枯草芽孢桿菌的紫外線誘變選育實驗
實驗方法原理 紫外線對微生物有誘變作用，主要引起是DNA的分子結構發生改變（同鏈DNA的相鄰嘧啶間形成共價結合的胸腺嘧啶二聚體），從而引起菌體遺傳性變異。實驗材料 枯草芽孢桿菌試劑、試劑盒 生理鹽水培養基儀器、耗材 血球計數板顯微鏡紫外線燈電磁攪拌器離心機實驗步驟一、實驗主要儀器設備和材料 儀器：血球計數板、顯微鏡、紫外線燈（15W）、電磁攪拌器、離心機。 菌種：枯草芽孢桿菌。 二、實驗方法、操作步驟 1. 菌懸液的制備 （1）取培養48小時的枯草芽孢桿菌的斜面4-5支，用無菌生理鹽水將菌苔洗下，并裝入盛有玻璃珠的小三角燒瓶中，振蕩30分鐘，以打碎菌塊； （2）將上述菌液離心（3 000 r/min，離心15分鐘），棄去上清液，將菌體用無菌生理鹽水洗滌2-3次，最后制成菌懸液； （3）用顯微鏡直接計數法計數，調整細胞濃度為每毫升108個。 2. &n......閱讀全文
枯草芽孢桿菌的紫外線誘變選育實驗——紫外線誘變法
紫外線對微生物有誘變作用，主要引起是DNA的分子結構發生改變（同鏈DNA的相鄰嘧啶間形成共價結合的胸腺嘧啶二聚體），從而引起菌體遺傳性變異。將細胞計數后的平板，分別向菌落數在5-6個左右的平板內加碘液數滴，在菌落周圍將出現透明圈。分別測量透明圈直徑與菌落直徑并計算其比值（HC值），并與對照平板進行比
枯草芽孢桿菌的紫外線誘變選育實驗
實驗方法原理 紫外線對微生物有誘變作用，主要引起是DNA的分子結構發生改變（同鏈DNA的相鄰嘧啶間形成共價結合的胸腺嘧啶二聚體），從而引起菌體遺傳性變異。實驗材料 枯草芽孢桿菌試劑、試劑盒 生理鹽水培養基儀器、耗材 血球計數板顯微鏡紫外線燈電磁攪拌器離心機實驗步驟一、實驗主要儀器設備和材料?儀器：血
耐高溫酵母菌株的誘變選育
實驗概要通過實驗，觀察紫外線對酵母菌的誘變效應，并學習物理因素誘變育種的方法。實驗原理紫外線對微生物有誘變作用，主要引起是DNA的分子結構發生改變（同鏈DNA的相鄰嘧啶間形成共價結合的胸腺嘧啶二聚體），從而引起菌體遺傳性變異。測定紫外光的劑量有直接法（以爾格/平方毫米表示絕對劑量）和間接法（以輻照時
關于基因誘變的紫外線誘變劑的介紹
我們知道，DNA和RNA的嘌呤和嘧啶有很強的紫外光吸收能力，最大的吸收峰在260nm，因此波長260nm的紫外輻射是最有效的誘變劑.對于紫外線的作用已有多種解釋，但研究的比較清楚的一個作用是使DNA分子形成嘧啶二聚體，即兩個相鄰的嘧啶共價連接，二聚體出現會減弱雙鍵間氫鍵的作用，并引起雙鏈結構扭曲
微生物的誘發突變實驗_紫外線誘變法
實驗方法原理紫外線（UV）是一種最常用的物理誘變因素，它的主要作用是使 DNA 雙鏈之間或同一條鏈上兩個相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體，阻礙雙鏈的分開、復制和堿基的正常配對，從而引起突變。紫外線照射引起的 DNA 損傷，可由光復活酶的作用進行修復，使胸腺嘧啶二聚體解開恢復原狀。因此，為了避免光復活，用紫外
USE－誘變實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 帶 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態 帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態 試劑、試劑盒
USE－誘變實驗
本方法中，兩條寡核苷酸引物雜交到變性重組質粒 DNA 雙鏈的同一條鏈上。一條引物（誘變引物）攜帶一個擬引進靶 DNA 序列的突變，第二條引物攜帶一個能破壞質粒單一限制酶位點的突變。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料帶 mutS 表型（
誘變－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 氯仿 異戊醇 乙醇 礦物油或者一個蠟珠 3mol L NaOAc 5 mmol L MnCl2 突變 PCR 緩沖液
誘變－PCR－實驗
試劑、試劑盒?氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高純度的脫氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物瓊脂糖凝膠用溴化乙錠染色儀器、
誘變－PCR－實驗
誘變 PCR 最大的優勢是以一種沒有偏好的方式引入了各種類型的突變，而不是獲得高水平的單一的擴增。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Nati
USE－誘變實驗
實驗材料 帶 mutS 表型（例如BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態試劑、試劑盒 退火緩沖液貯存液合成緩沖液噬菌體 T4DNA 連接酶噬菌體 T4DNA 聚合酶或測序酶單一位點的限制性內切核酸酶瓊脂糖凝膠誘變引物選擇引物質粒 DNA儀器、耗材 70°C
定點誘變實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 TE寡核苷酸引物質粒dNTPDNA聚合酶氯仿石蠟油無水乙醇儀器、耗材 離心管熱循環儀離心機實驗步驟 1. ?利用突變區兩側的限制性內切酶位點將待誘變的DNA片段亞克隆進高拷貝數的載體中。?2. ?用小量制備的質粒提取模板DNA，用TE緩沖液重懸100 ng DNA至終濃
定點誘變實驗
基本方案 利用PCR引物點突變 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
酵母菌細胞的誘變實驗——紫外光誘變
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD刀豆氨酸儀器、耗材紫外光殺菌燈紫外光放射量測定器實驗步驟1. ?將過夜培養的酵母菌培養液接種到5 ml YPD培養基中，于30℃培養。離心5~10 s，用1 ml 無菌水重懸沉淀細胞，重復洗滌1次，再用1 ml 無菌水重懸。?2. ?檢查細胞密度，記錄數據后將細胞密度調
酵母菌細胞的誘變實驗——甲乙硫醚誘變
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD磷酸鈉緩沖液甲乙硫醚刀豆氨酸硫代硫酸鈉儀器、耗材試管搖床離心機平板實驗步驟1. ?將過夜培養的待誘變酵母菌株轉接于5 ml YPD培養基，于30℃繼續培養。檢查細胞密度，記錄并調整到2×108細胞/ml。2. ?轉移1 ml 的菌懸液到無菌的離心管中。高速離心5~10
DNA的接頭分區誘變實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 霧水乙醇EDTAT4 DNA連接酶TENaCl儀器、耗材 培養箱水浴鍋實驗步驟 1. ?用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核酸酶在質粒的目的區域產生一嵌套式的5’或3端'缺失突變體。首先在目的序列附近用一限制酶使質粒線性化，在用Bal 31消化時，應確定其切割效
DNA的接頭分區誘變實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒 霧水乙醇 EDTA T4 DNA連接酶 TE
區域特異性誘變實驗
實驗材料?DNA試劑、試劑盒?乙酸鈉亞硝酸鈉TE無水乙醇dNTP反轉錄酶RNA酶洗脫液溴化乙錠儀器、耗材?水浴鍋培養箱實驗步驟 1.? 用限制性內切核酸酶消化DNA以獲得目的DNA片段，將靶片段雙向克隆到M13噬菌體載體或含有M13復制起始子的質粒載體中。從100 ml 感染細抱培養物中提取單鏈DN
DNA的接頭分區誘變實驗
Linker scanner mutations （接頭分區突變）：體外在限制性片段加上位點，使兩個DNA分子發生重組產生，結果在重組的位點加上連接序列。實驗材料DNA試劑、試劑盒霧水乙醇EDTAT4 DNA連接酶TENaCl儀器、耗材培養箱水浴鍋實驗步驟1. ?用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核
區域特異性誘變實驗
區域特異性誘變 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 可在長達3‘的克隆化DNA片段上產生大量的隨機分布的核苷酸替換突變，在將DNA克隆到一個可用來分離單鏈DNA的載體后，用各種可造
區域特異性誘變實驗
區域特異性誘變實驗，用于（1）基因誘導改造（2）基因的特定表達（3）臨床抗腫瘤等靶點的發揮。實驗方法原理可在長達3‘的克隆化DNA片段上產生大量的隨機分布的核苷酸替換突變，在將DNA克隆到一個可用來分離單鏈DNA的載體后，用各種可造成特定堿基損傷的化學試劑處理。實驗材料DNA試劑、試劑盒乙酸鈉亞硝酸
近物所甜高粱重離子誘變及引種選育的3個品種通過鑒定
鑒定會現場 中科院近代物理研究所選育的擁有自主知識產權的甜高粱品種3項成果，于11月26日通過了由甘肅省科技廳組織、中科院蘭州分院主持的科技成果鑒定。 鑒定委員會聽取了課題組作的研究報告，審閱了科技查新報告、檢驗報告、抗病性報告以及課題組提供的用戶報告等驗收材料。經認真質詢討論，
纖維素酶的真菌來源及菌種選育
1 真菌來源纖維素酶的真菌來源非常廣泛，比較典型的有木霉屬（Trichoderma sp.）、曲霉屬（Aspergillus sp.）和青霉屬（Penicillium），另外還有血紅栓菌、疣孢漆斑菌QM460、變色多空霉、乳齒耙菌、腐皮鐮孢、嗜熱毛殼菌QM9381和嗜熱子囊菌QM9383等，其它真菌
誘變物質的微核測定實驗
實驗方法原理 微核（micronuclei)簡稱（MCN）是真核類生物細胞中的一種異常結構，往往是細胞經輻射或化學藥物的作用而產生的。在細胞間期，微核呈圓形，游離于主核之外，大小應在主核1/3以下。微核的折光率及細胞化學反應性質和主核一樣，也具有伍萬DNA的能力。一般認為微核是由有絲分裂后期喪失著絲
簡并寡核苷酸誘變實驗
實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS無水乙醇儀器、耗材 水浴鍋離心機分光光度計實驗步驟 1. ?設計寡核苷酸，其3‘端含有由8個核苷酸組成的回文結構，且包含某一限制性內切酶的識別位點；如果可能的話，5’端也應有一含某個限制性內切酶位點的序列。中間區段則應含目
簡并寡核苷酸誘變實驗
本方法的一個重要特點就是將單鏈的簡并寡核苷酸轉變成同源雙鏈分子后直接克隆進常規載體。由于不同的寡核苷酸可通過其3’末端的回文結構雜交，因此，寡核苷酸實際上起互為引物的作用，在大腸桿菌DNA聚合酶I klenow片段作用下延伸。實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS
酵母菌細胞的誘變實驗
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPD磷酸鈉緩沖液甲乙硫醚刀豆氨酸硫代硫酸鈉儀器、耗材?試管搖床離心機平板實驗步驟 1.? 將過夜培養的待誘變酵母菌株轉接于5 ml YPD培養基，于30℃繼續培養。檢查細胞密度，記錄并調整到2×108細胞/ml。2.? 轉移1 ml 的菌懸液到無菌的離心管中。高速離心5
簡并寡核苷酸誘變實驗
小段DNA序列中產生大量突變 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌 試劑、試劑盒
誘變物質的微核測定實驗
實驗方法原理：微核（micronuclei)簡稱（MCN）是真核類生物細胞中的一種異常結構，往往是細胞經輻射或化學藥物的作用而產生的。在細胞間期，微核呈圓形，游離于主核之外，大小應在主核1/3以下。微核的折光率及細胞化學反應性質和主核一樣，也具有伍萬DNA的能力。一般認為微核是由有絲分裂后期喪失著絲
定點誘變實驗——基本方案
定點突變是指通過聚合酶鏈式反應（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因組，也可以是質粒）中引入所需變化（通常是表征有利方向的變化），包括堿基的添加、刪除、點突變等。定點突變能迅速、高效的提高DNA所表達的目的蛋白的性狀及表征，是基因研究工作中一種非常有用的手段。實驗材料DNA試劑、試劑盒TE寡核