多重端粒熒光原位雜交實驗（三）
三、端粒克隆DNA的抽提1.準備含特定抗生素50μg/mL氨芐青霉素、35μg/mL卡那霉素或12.5μg/mL氯霉素）的LB平板。2.從-70℃取出甘油保存管，放在干冰上。3.取甘油保存的菌種在LB平板劃線后，37℃細菌培養箱培養過夜。4.加100mL 2×YT培養基到500mL離心管中，按步驟1所示濃度加抗生素。5.從平板上挑選單克隆接種到2×YT培養基，37℃搖床中培養過夜。6.取700μL細菌培養物加300μL100%甘油混合均勻，分裝在兩個Eppendorf管中，標記好，-70℃條件下保存。7.剩余的細菌培養物350g離心15min。8.棄上清，將離心管倒扣在紙上瀝干。9.用30mL冷的細胞重懸液懸起沉淀，劇烈混勻和抽吸幾次，使得小細胞團塊徹底懸起10.加30mL細胞裂解液，上下輕輕顛倒一次。11.室溫放置5min(不要延長時間）。12.立即加30mL冷的中和液，上下輕輕顛倒混勻。13.冰上放置15min，每5min上......閱讀全文
原位雜交與熒光原位雜交
?一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH)?是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛
原位雜交與熒光原位雜交
?一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH)?是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛
原位雜交與熒光原位雜交
一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH) 是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛應
雙重和多重原位雜交(hybridization－in－situ)技術
為了在同一標本上或同一細胞內同時檢測是否存在兩種或兩種以上的靶核酸序列。可應用雙重或多重原位雜交技術．即以兩種或多種標記探針與靶核酸雜交。然后利用不同的檢測手段分別顯示各種靶核酸的存在和分布。該技術與免疫組織化學技術中的雙重或多重標記相似，除了探針本身的特異性外，對結果的干擾主要來自標記物及檢測試劑
多重pcr和多重熒光定量pcr的區別
正常啊，定量PCR很靈敏的，體系稍微變化就會誤差很大，更何況你這樣反應體系都不一樣。所以一般定量結果只是作為佐證，最好別太相信。你想做好，就盡量保證每個體系是一致的，最后結果趨勢是一致的就行了。
RNA熒光原位雜交
原位雜交：在研究DNA分子復制原理的基礎上發展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，能過氫鍵結合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點，應帶有標記的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質)DAN或 RNA
熒光原位雜交介紹
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH）是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導分子（reporter molecule）結
LSCM多重熒光標記
由于大部分實驗都需同時觀測兩個或多個細胞內的組分，需要對細胞進行多重熒光標記。這時，研究者需要綜合考慮實驗目的、所使用的激光共聚焦顯微鏡配置和已有的實驗材料。通常，激光共聚焦顯微鏡配備?4?個激光器(405nm?半導體固體激光器、氬離子激光器、543nm?氦/氖激光器或?561nm半導體固體激光器和
熒光基因分型篩查微小亞端粒重排實驗
實驗材料 樣品 DNA 試劑、試劑盒 PCR 引物氯化鎂溶液dATP、dGTP、dCTP 和 dTTP 混合液Taq 聚合酶96孔板PCR熱循環儀瓊脂糖EB 溶液上樣緩沖液電泳緩沖液Long Ranger? 凝膠溶液尿素 儀器、耗材 水平凝膠電泳裝置紫外透射反射儀
熒光基因分型篩查微小亞端粒重排實驗
實驗方法原理 實驗材料 樣品 DNA試劑、試劑盒 PCR 引物 氯化鎂溶液dATP、dGTP、dCTP 和 dTTP 混合液Taq 聚合酶96孔板PCR熱循環儀瓊脂糖EB 溶液上樣緩沖液電泳緩沖液Long Ranger? 凝膠溶液尿素儀器、耗材 水平凝膠電泳裝置紫外透射反射儀濾膜 GS-400 HD
用非同位素探針進行原位雜交和檢測實驗——熒光原位雜交
實驗方法原理實驗材料載有樣本的載玻片試劑、試劑盒 20?150 ng非同位素標記的DNA探針去離子的甲酰胺l0 mg mL經超聲處理的鮭精DNA主雜交混合液50% (V V)甲酰胺（未去離子）SSCpH 7.0生物素檢測液或地高辛檢測液或生物素 地高辛檢測液0.1% (V V) Triton ×-1
【銳賽小課堂】熒光原位雜交技術實驗心得
銳賽小課堂1221-157 熒光原位雜交技術（ fluorescence in situ Hybridization,FISH）是一種非放射性原位雜交方法，用特殊的熒光素標記核酸探針，在細胞或組織切片標本上進行雜交，以檢測細胞內 DNA 或 RNA 特定序列存在與否。 FISH 實驗
熒光原位雜交（FISH）技術的應用與實驗流程
分子診斷是診斷市場增長最快的部分。螢光原位雜交和FISH分析包括700萬人口的5億美元的市場。。FISH市場預計為11％，較去年同期成長為下一個五年。400至500萬人口的市場，在美國產生。FISH測試是用來識別生物標記DNA / RNA的形式。它是用于遺傳作圖和基因表達分析公知的方法。這種
原位雜交儀—熒光原位雜交相關解釋
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH）是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導分子（reporter molecule
熒光原位雜交的概念
熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是20世紀80年代末在放射性原位雜交技術基礎上發展起來的一種非放射性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術，是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
熒光原位雜交的應用
該技術不但可用于已知基因或序列的染色體定位，而且也可用于未克隆基因或遺傳標記及染色體畸變的研究。在基因定性、定量、整合、表達等方面的研究中頗具優勢。 FISH最初用于中期染色體。從正在分化的細胞核中制備的這種染色體是高度凝縮的，每條染色體都具有可識別的形態，它們染色后將顯現出特征性的著絲粒位置
熒光原位雜交的特點
原位雜交的探針按標記分子類型分為放射性標記和非放射性標記。用同位素標記的放射性探針優勢在于對制備樣品的要求不高，可以通過延長曝光時間加強信號強度，故較靈敏。缺點是探針不穩定、自顯影時間長、放射線的散射使得空間分辨率不高、及同位素操作較繁瑣等。采用熒光標記系統則可克服這些不足，這就是FISH技術。
熒光原位雜交的發展
熒光原位雜交技術問世于20世紀70年代后期。1977年，熒光標記的抗體被應用于識別特異性DNA—RNA雜交I I。1980年，J.G.Baunlan等將應用化學偶聯的方法將熒光素結合到RNA探針上用于直接快速的特異性靶序列檢測。
熒光原位雜交的背景
對于利用rRNA的熒光原位雜交來說，如下原因可導致較低的熒光信號強度： 較低的細胞核糖體含量 較低的細胞周邊的通透性 較低的目標序列可接觸性（由于rRNA的折疊產生的構象，有些位置與rRNA分子內其他鏈或其他rRNA或蛋白緊密接觸，從而使探針無法和目標序列雜交） 為檢驗細胞中的目標序列是
熒光原位雜交的原理
熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是20世紀80年代末在放射性原位雜交技術基礎上發展起來的一種非放射性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術，是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
熒光原位雜交技術詳解
1974年Evans首次將染色體顯帶技術和染色體原位雜交聯合應用，提高了定位的準確性。20世紀70年代后期人們開始探討熒光標記的原位雜交，即FISH技術。1981年Harper成功地將單拷貝的DNA序列定位到G顯帶標本上，標志著染色體定位技術取得了重要進展。20世紀90年代，隨著人類基因組計劃的
熒光原位雜交技術簡介
熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是20世紀80年代末在放射性原位雜交技術基礎上發展起來的一種非放射性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術，是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
熒光原位雜交的簡介
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH)是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術,以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導分子(reporter molecul
多重PCR反應中關鍵因素和實驗步驟（三）
dNTP和MgCl?2?的濃度（步驟 5D）.dNTP.?用引物混合物 Y-4 檢測了多重 PCR 反應中 dNTP 濃度的影響。氯化鎂濃度保持恒定 (3 mM) ，而 dNTP 的濃度從每種 50 μ M 逐漸增加到每種 1200 μ M(Figure 4b) 。當 dNTP 濃度為每種
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（二）
5．洗膜 取出塑料袋，用剪刀剪開，小心取出濾膜，立即浸入盛有2×SSC和 0.5%SDS溶液的盤中，室溫下漂洗5min。再將濾膜移入2×SSC和0.1%SDS溶液中，室溫下洗滌15min（輕輕搖動）。然后將濾膜移入 0.1×SSC和0.5%SDS溶液中；68℃輕輕搖動保溫2h，更換緩沖液后繼
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（五）
⑦60伏電泳過夜。 ⑧取出凝膠，水中浸泡2次，每次5min。 ⑨室溫下將膠浸到50mmol/L NaOH和10mmol/l NaCl中45min，水解高分子RNA，以增強轉印。 ⑩室溫下將膠浸到0.1mol/L Tris·HCl (Ph7.5)中45min，使膠中和。
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（四）
（2）硝酸纖維素濾膜吸印。①將膠切成合適大小，切去右上角作為記號。②將膠放進盛有變性緩沖液（1.5mol/l NaCl, 0.5mol/L NaOH）的盤中輕搖動15min。③換到中和緩沖液（1mol/L Tris·HCl , pH8.0, 1.5mol/L NaCl）中輕搖動30min。④裁一張硝
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（六）
夾心雜交法可用濾膜和小珠固定吸附探針，使用小珠可更好地進行標準化試驗和更容易對小量樣品進行操作。Dahlen 等利用微孔板進行夾心雜交，可同時進行大量樣品檢測，他們先吸取DNA探針加到凹板中，然后用紫外線照射使其固定到塑料板上。用微孔板進行夾心雜交還可直接用于PCR技術。應用光敏生物標記探針
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（一）
是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛應用于腫瘤生物學、血液病理學、遺傳、微生物學、細胞和分子生物學、神經內分
臨床FISH：為疾病治療帶來新視角
病理學家是形態學的支持者。對他們來說，組織切片上的點點顏色能幫助你區分良性和病變的組織，為治療提供線索。當然，關鍵詞是“染色”。組織切片在光學顯微鏡下是沒有特征的，因此病理學家（研究人員）必須染色，才能看見細胞。 在許多情況下，蘇木精和曙紅（H&E）染色就足夠了，這揭示了基本的組織結構。不過，