AAV腺病毒純化完整和空殼分離新辦法（一）
現狀基于腺相關病毒（AAV）的各種血清型載體被公認在人類基因治療和基因疫苗接種應用中具有高潛力。在制造AAV載體期間，不必要的，不完全的顆粒共同產生。它們缺乏重組病毒基因組，僅由空衣殼蛋白組成。空衣殼增加了用于醫學應用的AAV病毒的所需劑量，并且被認為引起針對載體衣殼的免疫反應，導致不必要的副作用。因此，在制造過程中去除空衣殼以及量化制劑中空AAV顆粒含量的能力是任何AAV生產過程的關鍵要求。制備AAV載體的常規方法目前用于制備分離空衣殼（CsCl或碘克沙醇梯度）的方法對于放大是具有挑戰性的并且不適合于大規模生產。此外，用于檢測空衣殼的分析方法和全空粒子比的測定（電子顯微鏡（EM）測定，總粒子測定[ELISA]結合基因組拷貝滴定[qPCR]）耗費時間和勞動力，受操作者的影響技術或不提供用于不同血清型AAV的容易獲得的試劑。本應用簡報介紹了利用微小電荷差異分離全空和空AAV8顆粒的新方法。通過在BIA Seperations ......閱讀全文
mRNA的分離和純化實驗（二）
（三） mRNA的分離1、mRNA與Oligo(dT)-纖維素結合：用移液器重新懸浮oligo(dT)-纖維素，取適量的oligo(dT)-纖維素到RNA樣品中，蓋上蓋子，顛倒數次將oligo(dT)-纖維素與RNA混勻。于37℃水浴保溫并溫和搖蕩15min。oligo(dT)-纖維素與RNA所需量
信使RNA的提取、分離和純化
真核細胞的mRNA分子最顯著的結構特征是具有5’端帽子結構（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。絕大多數哺乳類動物細胞mRNA的3’端存在20-30個腺苷酸組成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。這種結構為真核mRNA的提取，提供了極為方便的選擇性標志，寡聚（dT）纖維素或寡聚（U）瓊
微生物的分離和純化
實驗概要本文介紹了倒平板的方法和幾種分離純化微生物的基本操作技術。實驗原理在土壤、水、空氣或人及動、植物體中，不同種類的微生物絕大多數都是混雜生活在一起，當我們希望獲得某一種微生物時，就必須從混雜的微生物類群中分離它，以得到只含有這一種微生物的純培養，這種獲得純培養的方法稱為微生物的分離與純化。為了
簡述巨噬細胞的分離和純化
1、取2～3公斤重的家兔，耳緣靜脈注射10ml空氣處死動物或注射2ml（含130mg）戊巴比妥麻醉動物。仰臥固定，消毒胸部，剪開胸壁。以下過程注意無菌操作。小心從環狀軟骨下方剪下氣管，分離心臟和血管，取出肺，剪去脂肪和結締組織。用無菌紗布小心擦凈肺表面，稱重。 2、分離肺泡巨噬細胞：用夾子夾住
小鼠精原細胞的分離和純化
【摘要】 目的 探討小鼠精原細胞的分離純化。 方法 用組合酶消化法制備7～8d小鼠的生殖細胞懸液；用Percoll不連續密度梯度法分離精原細胞。 結果 所獲細胞懸液內活細胞、死細胞及細胞團的百分比分別為90.08%、9.92%及8.91%；平均每個睪丸可獲得4.136×105個細胞；精原細胞主要分布
劉鋼團隊開發基因治療和疫苗載體快速定量檢測黑科技
【導語】基因治療或疫苗開發過程中，對AAV衣殼濃度進行完整、精確的測定，是前期研發，中期篩選中獲得可靠數據，后期治療中能夠安全有效給藥的必要條件。基因療法能從根本上補充或修復缺陷基因，恢復健康基因的正常生物學功能，具有不可比擬的治療優勢。腺病毒或腺相關病毒 （AAV） 已經成為預防感染、嚴重疾病和死
腺病毒的病毒分離與鑒定
1、分離培養 標本應盡早從感染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物，糞便和尿液等，加抗生素處理過夜，離心取上清接種敏感細胞（293、Hep-2或HeLa細胞等），37℃孵育后可觀察到典型CPE，即細胞變圓、團聚、有拉絲現象，最突出的表現是許多病變細胞聚在一起呈葡萄串狀。 2、病毒鑒定 用熒光標記的
細菌接種、分離純化和培養技術（2）
２、涂布平板法首先把微生物懸液通過適當的稀釋，取一定量的稀釋液放在無菌的已經凝固的營養瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培養基表面上，經恒溫培養便可以得到單個菌落。（圖３－５，b）３、平板劃線法最簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環取培養物少許在平板上進行劃線。劃線的
細菌接種、分離純化和培養技術（1）
一、接種將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養基上或活的生物體內的過程叫做接種。１、接種工具和方法在實驗室或工廠實踐中，用得最多的接種工具是接種環、接種針。由于接種要求或方法的不同，接種針的針尖部常做成不同的形狀，有刀形、耙形等之分。有時滴管、吸管也可作為接種工具進行液體接種。在固體培養基表面要將菌液
長白豬精原細胞的分離和純化
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 酶消化法制備2月齡未成熟長白豬睪丸組織的單細胞懸液，以 2 %～4 %牛血清白蛋白 (BSA)連續梯度作為分離介質，采用重力沉降法并結合細胞貼壁培養的方法分離精原細胞。 實驗
長白豬精原細胞的分離和純化
實驗方法原理酶消化法制備2月齡未成熟長白豬睪丸組織的單細胞懸液，以 2 %～4 %牛血清白蛋白 (BSA)連續梯度作為分離介質，采用重力沉降法并結合細胞貼壁培養的方法分離精原細胞。實驗材料長白種系公豬 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
長白豬精原細胞的分離和純化
實驗方法原理酶消化法制備2月齡未成熟長白豬睪丸組織的單細胞懸液，以 2 %～4 %牛血清白蛋白 (BSA)連續梯度作為分離介質，采用重力沉降法并結合細胞貼壁培養的方法分離精原細胞。實驗材料長白種系公豬試劑、試劑盒膠原酶胰蛋白酶脫氧核糖核酸酶牛血清白蛋白胎牛血清RPMI 1640培養基HE染液PBS儀
微生物的分離和純化實驗
在土壤、水、空氣或人及動、植物體中，不同種類的微生物絕大多數都是混雜生活在一起，（1）用于細胞分離（2）細胞純化（3）細胞增殖培養。實驗方法原理為了獲得某種微生物的純培養，一般是根據該微生物對營養、酸堿度、氧等條件要求不同，而供給它適宜的培養條件，或加入某種抑制劑造成只利于此菌生長，而抑制其他菌生長
微生物的分離和純化實驗
實驗方法原理?為了獲得某種微生物的純培養，一般是根據該微生物對營養、酸堿度、氧等條件要求不同，而供給它適宜的培養條件，或加入某種抑制劑造成只利于此菌生長，而抑制其他菌生長的環境，從而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀釋涂布平板法或稀釋混合平板法或平板劃線分離法等分離、純化該微生物，直至得到純菌株。土
蛋白質的表達、分離和純化
目的要求（1）了解克隆基因表達的方法和意義。（2）了解重組蛋白親和層析分離純化的方法。實驗原理克隆基因在細胞中表達對理論研究和實驗應用都具有重要的意義。通過表達能探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理，同時克隆基因表達出所編碼的蛋白質可供作結構與功能的研究。大腸桿菌是目前應用最廣泛的蛋白質表達系
長白豬精原細胞的分離和純化
一、材料和方法1、實驗動物長白種系公豬，2月齡，由北京養豬中心葦溝現代化豬場提供。取活體睪丸，立即放入1640營養液中，待分離細胞。2、主要試劑及材料膠原酶（CLS，Sigma），胰蛋白酶（Sigma），脫氧核糖核酸酶（DNase,Promega），牛血清白蛋白（BSA，中國醫學科學院天津血液研究所
質粒DNA的分離、純化和鑒定－（三）
操作步驟? 一、 細菌的培養和收集? 將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基（含50μg/ml Amp）中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基（含50μg/ml Amp）中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。? 二、 質粒DNA
多糖的分離和純化幾種方法
經過前期對多糖的提取，去除蛋白質、色素、小分子等物質得到粗多糖，而這些粗多糖其實是由很多分子量、結構不同的多糖混合而成。為了得到純的多糖即均一性多糖，仍需進一步對這些粗多糖進行分離純化。 1、分步沉淀法 多糖的結構和分子量不同，其極性大小不同，在有機溶劑（如醇或酮）中的溶解度不同，根據這一原
針對病毒包裝五大環節的解決方案
不論是細胞治療還是基因治療都離不開病毒載體。目前使用最多的病毒載體類型包括：腺相關病毒（AAV）、慢病毒（Lv）、逆轉錄病毒（Rv）和腺病毒（Adv）等，這些常用病毒載體特性如下圖所示：特征慢病毒Lentivirus逆轉錄病毒Retrovirus腺相關病毒AAV腺病毒ADV基因表達穩轉/瞬轉穩轉瞬轉
細胞的純化方法介紹（自然純化和人工純化）（一）
體外培養的細胞源于人或動物或胚胎組織，體內的細胞都是混雜生長，每一種組織都有血管和間葉組織，因此，來源于上述組織的培養材料的原代細胞、傳代細胞絕大多數都呈混合生長，既有上皮樣細胞又有纖維樣細胞，纖維樣細胞又包括成纖維細胞、肌細胞、骨細胞、滑膜細胞等，混雜的細胞會直接影響實驗結果，而利用體外培養細胞進
核酸分離與純化的設計與原則（一）
第一節????????核酸分離與純化的設計與原則細胞內的核酸包括DNA與RNA兩種分子，均與蛋白質結合成核蛋白（nucleoprotein）。DNA與蛋白質結合成脫氧核糖核蛋白（deoxyribonucleoprotein，DNP），RNA與蛋白質結合成核糖核蛋白（ribonucleoprotein
實驗室常用微生物菌種的分離和純化方法（一）
從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。在分子生物學的研究及應用中，不僅需要通過分離純化技術從混雜的天然微生物群中分離出特定的微生物，而且還必須隨時注意保持微生物純培養物的“純潔”，防止其他微生物的混入。?1、用固體培養基分離和純化?單個微生物在適宜的固體培養基表
加速崛起的黃金賽道？一文深度了解
一、細胞與基因治療逐漸成熟，已步入快速發展通道 （一）細胞與基因治療直接作用于遺傳物質，臨床應用前景廣闊 細胞與基因治療是指將外源遺傳物質導入靶細胞，以修飾或操縱基因的表達，改變 細胞的生物學特性以達到治療效果的一種新興治療方式。其作用機制主要包括以下 三個方面： （1）替換：用正常的基因
腺病毒載體疫苗的制備與分離
通常來說，開發一種新型疫苗需要經過數年的艱苦過程，包括完整的生產工藝確定。這樣的模式沒辦法對一些爆發性的傳染疾病做出快速響應，而且面對一些商業潛力比較小的區域性疾病或者是某些定制化疫苗也是力有不逮。?在病毒載體家族里面，腺病毒的應用非常廣泛，它具有誘導抗體和T細胞組合反應的潛能。雖然人群中廣泛存在的
分離純化總RNA
1）??????用酸性酚-硫氰酸胍-氯仿提取純化組織和細胞中的RNA1.??????選取從組織細胞或細胞中提取RNA的適宜方法組織a.???????分離組織并立即置于液氮中。b.??????將約100 mg冰凍組織含液氮的研缽中，用研棒研磨。研磨過程中可加入液氮使組織保持冰凍狀態。c.???????
細胞分離純化技術
Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細胞 Percoll不連續密度梯度沉淀法分離純化淋巴細胞和淋巴母細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 常用來分離人外周血單個
細胞分離純化技術
Percoll不連續密度梯度沉淀法分離純化淋巴細胞和淋巴母細胞實驗方法原理Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低（
生物分離純化系統
生物分離純化系統是一種用于水產學領域的分析儀器，于2018年12月5日啟用。 技術指標 系統泵：雙泵四泵頭，每個泵頭都有獨立除氣閥，每個泵后都有潤洗通路，潤洗泵的柱塞杠，延長泵的使用壽命；流速0.001-25ml/min（單泵）；裝柱可以雙泵模式運行，達到0.1–50ml/min；壓力范圍0
蛋白分離純化步驟
蛋白質分離純化的一般程序可分為以下幾個步驟：（一）材料的預處理及細胞破碎分離提純某一種蛋白質時,首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來并保持原來的天然狀態,不喪失活性.所以要采用適當的方法將組織和細胞破碎.常用的破碎組織細胞的方法有：1.機械破碎法這種方法是利用機械力的剪切作用,使細胞破碎.常用設備有
分離純化的流程
粉碎：將樣品進行破碎，研磨提取：這與我們的篩分差不多，就是在破碎之后，提取符合顆粒大小要求的樣品，可以理解為取樣。分離：這就要看你們所作的什么實驗。大部分是分離樣品中的雜質。就相當于提純。鑒定：也就是分析了。分析樣品成分呀，化學性質什么的。