Gateway克隆技術BP反應構建入門載體與LR反應構建表達載...
Gateway克隆技術-BP反應構建入門載體與LR反應構建表達載體的區別 提到克隆、重組載體，就想到5字金言：分、切、連、轉、篩，“分”是指分離制備合格的待操作的DNA；“切”是指用序列特異的限制性內切酶切開載體DNA，或者切出目的基因；“連”是指用DNA連接酶將目的DNA同載體DNA連接起來，形成重組的DNA分子；“轉”是指通過轉染的方法將重組的DNA分子導入宿主細胞中進行復制和擴增；“篩”則是從宿主群體中挑選出攜帶有重組DNA分子的克隆。實驗具體怎么做，細節大體是沒印象了，但是這5個字卻記得真真切切，都是血淚的教訓，現在說起來貌似很簡單，誰知道當初這5步歷經了多少次煉獄循環。 沒錯，在過去數十年，用限制性內切酶產生黏性末端，在DNA連接酶的作用下，連接兩個甚至更多片段的克隆方法，是載體構建的經典方案。但......閱讀全文
Gateway克隆技術BP反應構建入門載體與LR反應構建表達載...
Gateway克隆技術-BP反應構建入門載體與LR反應構建表達載體的區別? ? ? ?提到克隆、重組載體，就想到5字金言：分、切、連、轉、篩，“分”是指分離制備合格的待操作的DNA；“切”是指用序列特異的限制性內切酶切開載體DNA，或者切出目的基因；“連”是指用DNA連接酶將目的DNA同載體DN
Gateway技術：克隆、表達新方法
Gateway技術提供以下可能： 通過去除冗長的亞克隆步驟節省您的時間?同時將您的基因轉移到多個表達系統?在任何您選擇的系統――體外，細菌，酵母，昆蟲，或哺乳動物――分析表達一、一種更好的克隆方法Gateway技術能夠克隆一個或多個基因進入到任何蛋白表達系統（圖1）。這項強大的體外技術大大地簡化了基
Gateway技術：克隆、表達新方法
Gateway技術提供以下可能： 通過去除冗長的亞克隆步驟節省您的時間同時將您的基因轉移到多個表達系統在任何您選擇的系統――體外，細菌，酵母，昆蟲，或哺乳動物――分析表達一、一種更好的克隆方法Gateway技術能夠克隆一個或多個基因進入到任何蛋白表達系統（圖1）。這項強大的體外技術大大地簡化了基因克
Gateway技術：克隆、表達新方法
Gateway技術提供以下可能： 通過去除冗長的亞克隆步驟節省您的時間 同時將您的基因轉移到多個表達系統 在任何您選擇的系統――體外，細菌，酵母，昆蟲，或哺乳動物――分析表達 一、一種更好的克隆方法 Gateway技術能夠克隆一個或多個基因進入到任何蛋白表達系統（圖1）。這項強大的體外技術大大
Gateway的原理
Gateway也可以被視為一種克隆操作平臺：把目的基因克隆到入門載體（Entry Vector）后，就不用依賴限制性內切酶，而靠載體上存在的特定重組位點和重組酶，高效、快速地將目的基因克隆到其它的受體載體（Destination Vector，目的載體）上。Gateway的原理也是建立在噬菌體DNA
RNAi表達載體構建
近年來的研究表明，一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達，誘使細胞表現出特定基因缺失的表型， 稱為RNA干擾（RNA interference，RNAi）。siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子，能夠
RNAi表達載體構建
近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子,能夠
GeneCopoeia基因克隆技術相關研究
與PCR、qPCR等技術一樣，作為分子實驗室必備手段，分子克隆技術被廣泛用于多樣的基因功能研究。所謂分子克隆指的是在體外將核酸分子插入病毒、質粒或其他載體分子，構成遺傳物質的新組合，使之進入宿主細胞內并獲得持續穩定增殖能力和表達。?基因克隆技術的發展經歷3個階段，第一階段為經典的T4 DNA連接酶介
siRNA表達載體的構建
實驗方法原理 多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol
siRNA表達載體的構建
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U
siRNA表達載體的構建
siRNA表達載體構建可應用于：（1）作為后基因組時代基因功能分析的有力工具；（2）基因組學、細胞信號傳導通路分析；（3）藥物靶點篩選、疾病治療。實驗方法原理多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RN
植物表達載體的構建
實驗概要本實驗介紹了一種構建植物表達載體的方法。實驗步驟1. 植物正義表達載體的構建??? 1) 用SmaI和SacI雙酶切pTriplEx2-GhMT3a和植物表達載體pBI121：??? 2) 進行瓊脂糖凝膠電泳，回收GhMT3a片段和pBI121載體；??? 3) 連接：連接體系為：混勻后4-
RNAi表達載體構建（二）
（2）、序列同源性分析:?將潛在的序列和相應的基因組數據庫（人,或者小鼠,大鼠等等）進行比較,排除那些和其他編碼序列/EST同源的序列.例如使用BLAST（ www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/）選出合適的目標序列進行合成.并非所有符合條件的siRNA都一樣有效,其原因還不清楚
RNAi表達載體構建（一）
近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分
酵母表達載體的構建與酵母轉化
實驗概要本實驗介紹了酵母表達載體的構建、酵母轉化方法及酵母抗逆實驗。主要試劑試劑配制：1 .1 M Tris.Cl(pH 7.5)(100 ml)：12.1g Tris堿，加80 ml ddH2O，濃HCl調pH 7.5，定容至100 ml；2. 0.5 M EDTA(pH 8.0) (100 ml
真核基因表達載體的構建
提高目的基因在哺乳動物細胞中表達的策略：1、DNA水平：增加基因拷貝數(1)高拷貝載體；（2）基因共擴增；2、轉錄水平：利用強啟動子、增強子，可誘導啟動子，如CMV、Tet；3、翻譯水平：優化翻譯起始序列和非編碼區序列。本篇文章來源于網絡，如有異議請聯系我們，我們將在3個工作日內作出處理。
原核表達載體的構建介紹
1、獲得目的基因 （1）通過PCR方法：以含目的基因的克隆質粒為模板，按基因序列設計一對引物（在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點），PCR循環獲得所需基因片段。 （2）通過RT-PCR方法：提取總RNA，以mRNA為模板，逆轉錄形成cDNA第一鏈，以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物
基因編輯鼠－sgRNA表達載體構建
繼上次發表的Guide RNA設計和篩選的相關知識之后，希望大家還沒有忘記相關的操作和技巧，今天，我們就來和大家聊聊后續的實驗，在基因編輯鼠的過程中，sgRNA表達載體是如何構建的呢？在靶點篩選結束之后，下一步就要進行sgRNA載體構建。在構建表達載體前，應根據實驗目的選取合適的表達質粒。比如進行實
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
試劑、試劑盒 封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩沖液 125I 標記的蛋白質 A 或 125I 標記的免疫球蛋白放射性碘化第二抗體第一抗體LB 或 SOB 瓊脂平板儀器、耗材 空氣培養箱平頭鑷子 裝有防水黑墨水（印度墨水）并帶有 18 號針頭的注射器硝酸纖維
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 封閉緩沖液 氯仿 裂解緩沖液 檢測抗原-抗體復合物所用試劑 SM TNT 緩沖液 洗滌緩沖液
靶向－EGFR基因－siRNA表達載體的構建
實驗材料靶向EGFR基因siRNA試劑、試劑盒pSilencer2.1-U6載體EcoR IBamH IT4 DNA連接酶鼠抗人anti-EGFRFITC標記兔抗小鼠IgGCy3標記兔抗小鼠IgG甘油多聚甲醛二甲基亞砜儀器、耗材流式細胞儀熒光顯微鏡二氧化碳細胞培養箱酶標儀培養板蓋玻片載玻片利用Lip
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
檢測結合抗體的方法有以下 3 種：放射化學篩選，生色反應篩選及化學發光反應篩選。3 種方法的優缺點在本章導言中有所論述。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩
RANi術語表
RNAi?RNA干擾是最近發現的一種功能工具。當RNA導入一個細胞時，最終會引起細胞內互補mRNA的降解，從而導致基因功能活性的阻斷。PTGS?轉錄后基因沉默（post transcriptional gene silencing）；一種首先在植物中確定，然后發現在動物中也存在的現象。盡管PTGS最
sgRNA的設計與載體構建
實驗概要1. CRISPR的介紹：? ?? ? CRISPR的全稱為Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic ?Repeats(規律成簇的間隔短回文重復序列)。實際上就是一種基因編輯器，由于細菌自身具有降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免
LSCM熒光表達載體的選擇和構建
熒光表達載體的選擇和構建當對目的蛋白的功能或定位情況了解較少的情況下，可以嘗試把熒光蛋白位于目的蛋白的?N?末端或?C?末端。但當目的蛋白上已經存在定位信號或末端存在修飾，需要把熒光蛋白插入到目的蛋白理想的位置，這樣可以避免熒光蛋白的插入對蛋白功能或定位產生影響。由于綠色熒光蛋白存在缺陷，因此?GF
LSCM綠色熒光融合蛋白表達載體的構建
綠色熒光融合蛋白表達載體的構建?綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)?及其突變體能在各種不同的生物系統中表達，這對細胞生物學的研究具有重要意義。而熒光蛋白的折疊能力及其同細胞內蛋白的融合能力，使研究?者能直接在細胞體內觀察到蛋白質的特性。研究者不需要把蛋白質經過
真核表達載體pcDNA3.1GFP的構建
【原理】引物中設計入限制酶位點：由于PCR引物的5'末端可以增加一些非互補堿基，因此可以在兩引物的5'末端設計單限制酶或雙限制酶切位點。這樣得到的PCR產物用限制酶消化產生粘性末端，即可與有互補粘端的載體DNA重組。這種克隆方法效率較高，且當兩引物中設計不同酶切位點時，可有效地定向克
各家cDNA文庫構建試劑盒優缺點比較
Invitrogen的:采用的是Gateway技術：利用λ噬菌體位點特異重組系統的BP和LR雙向反應，首先將PCR產物用傳統方法克隆到Gateway化的入門載體，這個目標基因就可以迅速方便而且定向地重組到任何Gateway化的表達載體上.優點:1無需限制酶切、無需連接，只要利用重組酶就可以穿梭于任何
shRNA干擾載體構建
產品技術背景pRI系列載體是基于III類RNA聚合酶啟動子：人類H1啟動子的專用于哺乳動物細胞RNA干擾的載體。H1啟動子在哺乳動物細胞內合成類似siRNA分子的小分子RNA。由于H1啟動子有精確的轉錄起始位點和終止信號，H1啟動子轉錄產物精確生成人工設計的shRNA，shRNA經過RISC剪切后形
shRNA干擾載體構建
產品技術背景pRI系列載體是基于III類RNA聚合酶啟動子：人類H1啟動子的專用于哺乳動物細胞RNA干擾的載體。H1啟動子在哺乳動物細胞內合成類似siRNA分子的小分子RNA。由于H1啟動子有精確的轉錄起始位點和終止信號，H1啟動子轉錄產物精確生成人工設計的shRNA，shRNA經過RISC剪切后形