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由于合成載體兩性電解質（synthetic carrier ampholyte SCA）是通過復雜的合成過程得到的，其重復性很難控制，由此不同批次之間會存在很大的變化，同一蛋白質在不同批 圖-1. 等電聚焦的“聚焦效應” 次等電聚焦中所出現的位置有所偏差，這樣作為雙向電泳中的一向時就限制了蛋白質分離的重復性。另外，SCA分子量相對較小，難以在IEF膠內固定，再等電聚焦過程中由于水合正離子引起電滲流（electroendosmosis）將致使SCA分子向負極遷移（負極漂移），結果使pH值的不穩定性增加。 基于以上的種種因素，20世紀80年代建立起一種新型的等電計較技術—固相pH梯度等電聚焦。固相pH梯度等電聚焦（Immobilized pH gradients isoelectric focusing, IPGIEF）是利用一系列具有弱酸或弱堿性質的丙烯酰胺衍生物滴定時，在滴定終點附近形成pH梯度，......閱讀全文
由于合成載體兩性電解質（synthetic carrier ampholyte SCA）是通過復雜的合成過程得到的，其重復性很難控制，由此不同批次之間會存在很大的變化，同一蛋白質在不同批 圖-1. 等電聚焦的“聚焦效應” 次等電聚焦中所出現的位置有所偏差，這樣作為雙向電泳中的一向時就限
2．[操作步驟] 1. 將研磨管離心一分鐘（不低于12000×g）棄上清。 2. 加入裂解液（200-300ul）充分vortex. 3. 再加入樣品鼠腦組織（低于100mg）充分研磨。然后可以再加入裂解液至1ml.. 4. 將組織懸液離心5-10min(高于
一、蛋白質組學概論隨著人類基因組計劃的實施，生命科學步入了后基因組時代，出現了不同于以往經典生物實驗科學的全新的研究方式─“生物大科學”。這種生物大科學的核心思想是整體性研究，即以生物體內某類物質為對象進行完整的研究。過去對生命活動的研究僅限于研究細胞內個別的基因或蛋白質，而基因組學和蛋白質組學的目
我們本次實驗使用的是銀染。銀染的方法種類很多，目前有文獻報道的就有100多種。但是其準確的染色機制還不是特別的清楚。大致的原理是銀離子在堿性pH環境下被還原成金屬銀，沉淀在蛋白質的表面上而顯色。 由于銀染的靈敏度很高，可染出膠上低于1 ng/蛋白質點，故廣泛的用在2D凝膠分析上。待找到自己感
六、第二向 SDS-PAGE1．[基本原理]蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時，它的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素。如果加入一種試劑消除電荷、形狀等因素的影響，使電泳遷移率只取決于分子的大小，就可以用電泳技術測定蛋白質的分子量。1967年，Shapiro等發現在樣品介質和聚丙烯酰胺凝
2．[操作步驟]1. 將標準品BSA(5mg/ml)先稀釋成0.5 mg/ml，2. 按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl分別加到96孔板中，加DDW補足到20μl。3. 加適當體積樣品（4μl）到96孔板的樣品孔中，加DDW到20μl。4. 各孔加入200μl G-250染色液
（一）第一向等電聚焦從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室溫溶解。2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混勻。3. 從小管中取出400ml水化上樣緩沖液，加入100ml樣品，充
2.3.2 第二向SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）選用DYY-Ⅲ型（北京六一儀器廠生產）電泳槽（規格為200×200×1mm），分離膠濃度為12%，無濃縮膠。待膠聚合后，將電聚焦后已經平衡的膠條平放于濃縮膠頂端（避免膠條拉直），并用1%瓊脂糖（電極緩沖液配制）封膠，特別應注意避免膠條與
實驗相關試劑配制1.Bradford 工作液95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考馬斯亮蘭G250,溶解完后再加磷85%磷酸 52ml 酸，最后超純水定容至500ml.過濾后置于棕色瓶考馬斯亮蘭G250 0.035g 外加油皮紙保存（Bradford不穩定，一周內有效）2.裂解液尿素 8M硫脲 2MC
二、一向電泳（13cm的holder）（1）取大約70-100ng的蛋白與溶脹液混合總體積達到250vl（2）將上述溶液加到holder 的兩個電極之間。（3）去掉膠條的保護膜，膠面朝下，先將膠條尖端朝膠條槽的尖端方向放入膠條槽中，慢慢下壓膠條，并前后移動，避免生成氣泡，最后放下膠條平端，使溶液浸濕