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在上期我們回顧了使用多重來成像磷酸化蛋白的技巧，在這部分中，我們將介紹使用Azurespot分析軟件進行定量。 背景去除 背景扣除對于有效定量是必不可少的。 例如，AzureSpot有五個自動后臺選項和三個手動選項。 > 如果背景不均勻，請使用 Rolling Ball。 類似指定半徑的圓盤在泳道輪廓下“滾動”，對信號求平均，從而產生平滑小的變化。 半徑越大，滾動越平滑。 > 如果輪廓的末端與輪廓的其余部分沒有太大差異，請使用Rubber Band。 這種方法就像在泳道輪廓下拉伸橡皮筋一樣。謹慎使用此方法，在泳道邊緣找到最低點，繪制泳道稍微不同，值就會發生變化。通常，這種計算方法很難做重復分析。 > 如果您已經執行了條帶檢測，則可以使用Valley to Valley，它使用每個條帶的邊緣來確定和減去背景。 輸入最大斜率非常重要，以避免將重疊條帶之間的邊緣識別為背景。 >......閱讀全文
背景去除背景扣除對于有效定量是必不可少的。 例如，AzureSpot有五個自動后臺選項和三個手動選項。> 如果背景不均勻，請使用 Rolling Ball。 類似指定半徑的圓盤在泳道輪廓下“滾動”，對信號求平均，從而產生平滑小的變化。 半徑
在上期我們回顧了使用多重來成像磷酸化蛋白的技巧，在這部分中，我們將介紹使用Azurespot分析軟件進行定量。 背景去除 背景扣除對于有效定量是必不可少的。 例如，AzureSpot有五個自動后臺選項和三個手動選項。 > 如果背景不均勻，請使用 Rolling Bal
非磷酸化是測該蛋白的含量，不能知道其活性狀態，抗體磷酸化是測該蛋白的磷酸化水平如何，側重于了解該蛋白的一種活性狀態。很多信號通路的蛋白在受到某些刺激后都是通過改變其磷酸化水平的改變而引起細胞的一系列反應，其蛋白含量并不見得會有多大的變化。首先要說明的就是檢測的蛋白質在你檢測的組織或者細胞中是表達的,
理論上講是不一樣的，磷酸基圖大概9.9KD左右，磷酸化后條帶按道理應該發生遷移
通常來說，磷酸化抗體芯片上檢測某一個磷酸化位點會設置一對抗體，即：磷酸化的和非磷酸化的抗體。說到區別，可能從制備講起你可以更加清晰一些。首先就是多肽合成，由于磷酸化位點的保守性，對某一個磷酸化位點周邊20個氨基酸左右的序列合成多肽，磷酸化多肽肯定帶有磷酸基團，非磷酸化多肽就掉了這個磷酸基團。然后就是
1.磷酸化抗體的檢測的是出于活性狀態（磷酸化）的蛋白。2.磷酸化抗體只針對磷酸化位點設計，是一種位點特異性的多抗，這到有些單抗的特性。3.普通抗體的合成（多抗）：原核表達蛋白-〉純化-〉免疫動物-〉收獲抗體。4.磷酸化抗體合成：人工合成含磷酸化位點的多肽-〉人工體外磷酸化-〉鏈接半抗原-〉免疫動物-
磷酸化和非磷酸化的抗體主要區別有： 1.磷酸化抗體的檢測的是出于活性狀態（磷酸化）的蛋白。 2.磷酸化抗體只針對磷酸化位點設計，是一種位點特異性的多抗，這到有些單抗的特性。3.普通抗體的合成（多抗）：原核表達蛋白-〉純化-〉免疫動物-〉收獲抗體。 4.磷酸化抗體合成：人工合成含磷酸化位點的
通常來說，磷酸化抗體芯片上檢測某一個磷酸化位點會設置一對抗體，即：磷酸化的和非磷酸化的抗體。說到區別，可能從制備講起你可以更加清晰一些。首先就是多肽合成，由于磷酸化位點的保守性，對某一個磷酸化位點周邊20個氨基酸左右的序列合成多肽，磷酸化多肽肯定帶有磷酸基團，非磷酸化多肽就掉了這個磷酸基團。然后就是
磷酸化和非磷酸化的抗體主要區別有： 1.磷酸化抗體的檢測的是出于活性狀態（磷酸化）的蛋白。 2.磷酸化抗體只針對磷酸化位點設計，是一種位點特異性的多抗，這到有些單抗的特性。3.普通抗體的合成（多抗）：原核表達蛋白-〉純化-〉免疫動物-〉收獲抗體。 4.磷酸化抗體合成：人工合成含磷酸化位點的
實驗材料測序級膜蛋白酶試劑、試劑盒二硫蘇糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯儀器、耗材螯合瓊脂糖凝膠層析介質實驗步驟這里所述的方法概括為下列幾個步驟：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性組分中的蛋白質（見 24. 3.1 )；固相金屬螯合親和層析（IMAC) 富集磷酸肽（見 24. 3. 2 )；用串聯質譜對磷酸