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    Azure總蛋白儀與內參的可靠性比較

    目前,多個主流期刊和免疫印跡專家提出了看家基因已經不適合作為內參使用了。因為大多數看家基因都是高豐度蛋白,其產生的信號大多都會接近線性動態范圍的上限,當我們在檢測低豐度蛋白的時候,往往蛋白的上樣量會很大,易造成信號過飽和,這時候常見的內參產生的信號已經不能正確反應上樣量的差異了。并且研究發現一些看家基因的表達并不是恒定的,它會隨著發育階段的不同等因素產生變化,所以使用看家基因的定量并不可靠。 此外,一些雜志直接提出了內參和目的蛋白要在同一張印跡膜上,甚至直接提出最好選用總蛋白進行歸一化,如果使用看家蛋白,則需要提供看家蛋白表達穩定并且不受實驗條件影響的證據。 ......閱讀全文

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      目前,多個主流期刊和免疫印跡專家提出了看家基因已經不適合作為內參使用了。因為大多數看家基因都是高豐度蛋白,其產生的信號大多都會接近線性動態范圍的上限,當我們在檢測低豐度蛋白的時候,往往蛋白的上樣量會很大,易造成信號過飽和,這時候常見的內參產生的信號已經不能正確反應上樣量的差異了。并且研究發現一

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    新時代下對于Western Blotting發表文章的新要求(三)

      在《J Proteomics》期刊雜志中2020年2月刊發了《40 years Western blotting: A scientific birthday toast》的文章綜述,其中指出Western blotting已經有40多年的歷史,仍然是現在單一蛋白常用的分析技術,但因為其數據重

    新時代下對于Western Blotting發表文章的新要求

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    新時代下對于Western Blotting發表文章的新要求(三)

    上一期我們聊了期刊雜志的新要求,總結如下:?? ?不建議跑平行膠,因為平行膠和剝離膜,孵育體系,操作條件的不一致,影響定量的準確性,因此最好內參和目的蛋白要在同一張印跡膜上。? ?選擇寬動態范圍的方法,確認信號強度與所上樣量之間的線性關系,例如用膠片做化學發光方法的動態范圍就很窄,不建議使用。? ?

    新時代下對于Western Blotting發表文章的新要求(二)

      ? 不建議跑平行膠,因為平行膠和剝離膜,孵育體系,操作條件的不一致,影響定量的準確性,因此最好內參和目的蛋白要在同一張印跡膜上。   ? 選擇寬動態范圍的方法,確認信號強度與所上樣量之間的線性關系,例如用膠片做化學發光方法的動態范圍就很窄,不建議使用。   ? 強烈推薦使用總蛋白進

    定量Western Blot指南:內參質控

      上期小編為大家介紹了以單一看家蛋白作為定量Western Blot內參蛋白的分析方法,這次咱不得不說說以全蛋白為內參的分析方法。   期刊JBC(The Journal of Biological Chemistry)在Western Blot數據要求中指出,對于半定量蛋白表達的實驗

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    熒光定量PCR(qPCR)內參的選擇對基因表達差異分析結果的...

    熒光定量PCR(qPCR)內參的選擇對基因表達差異分析結果的影響與應用實時熒光定量PCR技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。由于其精準度好、靈敏度高,在分子生物學研究和醫學研究等方面得到了廣泛的應用,尤其是在基因表達差異分析方面。基因表達差異分析一般是比較不同

    新時代下對于Western Blotting發表文章的新要求(二)

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