RealtimePCR實驗心得和RNA提取心得
并不是所有的實驗都可以做real－time的，技術路線要選好當你的基因表達量少或有些不表達具體就是做普通pcr跑膠條帶比較弱，不是很亮的情況下個人覺得最好不要選擇real，不容易做好，特別是融解曲線用sbgr green染料做的話，引物設計時擴增片斷最好小于250bp，太長了不好擴預實驗先rt－pcr，梯度溫度擴增，尋求最佳退火溫度。并確定有較亮的目的條帶試劑盒不能太差，要省錢的話可以把體系降到20ul最好不要用普通的pcr試劑盒＋sbgr green來作real，可以做出來，但是不穩定，很耗時間精力上下游引物可以混在一起，摸條件時加樣比較方便，如果要批量的話，最好是分開的好些。如果用的是普通pcr的ep管，可以把蓋子剪掉，再加入20ul的石蠟油或礦物油封住液面，效果比較好，當然要確定你的機子是從蓋子上面檢測熒光的，而不是從側管壁。融解曲線不好，特別是有目的條帶高峰，但前面65－75度峰也較高時，可以再做一次融解曲線，一般都會變......閱讀全文
Real-time PCR
實驗概要 The ?exponential amplification via reverse transcription polymerase chain ?reaction provides for a highly sensitive technique in which a very l
Real-Time or Kinetic PCR
The DNA Facility houses the “real-time” or kinetic PCR instrument, the Applied Biosystems Model 7700 sequence detection system (the TaqMan instrument
實時定量PCR（Real-time quantitative PCR）
mRNA表達的研究 微小殘留病變的檢測 腫瘤耐藥基因表達的研究 病毒感染的定量監測Vs普通PCR，RT-PCR的優勢 采用封閉的檢測模式，因此擴增產物導致污染的可能性比普通PCR要小得多 。 擴增產物的檢測在PCR擴增過程中同時進行，并且數據的采集、分析全部由 儀器 自動完成，因此整個檢測所 需的時
Real-Time PCR實驗流程
實驗試劑Total RNA Kit ：Omega：(Cat.No．R6834)First Strand cDNA Synthesis Kit：GeneCopoeia(Cat.No．C0210A)2xAllinOneTMQ-PCRMix：GeneCopoeia（cat.No．D0101A)Primer
RT-PCR、QPCR、Real-time PCR、real-time RT-PCR你真的區分的開嗎？
多少同學能將 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR區分開？有多少同學還在犯暈？今兒這貼，師兄就帶你區分區分，撥開那扇 PCR 迷霧。什么是?RT-PCR？RT-PCR就是逆轉錄 PCR（reverse transcription PCR）或者稱反轉錄PCR(reverse transcr
real-time PCR 數據分析
無論所使用的real-time PCR是何種型號，正確的數據分析對于獲得有效的實驗結果都是至關重要的。這里介紹有關real-time PCR數據分析的知識。?在討論基本分析過程之前，先介紹如何設計一個好的實驗。如果你是自己設計的引物和探針，那有助于下一步的工作。但是在有些情況下，人們使用出版文獻上的
real-time PCR體系的優化
實時定量PCR以其精確、快速、方便，越來越多的應用在科研、臨床及檢驗檢疫的各個領域。但是定量PCR是對精確性要求很高的實驗，實驗的條件對實驗結果的影響非常大。在此談談體系優化的問題，希望對做相關試驗研究的朋友有所幫助。1、基本參數的優化：1）MgCl2的濃度：在PCR反應中，MgCl2的濃度對酶的活
Real-time PCR 基礎知識
理論基礎?聚合酶鏈式反應作為一種革命性的方法在生物學研究的歷史中占據了重要的地位。以此為基礎發展出包括real-time PCR在內的多項應用技術。自誕生后real-time PCR技術持續發展，從簡單的增擴到整個PCR過程，real-time PCR表現出比PCR更敏感、更明確的定量分析特
Real-time PCR與RT-PCR的區別
實時熒光定量PCR原理所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。1．內標在傳統定量中的作用由于傳統定量方法都是終點檢測，即PCR到達平臺期后進行檢測，而PCR經過對數期擴增到達平臺期時，檢測重
實時熒光定量PCR（Real-Time PCR）實驗流程
一、RNA的提取(詳見RNA提取及反轉錄)不同組織樣本的RNA提取適用不同的提取方法，因為Real-Time PCR對RNA樣品的質量要求較高，所以，正式實驗前要選擇一款適合自己樣品的提取方法，在實驗過程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總rna的提取過程中，注意避免mRNA的斷裂;取2u