小鼠βactin基因的克隆表達（3）
（2）質粒的提取及酶切鑒定分析 質粒的提取按照質粒提取試劑盒的操作步驟進行，然后進行雙酶切鑒定。 管號 ① ② 質粒DNA 10μl 10μl BamHⅠ 1μl 0μl BamHⅠ Buffer（10×） 2μl 2μl SalⅠ 2μl 0μl ddH2O ......閱讀全文
克隆基因的表達（expression－of－cloned－gene）3
（3）原核生物的基因組基本上是單倍體，而真核基因組是二倍體。（4）如前所述，細菌多數基因按功能相關成串排列，組成操縱元的基因表達調控的單元，共同開啟或關閉，轉錄出多順反子(polycistron)的mRNA；真核生物則是一個結構基因轉錄生成一條mRNA，即mRNA是單順反子(monocistron)
克隆基因的表達（expression－of－cloned－gene）1
基因表達(gene expression)是指儲存遺傳信息的基因經過一系列步驟表現出其生物功能的整個過程。典型的基因表達是基因經過轉錄、翻譯，產生有生物活性的蛋白質的過程。基因的表達主要涉及到兩個過程：轉錄和翻譯。 ? 第一節影響外源基因表達的因素 利用基因工程技術高水平表達
克隆基因的表達（expression－of－cloned－gene）2
在雙鏈 DNA 分子中，只有一條鏈轉錄成 mRNA，這條鏈稱為有意義鏈(sense strand)，該基因的另一條鏈則稱反意義鏈(antisense strand)。在含有許多基因的 DNA 雙鏈中，每個基因的有意義鏈并不是在同一條 DNA 鏈上。也就是說，一條鏈上既具有某些基因的有意義鏈，
表達基因的克隆策略與分離表達基因序列的技術方法
人類基因組計劃的主要任務之一就是要從大片段基因組區域或整條染色體DNA 上鑒定出基因表達序列(gene expressed sequences)或轉錄單位(transcription units)。在人類基因組30億個堿基對中，發生轉錄的表達序列(即基因)僅占總序列的3～5％。基因組中絕大部
差異表達－cDNA－的重新擴增、克隆與測序實驗
試劑、試劑盒?瓊脂糖凝膠蒸餾水 DNA 點樣染料甘油蒸餾水 溴酚藍 二甲苯腈 FF溴化乙錠溶液任意引物（H-AP)cDNAdNTP 混合液未標記的錨定引物載體特異性引物PCR 緩沖液Tris-HClKClMgCl2明膠 TaqDNA 聚合酶儀器、耗材?電泳裝置離心管熱循環儀薄壁 PCR 管UV 透射
差異表達－cDNA－的重新擴增、克隆與測序實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠 蒸餾水 DNA 點樣染料 甘油 蒸餾水 溴酚藍 ? 二甲苯腈 FF 溴化乙錠
差異表達－cDNA－的重新擴增、克隆與測序實驗
從丙烯酰胺凝膠上切下潛在的差異表達 cDNA 之后，用同一種錨定-任意引物組合重新擴增 cDNA, 反應條件與最初 PCR 相同。重新擴增的產物，可以進行克隆和測序，以供進一步分析。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒瓊脂糖凝膠蒸餾水DNA 點樣染料甘油蒸餾水溴
重組表達cDNA克隆的血清學分析技術介紹
中文名稱重組表達cDNA克隆的血清學分析技術英文名稱serological analysis of recombinantly expressed cDNA clone;SEREX定 義用腫瘤患者血清從腫瘤細胞cDNA表達文庫中篩選和尋找腫瘤抗原基因的方法。應用學科免疫學（一級學科），免疫病理、臨
TEM105編碼基因的克隆與原核表達
由于一種細菌可同時產生多種β內酰胺酶，因此為了避免多種β內酰胺酶的相互干擾，我們應用肉湯稀釋法對產超廣譜β內酰胺酶（ ESBLs ）的 4 株肺炎克雷伯菌（ Kpn ）的 TEM 型編碼基因進行了原核表達。一、 材料和方法1． 菌株來源和表型鑒定： 4 株臨床菌株 No95 、 No96 、 No1
真菌纖維素酶基因的克隆與表達
近年來，隨著現代生物技術的迅猛發展，越來越多的真菌纖維素酶基因得到克隆和表達。經過對比發現，不同真菌菌株的同一類型的纖維素酶基因有較高的同源性，但同一菌種不同類型的纖維素酶基因間的同源性相對較低[8]。已知里氏木霉有8個纖維素酶基因得到克隆，包括編碼纖維二糖水解酶的cbh1、cbh2和編碼內切葡聚糖
真菌纖維素酶基因的克隆與表達
隨著現代生物技術的迅猛發展，越來越多的真菌纖維素酶基因得到克隆和表達。經過對比發現，不同真菌菌株的同一類型的纖維素酶基因有較高的同源性，但同一菌種不同類型的纖維素酶基因間的同源性相對較低[8]。已知里氏木霉有8個纖維素酶基因得到克隆，包括編碼纖維二糖水解酶的cbh1、cbh2和編碼內切葡聚糖酶的eg
酵母菌載體與克隆基因表達產物的檢測
實驗方法原理 實驗材料 包含lacZ融合基因的酵母菌株試劑、試劑盒 選擇培養基平板液氮Z緩沖液20 mg mL×-gal溶于二甲基甲酰胺儀器、耗材 30℃孵育箱圓形硝酸纖維素濾膜Whatman 3MM 濾紙實驗步驟 1)在含有適當選擇培養基的培養平板上點接種或者劃線接種酵母菌克隆，在30℃培養直至生
酵母菌載體與克隆基因表達產物的檢測
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 包含lacZ融合基因的酵母菌株 試劑、試劑盒 選擇培
酵母菌載體與克隆基因表達產物的檢測
構建LacZ融合載體研究酵母菌基因調控。由于這種檢測方法簡便而且靈敏度高，因此，酵母菌基因經常以LacZ基因的功能 部分作標簽，來指示待研究酵母菌基因的表達調節功能。融合蛋白被這樣構建：酵母基因的啟動子加上這個基因編碼蛋白的N端的幾個氨基酸殘基融合在LacZ基因的羧基 端，由此編碼的蛋白質片段仍保持
抗－體－可－變－區－（－V－區）的克隆、表達和修飾
基于 PCR 的克隆方案利用了可變區中框架區和先導區的保守序列，盡管用框架區中的保守序列可合成引物，用于克隆可變區，但會引起框架區中氨基酸的改變，從而影響抗原結合。因此，用保守的疏水先導序列合成引物是比較好的方案。實驗步驟基本方案 1 通 過 使 用 冗 余 引 物 克 隆 和 表 達 免 疫 球
微生物克隆系統使重組基因表達的篩選更加容易
傳統的手工挑取微生物克隆是一個費時煩人且易出錯的過程。微生物克隆篩選系統一小時可以完成3000 個克隆的挑取，而一個熟練的人工只能挑取約600 個克隆。自動化系統的速度相比人工提高了至少5 倍，最關鍵的是更加準確，有效性>98%。微生物克隆篩選系統的熒光成像模塊可以顯著減
微生物克隆系統使重組基因表達的篩選更加容易
傳統的手工挑取微生物克隆是一個費時煩人且易出錯的過程。微生物克隆篩選系統一小時可以完成3000 個克隆的挑取，而一個熟練的人工只能挑取約600 個克隆。自動化系統的速度相比人工提高了至少5 倍，最關鍵的是更加準確，有效性>98%。微生物克隆篩選系統的熒光成像模塊可以顯著減少下游的工作量，因為通過
微生物克隆系統使重組基因表達的篩選更加容易
傳統的手工挑取微生物克隆是一個費時煩人且易出錯的過程。微生物克隆篩選系統一小時可以完成3000 個克隆的挑取，而一個熟練的人工只能挑取約600 個克隆。自動化系統的速度相比人工提高了至少5 倍，最關鍵的是更加準確，有效性>98%。微生物克隆篩選系統的熒光成像模塊可以顯著減少下游的工作量，因為通過
戊型肝炎病毒線性抗原表位克隆及表達的初步研究
通過首位串聯可以實現HEV線性表位較高效的表達。 Cloning and expression a linear epitope from hepatitis E virusXIA Xiaobing, HUANG Rutong, LI Derong. (Institute of Microbio
安捷倫發布用于克隆、基因表達和定量的RTPCR試劑盒
2010年1月6日，北京 –安捷倫科技公司(NYSE:A)今天宣布推出了AffinityScript 一步法 RT-PCR試劑盒。這一試劑盒的問世意味著安捷倫Stratagene 產品部又一次攜市場領先的高性能解決方案挺進一步法RT-PCR市場，致力于幫助研究者改善終點法RT-PCR的實驗結果。
流式檢測膜蛋白表達的變化用多克隆抗體出結果的機會...
流式檢測膜蛋白表達的變化用多克隆抗體出結果的機會大嗎？流式的抗體和WB的抗體是不同的（有部分可以通用），多抗一般是大的變性蛋白為抗原制備的，而WB的中被檢測蛋白就是變性狀態，所以很吻合，而流失中一般蛋白還是保持了天然構象，所以產生的多抗可能不太好，而需要用很小特定的決定簇為抗原制備單克隆抗體。
含有目的基因真核表達－pEGFPC1載體的構建實驗_克隆法
實驗方法原理在設計引物時,一對引物兩端分別加了兩個酶切位點,這兩個酶切位點與pEGFP-C1 載體多克隆位點中的酶切位點相吻合,且位置和方向都合適。這樣, 目的基因片段和pEGFP-C1 載體經雙酶切后,由于酶切位點一致,在T4 DNA 連接酶的作用下就可以連接。實驗材料DNA 片段試劑、試劑盒pE
Gateway克隆技術BP反應構建入門載體與LR反應構建表達載...
Gateway克隆技術-BP反應構建入門載體與LR反應構建表達載體的區別? ? ? ?提到克隆、重組載體，就想到5字金言：分、切、連、轉、篩，“分”是指分離制備合格的待操作的DNA；“切”是指用序列特異的限制性內切酶切開載體DNA，或者切出目的基因；“連”是指用DNA連接酶將目的DNA同載體DN
我國學者培育出可同時表達4種熒光蛋白的克隆豬
記者在中科院廣州生物醫藥與健康研究院獲悉，該院近期成功培育出一種特殊的轉基因克隆豬，這種克隆豬在特定波長的激發光下可分別發出紅、黃、綠、青4種熒光，這是國際上首次獲得能夠同時表達4種熒光蛋白的轉基因克隆豬。 據研究人員介紹，該項成果的運用，將極大地促進含多種優良性狀的轉基因克隆豬的研究與產業化
用λ噬菌體－PL－啟動子在大腸桿菌中表達克隆基因實驗
實驗材料 載體和細菌菌株PL 表達載體陽性對照質粒試劑、試劑盒 考馬斯亮藍染色溶液或銀染溶液L-色氨酸SDS 凝膠加樣緩沖液SDS-聚丙烯酰胺凝膠靶基因或 cDNA 片段LB 瓊脂平板LB 培養基M9 基本培養基儀器、耗材 SorvallGSA 轉頭或相當的轉頭沸水浴振蕩培養器實驗步驟 材料緩沖液和
用λ噬菌體－PL－啟動子在大腸桿菌中表達克隆基因實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 載體和細菌菌株 PL 表達載體 陽性對照質粒 試劑、試劑盒 考馬斯亮藍染色溶液或銀染溶液
用λ噬菌體－PL－啟動子在大腸桿菌中表達克隆基因實驗
λ噬菌體 PL?啟動子是受控于溫度敏感阻抑物（cIts857) 的強效啟動子，阻抑物可在低溫下阻抑 PL?啟動子的轉錄，但在髙溫下不能。因此帶有λ噬菌體啟動子的載體必須以帶有 cIts857 基因的菌株作為宿主。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞
用克隆環分離細胞克隆
實驗方法原理將集落在瓷制克隆環、玻璃環、PTFE 環或者不銹鋼環中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一個孔或者直接種于 25 cm2?的培養瓶內。實驗材料胰蛋白酶試劑、試劑盒硅油儀器、耗材克隆培養環巴氏吸管生長培養基多孔板無菌鑷移液器粗頭筆實驗步驟1. 觀察細胞克隆，用氈制粗頭筆或 Nik
用克隆環分離細胞克隆
實驗方法原理將集落在瓷制克隆環、玻璃環、PTFE 環或者不銹鋼環中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一個孔或者直接種于 25 cm2 的培養瓶內。實驗材料胰蛋白酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒
用克隆環分離細胞克隆
實驗方法原理 將集落在瓷制克隆環、玻璃環、PTFE 環或者不銹鋼環中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一個孔或者直接種于 25 cm2 的培養瓶內。實驗材料 胰蛋白酶試劑、試劑盒 硅油儀器、耗材 克隆培養環巴氏吸管生長培養基多孔板無菌鑷移液器粗頭筆實驗步驟 1. 觀察細胞克隆，用氈制粗頭筆