因為mRNA 僅占細胞總 R N A 的 3 % ?5 % (13)。因而在本章所描述
細胞內的核酸包括DNA與RNA兩種分子，均與蛋白質結合成核蛋白（nucleoprotein）。DNA與蛋白質結合成脫氧核糖核蛋白（deoxyribonucleoprotein，DNP），RNA與蛋白質結合成核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）。其中真核生物的DNA又有染色體DNA
材料許多生物是疾病研究或探索使細胞和機體應對和存活于不同刺激下的分子適應機制的優良模型。 cDNA 文庫的構建和隨后目的基因的篩選可促使研究者發現在調節和響應某些外部特定環境壓力中有重要作用，而在其他體系中可能不表達或者不存在的新基因。確定這些新基因的可讀框，進一步分析其編碼蛋白質的功能可以開創全新
Moderna Therapeutics公司可謂野心勃勃，但是它也有相配套的巨額資金支持。這家羽翼未豐的新創公司是如何成為有史以來最有價值的私有藥物公司之一的呢？ 在兩年半前的一次早餐會上，制藥巨頭Astra-Zeneca公司新上任的首席執行官Pascal Soriot簽署了一份藥物研發協議
實驗步驟 一、材料 所有化學試劑均為分子生物學級純度。所用塑料和玻璃制品，包括瓶子和移液器吸頭均經高壓蒸氣滅菌。涉及核酸的操作均需帶手套。 1.總 RNA提取 （1）無 RNase 水。加 I mL 焦 炭 酸 二 乙
動物組織RNA的提取實驗目的：掌握由動物組織中提取總RNA的方法實驗原理：Trizol試劑是一個包含酚、異硫氰酸胍和SDS的單相酸性溶液，其在裂解細胞的同時抑制RNase的活性，隨后加入氯仿，酚會大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下層的氯仿酚溶液中，RNA
液相芯片，也稱為微球體懸浮芯片（suspension array，liquid chip），是基于xMAP（flexible Multi Analyte Profiling）技術的新型生物芯片技術平臺，它是在不同熒光編碼的微球上進行抗原 抗體、酶 底物、配體 受體的結合
液相芯片，也稱為微球體懸浮芯片（suspension array，liquid chip），是基于xMAP（flexible MultiAnalyte Profiling）技術的新型生物芯片技術平臺，它是在不同熒光編碼的微球上進行抗原抗體、酶底物、配體
第一節 概 述 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了
基因組(genome)包含的遺傳信息經轉錄產生mRNA，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的mRNA稱為轉錄子組(transcriptome)。很顯然，不同細胞在不同生理或病理狀態下轉錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經翻譯產生蛋白質，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類
基因組(genome)包含的遺傳信息經轉錄產生mRNA，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的mRNA稱為轉錄子組(transcriptome)。很顯然，不同細胞在不同生理或病理狀態下轉錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經翻譯產生蛋白質，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類